GB-T 42702-2023 纸、纸板和纸制品 抗菌性能的测定

GB/T42702—2023本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国造纸工业标准化技术委员会(SAC/TC141)归口。本文件起草单位：中轻(晋江)卫生用品研究有限公司、中国制浆造纸研究院有限公司、中轻纸品检验认证有限公司、福建恒安集团有限公司、珠海红塔仁恒包装股份有限公司、尤妮佳生活用品(中国)有限公司、住友精化(中国)投资有限公司、金佰利(中国)有限公司、国家纸张质量检验检测中心。I学兔兔标准下载纸、纸板和纸制品抗菌性能的测定烧瓶试验、抑菌成分转移测定试验、高吸水材料抑菌性能试验和长效防霉性能试验。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于WS/T650—2019抗菌和抑菌效果评价方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。采用化学或物理方法杀灭或妨碍细菌生长繁殖，可减少其数量以及活性的过程。采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。4测定方法和试验菌的选择根据样品性能及使用方式选择合适的测定方法。对于含有溶出性抗菌成分的样品，或纤维原料(含有非溶出性抗菌成分)具有抗菌功能且吸水性较好的样品，可选择载体抗菌试验(第5章)进行定量测定；对于含有溶出性抑菌成分的样品，如果进行定性测定，可选择抑菌环试验(第6章);对于含有非溶出性抗菌成分的样品，经鉴定试验确认后，可选择振荡烧瓶试验(第7章)进行定量测定。样品吸水性判断方法：将样品裁成尺寸为2.0cm×3.0cm的试样(试样可叠放，但片数不得超过3片),在试样表面滴加100μL菌悬液，如果菌悬液能被试样完全吸收，则视为该样品为吸水性较好的根据其样品特性选择相应的测定方法：在鉴别食品接触用纸、纸板和纸制品中的抑菌成分是否发生1学兔兔标准下载GB/T42702—2023转移时，可选择抑菌成分转移测定试验(第8章);对于高吸收性树脂及含高吸收性树脂的吸收芯体，可选择高吸水材料抑菌性能试验(第9章);对于具有长效防霉作用的纸、纸板和纸制品，可选择长效防霉性能试验(第10章)。进行抗菌(抑菌)性能测定时，若无特殊说明，应使用方法中规定的细菌进行试验，若标明对真菌或特定微生物有抗菌(抑菌)作用，则应使用方法中规定的真菌或特定微生物进行测定。5载体抗菌试验5.1适用范围本方法适用于含有溶出性抗菌成分的纸、纸板和纸制品及其原材料，或纤维原料(含有非溶出性抗菌成分)具有抗菌功能且吸水性较好的样品，进行定量抗菌性能测定。试验所用试剂应为分析纯或适合于微生物试验用。宜使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。氯化钠5g牛肉膏3g琼脂15g～20g蒸馏水1000mL葡萄糖40g琼脂20g磷酸氢二钠磷酸二氢钾蒸馏水2.83g为7.2～7.4,2℃~8℃保存备用。2Ⅱ级生物安全柜。学兔兔标准下载GB/T42702—2023恒温培养箱：温控精度±1℃。旋涡式振荡器。高压蒸汽灭菌锅。细菌：大肠杆菌(8099或CICC10899)或大肠杆菌(ATCC25922),金黄色葡萄球菌(ATCC6538根据产品特定用途所需用的其他菌株。在无菌条件下打开样品包装，避开样品边缘，将样品剪成2.0cm×3.0cm的试样，每片试样应确保试验过程中的菌悬液被完全吸收(滴加菌液后倾斜平皿，无游离液体流出),如1片试样无法满足要求，可适当增加试样的片数(不应超过3片)。若试样需进行灭菌处理，可采用高压灭菌法(121℃,103kPa,15min),如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷、紫外线照射或其他合适的方法对试样进行灭菌。若试样进行过灭菌处理，应在报告中注明灭菌方式。可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抗菌处理的样品作为对照样，此时，试验中对照样的层数应与试样相同；也可选用经验证对微生物生长不产生影响的对照样品(如不含抗菌成分，与试样同步操作，作用相同时间，接种相同菌量，回收菌数与空白试验回收菌数的比值>90%的样品),将其裁剪成与待测试样同等大小作为对照样。对照样应经高压消毒灭菌(121℃,103kPa,15min),如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法进行灭菌。报告中应注明对照样品的种类和灭菌方式。取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基(真菌为沙氏琼脂培养基)新鲜斜面培养物(18h~24h),用5.0mL的PBS洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用PBS稀释至适宜浓度，试验时每份对照组回收菌数应为1.0×10⁴CFU～5.0×10⁴CFU。5.4试验步骤取试验样片和对照样片各1份，分别置于无菌平皿内，用新鲜制备的菌悬液分别在试验样片与对照样片上均匀滴加100μL,每份对照组回收菌数应为1.0×10⁴CFU～5.0×10'CFU。开始计时，作用至说明书规定的时间(最长不超过120min),用无菌镊子将试验样片和对照样片分别放入5mL的PBS中，充分混匀，进行10倍系列稀释，选择适宜稀释度，吸取0.5mL接种平皿，每个稀释度接种2个平皿，将冷却至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基或沙氏琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15mL～20mL,转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平皿，36℃±1℃培养48h(细菌)或72h(真菌),进行活菌菌落计数。试验重复3次，分别计算抑菌率。5.5计算公式按公式(1)计算抑菌率：3学兔兔标准下载GB/T42702—2023…………(1)式中：K—抑菌率，%;N。—对照样平均回收菌落数，单位为每份对照样菌落形成单位(CFU/份);N,——试样平均回收菌落数，单位为每份试样菌落形成单位(CFU/份)。选择菌落数在20CFU～200CFU之间的平板计数菌落数，若所有稀释度的平板菌落数均小于20CFU,则选用最低稀释倍数菌落数计算结果。分别计算3次重复试验的抑菌率，抑菌率结果修约至小数点后第1位。若被测试样各稀释度菌落数均为0,或计算结果修约后为100.0%,则抑菌率记为>99.9%。5.6结果表述5.6.1各次抑菌率均≥50%,表明该样品相对于对照样具有抗菌作用。5.6.2各次抑菌率均≥90%,表明该样品相对于对照样具有较强的抗菌作用。5.7注意事项试验过程中，对于实际使用时间较短的产品(如抑菌生活用纸),作用时间不应超过5min;其他产品应不超过120min。6抑菌环试验6.1适用范围本方法适用于含溶出性抑菌成分，且厚度不超过4.0mm的片(块)状物的纸、纸板和纸制品及其原材料的抑菌性能定性测定；也可用于鉴别试样中是否含有溶出性抑菌成分。6.2试验材料6.2.1培养基和试剂同5.2.1。6.2.2试验器具恒温培养箱：温控精度±1℃。旋涡式振荡器。高压蒸汽灭菌锅。6.2.3试验菌同5.2.3。6.3试样、阴性对照样和试验菌制备6.3.1试样的制备在无菌条件下打开样品包装，避开样品边缘，将其制成直径为5.0mm、厚度不超过4.0mm的圆片4学兔兔标准下载(块),每4片(块)一组。若试样需进行灭菌处理，可采用高压灭菌法(121℃,103kPa,15min),如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷、紫外线照射或其他合适方法对试样进行灭菌。若试样进行过灭菌处可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抑菌处理的样品作为阴性对照样，此时，试验中对照样的层数应与试样相同；也可选用经验证不含溶出性抑菌成分的纸或纸板(如定性滤纸),将其制成与待测试样同等大小，作为阴性对照样。阴性对照样应经高压消毒灭菌(121℃,103kPa,15min),如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法进行灭菌。报告中应注明对照样品的种类和灭菌取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基(真菌为沙氏琼脂培养基)新鲜斜面培养物(18h～24h),用PBS洗下菌苔并做适当稀释，制成浓度为5×10⁵CFU/mL～5×10⁶CFU/mL的菌悬液，用无菌棉拭子蘸取该菌悬液在适宜的培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动60°,最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平板，置于室温干燥5min。每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面，阴性对照样片贴于平板中心位置，试验样片贴于四周。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置于36℃±1℃培养16h～18h后测量结果。试验重复3次。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录，测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行，测量其直径应以抑菌环外沿为界。6.5抑菌作用判别阴性对照样片应无抑菌环产生，否则试验无效。试验样片抑菌环直径>7mm者，判别为具有抑菌3次重复试验，共12个样片，均有抑菌作用结果者，表明试样具有溶出性抑菌作用，否则表明试样无溶出性抑菌作用，即样品中不含有溶出性抑菌成分。7振荡烧瓶试验本方法适用于含非溶出性抗菌成分的纸、纸板和纸制品及原材料的抗菌性能测定，不适用于含有高吸收性树脂的样品。在进行振荡烧瓶试验前，需要鉴定试验样品抗菌成分是否可溶出，只有不含溶出性抗菌成分，才能选用振荡烧瓶法进行抗菌性能测定。如果含有溶出性抗菌成分，则参照第5章载体抗菌试验测定抗菌学兔兔标准下载7.2试验材料恒温培养箱：温控精度±1℃。在无菌条件下打开样品包装，避开样品边缘，将样品剪成约为2mm×2mm的小块，对于定量较低的样品(如生活用纸等),可将其剪成约为10mm×10mm的小块，称取0.75g试验样片分装包好，每个样品至少称取6份试样备用。必要时，可采用高压灭菌法(121℃,103kPa,15min)对试样进行灭菌，如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法对试样进行灭菌。若试样进行过灭菌处可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抗菌处理的样品作为对照样，此时，试验中对照样的层数应与试样相同；也可选用经验证对微生物生长不产生影响的对照样品(如不含抗菌成分，与试样同步操作，作用相同时间，接种相同菌量，回收菌数与空白试验回收菌数的比值>90%的样品),将其裁剪成与待测试样同等大小作为对照样片。对照样应经高压消毒灭菌(121℃,103kPa,15min),如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷、紫外线或其他合适方法进行灭菌。报告中应注明对照样品的种类和灭取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基(真菌为沙氏琼脂培养基)新鲜斜面培养物(18h～24h),用5.0mL的PBS洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用PBS稀释成适宜浓度，向70mL的PBS中加入5mL菌悬7.4非溶出性抗菌材料的鉴定取至少1g样品置于尽量少的无菌蒸馏水中浸泡24h,并确保在浸泡后至少可以吸取20mL游离液体，按照WS/T650—2019中5.1.1悬液定量抑菌试验法验证浸泡液是否具有抑菌作用，试验中试验菌与浸泡液作用时间为2h;或将样品裁成直径5mm圆片，采用抑菌环试验鉴别抗菌产品中是否含有6学兔兔标准下载GB/T42702—2023可溶性抑菌成分。若样品浸泡液无抑菌作用或采用抑菌环法判定为不含有溶出性抑菌物质，说明样品属非溶出性抗菌材料。7.5试验步骤7.5.1试验组：取已提前备好的2份试验样片分别置于250mL锥形瓶中，向锥形瓶中加入70mL的PBS和5.0mL新鲜制备的菌悬液，试验菌在锥形瓶中浓度应为1×10⁴CFU/mL～5×10⁴CFU/mL。7.5.2将试验组中的一个锥形瓶振荡混匀，吸取1mL内容物，作为试验组振荡前样液。7.5.3将试验组另一个锥形瓶固定于振荡摇床()上，以250r/min～300r/min振摇1h,吸取7.5.4用PBS对振荡前和振荡后样液进行10倍系列稀释，选择适宜稀释度，各吸取1mL内容物接种平皿，每个稀释度接种2个平皿，将冷却至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基或沙氏琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15mL～20mL,转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平皿，36℃±1℃培养48h(细菌)或72h(真菌),进行活菌菌落计数。7.5.5试验同时设对照样片组和不加样片组。对照样片组使用对照样片代替待测试验样片，其他操作程序与试验组相同。不加样片组除不加试验样片外，其他操作程序与试验组相同。7.5.6试验重复3次，分别计算每次试验中试验样片和对照样片的抑菌率。7.6计算公式按公式(2)分别计算试验样片和对照样片抑菌率：K—抑菌率，%;…………(选择菌落数在20CFU～200CFU之间的平板计数菌落数，若所有稀释度的平板菌落数均小于20CFU,则选用最低稀释倍数菌落数计算结果。每次重复试验分别计算抑菌率，试验组抑菌率使用试验样片振荡前后菌落数进行计算，对照组抑菌率使用对照样片振荡前后菌落数进行计算，当试验样片振荡前回收菌落数明显少于对照样片振荡前菌落数时，应使用对照样片振荡前菌落数代替试验样片振荡前菌落数进行计算。抑菌率结果修约至小数点后第1位，并计算每次试验中试验样片和对照样片的抑菌率差值。试验中，在实验误差允许的范围内，如果试验样片和对照样片出现振荡后菌落数高于振荡前菌落数7.7结果表述7.7.1不加样片组活菌计数在1.0×10⁴CFU/mL～5.0×10⁴CFU/mL之间，且振荡前后平均菌落数差值在算术平均值的10%以内，试验有效。7.7.2各次试验中，试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值均>26%,表明样品相对于对照样具有抗菌作用。7.8注意事项振荡前应将振荡摇床上的锥形瓶固定牢，以免碰破。GB/T42702—20238抑菌成分转移测定试验8.1适用范围本方法适用于测定食品接触用纸和纸板中的抑菌成分是否发生转移。8.2试验材料试验所用试剂应为分析纯或适合于微生物试验用。宜使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。氯化钠5g牛肉膏3g蒸馏水1000mL蛋白胨5g胰酪蛋白5g葡萄糖40g酪蛋白胨、酶水解胰蛋白胨蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水蛋白胨葡萄糖麦芽糖琼脂蒸馏水8学兔兔标准下载GB/T42702—2023蛋白胨盐溶液酶水解酪蛋白胨氯化钠蒸馏水浓度0.03U/mL。Ⅱ级生物安全柜。恒温培养箱：温控精度±1℃。旋涡式振荡器。高压蒸汽灭菌锅。恒温水浴锅。离心机：转速能达到4000r/min。冲样器：可将试样制成直径为10mm～15mm的圆形测试片，可进行消毒。试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具。细菌：枯草芽孢杆菌(ATCC6633)。根据产品特定用途所需用的其他菌株。8.3试样、对照样和菌悬液制备在无菌条件下打开样品包装，食品接触面作为试验组，若两面均与食品接触或两面无法确定是否与食品接触时，则两面都应进行测试，每一面均应视为独立样品测试。避开样品边缘，将试样制成直径为10mm～15mm的圆片。8.3.2阳性对照样枯草芽孢杆菌阳性对照样：取无菌定性滤纸，制成与试样同等大小的圆片。用青霉素G溶液()浸没无菌定性滤纸，自然晾干。黑曲霉阳性对照样：取无菌定性滤纸，制成与试样同等大小的圆片。用两性霉素B溶液()浸没无菌定性滤纸，自然晾干。8.3.3枯草芽孢杆菌孢子悬浮液的制备枯草芽孢杆菌接种至营养琼脂斜面上并在30℃±2℃下培养7d,获得枯草芽孢杆菌的工作9学兔兔标准下载GB/T42702—2023培养物。培养后，将试管保存在2℃~8℃。取10支枯草芽孢杆菌斜面培养物，每支用2.0mL～3.0mL的无菌蛋白胨盐溶液冲洗，制得菌悬液，将每支斜面制得的菌悬液分别接种在10块营养琼脂平皿上，30℃±2℃下培养7d。每个平皿用3.0mL的无菌蛋白胨盐溶液冲洗菌落，收集10个平皿的孢子悬液。将孢子悬液转移至无菌瓶中，85℃振荡水浴30min,加热后，将孢子悬浮液全部转移至40.0mL无菌离心瓶中。4000r/min离心10min,弃去上层清液。用30.0mL无菌蛋白胨盐溶液冲洗残留物，然后再次离心。重复洗涤3次。将得到的枯草芽孢杆菌孢子保存在20.0mL的无菌蛋白胨盐溶液中，制得枯草芽孢杆菌孢子悬浮液。该悬浮液可以在2℃~8℃下保存，保存时间不超过4周。8.3.4黑曲霉孢子悬浮液的制备黑曲霉接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面上并在25℃±2℃下培养5d,获得黑曲霉的工作培养物。培养后，将试管在2℃~8℃下保存。取5支黑曲霉工作培养物，用接种环将每支黑曲霉工作培养物分别接种在5块沙氏葡萄糖琼取无菌蛋白胨盐溶液湿润接种环，将孢子转移至10mL无菌蛋白胨盐溶液中。该悬浮液可以在2℃~8℃下保存，保存时间不超过4周。8.4试验步骤每个样品至少准备3个培养皿进行试验。试验时与食品接触的一面朝下与培养基接触，若无法确定食品接触面，样品两面都应进行测试，每一面均应视为独立样品。8.4.2枯草芽孢杆菌测试试验组：将改良营养琼脂培养基()冷却至60℃以下，加入保存的枯草芽孢杆菌孢子(见),使孢子浓度为1.0×10⁴个/mL～5.0×104个/mL,小心摇动使孢子悬浮液均匀分布，取约15mL倒入培养皿中，在培养基凝固前，用无菌钳或镊子在每个平皿上放置3个测试片。用合适的无菌器具轻轻向下压测试片，确保样品与琼脂之间没有空隙。试验重复3次，每个平皿包含3个测试片，共9个测试片。每次试验同时设一个阴性对照组和一个阳性对照组。阴性对照组不放试样，其他操作程序与试验组相同；使用枯草芽孢杆菌阳性对照样()代替待测试样，其他操作与试验组相同。8.4.3黑曲霉测试试验组：将改良沙氏葡萄糖琼脂培养基()冷却至60℃以下，加入保存的黑曲霉孢子悬浮液(见),使孢子浓度为1.0×105个/mL～5.0×105个/mL,小心摇动使孢子悬浮液均匀分布，取约15mL倒入培养皿中，在培养基凝固前，用无菌钳或镊子在每个平皿上放置3个测试片。用合适的无菌器具轻轻向下压测试片，确保样品与琼脂之间没有空隙。试验重复3次，每个平皿包含3个测试片，共9个测试片。每次试验同时设一个阴性对照组和一个阳性对照组。阴性对照组不放试样，其他操作程序与试验组相同；使用黑曲霉阳性对照样()代替待测试样，其他操作程序与试验组相同。将8.4.2或8.4.3制备的培养皿在5℃土3℃条件下保存2h。翻转平皿，将其转移至培养箱中，学兔兔标准下载30℃±2℃培养3d(枯草芽孢杆菌)或25℃±2℃培养5d(黑曲霉)。培养过程中，应每天观察平皿中是否有抑菌区出现。8.5.1使用游标卡尺测量测试片周围半透明区域宽度，当半透明区域宽度≥2mm时，判定该测试片存8.5.2若测试片周围菌落形态发生改变，间距变宽，直径变大，但测试片周围没有≥2mm的半透明区8.5.3若测试片被微生物污染，仅在污染微生物周围存在≥2mm的半透明区域，但测试片周围没有≥2mm的半透明区域，判定该测试片不存在抑菌区。8.6.2每个阳性对照样周围均应观察到宽度≥2mm的抑菌区，否则，应8.6.39个测试片中至少有2个存在抑菌区，则判定样品有抑菌成分转移。8.7.2在试验过程中，应每天观察试验结果，试验现象应逐天观察，若有抑菌区出现则可判定样品有抑9高吸水材料抑菌性能试验本方法适用于高吸收性树脂及含有高吸收性树脂的吸收芯体抑菌性能的测定。在进行本试验前，需要鉴定其抑菌成分是否可溶出，并在报告中注明非溶出性抑菌材料的鉴定结果。对于含有高吸收性树脂的纸制品(如卫生巾、纸尿裤等),如果声称高吸收性树脂或含高吸收性树脂的吸收层具有抑菌作用，可按此方法进行产品中含高吸收性树脂吸收芯体层的抑菌性能测定。蛋白胨氯化钠牛肉粉葡萄糖蒸馏水吐温80。学兔兔标准下载其他培养基和试剂同5.2.1。9.2.2试验器具Ⅱ级生物安全柜。恒温培养箱：温控精度±1℃。旋涡式振荡器。高压蒸汽灭菌锅。尼龙布：孔径为61μm(250目)。尼龙布袋：孔径为61μm(250目),10cm×15cm。9.2.3试验菌同5.2.3。9.3试样、对照样和菌悬液的制备9.3.1试样的制备若样品为高吸收性树脂或复合吸收芯体，可直接用于试验；若样品为含高吸收性树脂的卫生巾、纸尿裤等纸制品，则选取具有抑菌作用且含高吸收性树脂的吸收芯体部分，将其剪成5mm×5mm的大小，所取试样不应包含面层和底膜材料。9.3.2对照样的制备可选用与待测样品同等材质、同等大小但不含抑菌成分或未经抑菌处理的样品作为对照样，此时对照样应与试样选自相同部位。也可选用经验证对微生物生长不产生影响的对照样品(如不含抑菌成分，与试样同步操作，作用相同时间，接种相同菌量，回收菌数与空白试验回收菌数的比值>90%的样品),将其剪成5mm×5mm大小，经高压消毒灭菌(121℃,103kPa,15min)后，备用。报告中应注明对照样品的种类。9.3.3菌悬液的制备取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基(真菌为沙氏琼脂培养基)新鲜斜面培养物(18h~24h),用5.0mL营养肉汤洗下菌苔，使菌悬浮均匀后继续用营养肉汤稀释至1.0×10³CFU/mL~9.4吸液量的测定取测试样品和对照样品，各称1.00g±0.01g,各自放入10cm×15cm的尼龙布袋中。分别将含有测试样品、对照样品的尼龙布袋以及不含样品的空尼龙布袋称重后放入营养肉汤培养基中，浸泡30min(将样品压到液面下，注意去除气泡)后，吊起尼龙布袋20min后再分别称重。测试样品、对照样品以及空的尼龙布袋分别测定三次吸液量取平均值。试样和对照样吸液量的组内误差率不应超吸液量按公式(3)和公式(4)计算： 吸液量组内误差按公式(5)计算： 式中：S;—各个样品所吸收的营养肉汤培养基质量，单位为克(g);Mj—吸收后的含有吸液样品的尼龙布袋的质量，单位为克(g);B--吸收后尼龙布袋的质量，单位为克(g);mj——吸收前样品的质量，单位为克(g);V—样品平均吸液量，单位为克(g);E—吸液量组内误差率。9.5非溶出性抑菌材料的鉴定取约1g样品于无菌锥形瓶中，根据9.4计算的样品平均吸液量进行换算，向其中加入(V+20)mL的无菌生理盐水，浸泡24h,剪取适宜大小的无菌尼龙布于锥形瓶中，用移液枪轻抵在尼龙布上吸取浸泡液，应确保吸取的浸泡液体积满足后续检验需求，若可吸取的浸泡液体积不足，应适当增加用于浸泡样品的生理盐水体积。按照WS/T650—2019中5.1.1悬液定量抑菌试验法验证浸泡液是否具有抑菌作用，试验中试验菌与浸泡液作用时间为2h。若浸泡液无抑菌作用，则判定该样品为非溶出性抑菌材料。9.6试验步骤9.6.1一般要求试验组和对照组应使用相同的菌悬液进行试验。试验重复3次，分别计算抑菌率。9.6.2试验组取0.200g±0.002g试样分别放入2支无菌试管中，根据9.4计算的试样平均吸液量进行换算，向试样中轻轻滴入试样吸液量同体积的菌悬液，菌悬液不应接触到试管壁。静置15min让试样充分吸收菌悬液后，轻轻地盖上试管盖，不应振荡或搅拌。取1支试管作为“0”培养时间试样。另外1支试管在36℃±1℃培养24h,作为培养后试样。向试验组“0”培养时间和培养后的试样中加入相应吸液量2倍的含2%吐温80的0.85%氯化钠溶液，盖紧盖子，用旋涡式振荡器()充分振荡，振荡5次，每次5s。剪取适宜大小的无菌尼龙布于试管中，用移液枪轻抵尼龙布，分别吸取振荡后的“0”培养时间和培养后的试样样液，使用0.85%的氯化钠溶液进行10倍系列稀释，选择适宜稀释度，取1.0mL接种平皿，每个稀释度接种2个平皿，将冷却至40℃~45℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(真菌)注于已加入样液的平皿中，每平皿15mL～20mL,转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平皿，36℃±1℃培养48h(细菌)或72h(真菌),进行活菌菌落计数。9.6.3对照组取0.200g±0.002g对照样分别放入2支无菌试管中，根据9.4计算的对照样吸液量进行换算，分别向对照样中轻轻滴入对照样吸液量同体积的菌悬液，菌悬液不应接触到试管壁。静置15min让对照样充分吸收菌悬液后，轻轻地盖上试管盖，请勿振荡或搅拌。取1支试管作为“0”培养时间对照样。另外1支试管在36℃±1℃培养24h,作为培养后对照样。向对照组中的“0”培养时间和培养后对照样中分别加入相应吸液量2倍的含2%吐温80的0.85%的氯化钠溶液，盖紧盖子，用旋涡式振荡器充分振荡，振荡5次，每次5s。剪取适宜大小的无菌尼龙布于试管中，用移液枪轻抵尼龙布，分别吸取振荡后的“0”培养时间和培养后的对照样品样液，用0.85%的氯化钠溶液进行10倍系列稀释，选择适宜稀释度，取1.0mL接种平皿，每个稀释度接种2个平皿，将冷却至40℃~45℃的营养琼脂培养基或沙氏琼脂培养基注于已加入样液的平皿中，每平皿15mL～20mL,转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平皿，36℃±1℃培养48h(细菌)或72h(真菌),进行活菌菌落计数。9.7计算公式按公式(6)计算抑菌率：…………式中：K—抑菌率，%;N。——接触24h后对照样平均菌落数，单位为每毫升菌落形成单位(CFU/mL);N、—接触24h后试样平均菌落数，单位为每毫升菌落形成单位(CFU/mL)。选择菌落数在20CFU～200CFU之间的平板计数菌落数，若所有稀释度的平板菌落数均小于20CFU,则选用最低稀释倍数菌落数计算结果。3次重复试验分别计算抑菌率，抑菌率结果修约至小数点后第1位。若被测试样各稀释度菌落数均为0,或计算结果修约后为100.0%,则抑菌率记为>99.9%。9.8试验成立条件对照组"0"时回收菌量不少于1.0×10³CFU/mL～1.0×10⁴CFU/mL,且培养24h后的回收菌量对数值(lg)比“0”时增加2以上。9.9注意事项9.9.1吸取回收液接种培养时，如混入高吸收性树脂可能会影响试验结果，应重新进行试验。9.9.2某些菌种在不同对照样中的回收菌数可能差异较大，因此对照样品的选择对抑菌率测定结果可能会产生较大影响。9.9.3采用本方法进行测定时，抑菌率>99%可以认为样品相对于对照样具有较好的抑菌作用。9.9.4若样品中含溶出性抑菌成分，采用本方法测得的抑菌率结果相对较高。10长效防霉性能试验10.1适用范围本方法适用于测定纸、纸板和纸制品的长效防霉性能，如壁纸等。10.2设备和材料10.2.1恒温恒湿培养箱：温度能保持在28℃±2℃,相对湿度能保持在90%±5%。10.2.2Ⅱ级生物安全柜。10.2.4冰箱：温度能保持在2℃~8℃。10.2.5高压蒸汽灭菌锅。学兔兔标准下载GB/T42702—2023试验所用试剂应为分析纯或适合于微生物试验用。宜使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。磷酸二氢钾2.5g硫酸镁0.2g硝酸铵3.0g硫酸亚铁0.1g磷酸氢二钾2.0g琼脂20g无机盐营养液(见10.3.1)1000mL马铃薯200g蔗糖20.0g琼脂20.0g聚山梨醇酯80(吐温80)。用100mL蒸馏水加0.05g分散剂(10.3.5),充分混匀后，按每只10mL分装到无色玻璃试管中，放入高压灭菌锅，于121℃、1kPamin球毛壳霉(CGMCC3.3601绳状青霉(CGMCC3.3875绿色木霉(CGMCC3.2941或ATCC或ATCC或ATCC6205);学兔兔标准下载GB/T42702—2023防霉试验使用的菌株应由省级或国家级的菌种保藏机构提供。如果需要，可增加