东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的产酶情况及联合药敏试验

东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的产酶情况及联合药敏试验

铜绿假单胞菌（pa）是临床上常见的细菌之一。随着氨基丙烯酸酯等碳青霉素的广泛应用，细菌产生了一种含有糊精素的碳青霉素酶，包括丝氨酸酶和金属酶，这给抗感染治疗带来了很大困难。材料和方法地区二、三级临床感染标本收集2018年1月至2021年6月东莞地区二、三级共10家综合性医院在临床感染标本中分离的耐碳青霉烯类的PA216株，菌株为患者的第一株菌株，剔除重复株。菌株、仪器与标准品血平板、麦康凯平板、M-H平板、Oxiod药敏纸片(江门凯林有限公司)，Vitek2-Compact全自动微生物鉴定仪、鉴定及药敏卡(法国生物梅里埃公司)，亚胺培南缓冲液(上海科原实业发展有限公司)，联合药物成品药敏板(温州康泰公司)，抗菌药物标准品(北京中检所)。c钢绞线c钢大肠埃希菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853(广东省临床检验中心)。肺炎克雷伯菌ATCCBAA1705产酶阳性株和肺炎克雷伯菌ATCCBAA1706产酶阴性株(温州康泰公司)。菌株鉴定及药敏试验用Vitek2-Compact全自动微生物鉴定仪和GN鉴定卡、GN09药敏卡进行菌株鉴定及药敏试验，按2020年CLSI规定标准进行。.采用2017年CLSI推荐的eCIM试验检测CRPA是否产碳青霉烯酶edta与3-氨基苯酸钠溶液采用纸片扩散法，制备0.5麦氏单位菌悬液，涂布于M-H琼脂平板上，张贴4张亚胺培南(每片10μg)药敏纸片，纸片中心距离≥25mm，在其中三张纸片上分别滴加10μLEDTA溶液、10μL3-氨基苯硼酸溶液、10μLEDTA溶液+10μL3-氨基苯硼酸溶液，35℃培养过夜后判读结果。若含EDTA溶液抑制剂的亚胺培南抑菌圈直径与单药相差≥5mm以上，该菌株产生金属β-内酰胺酶，若含3-氨基苯硼酸抑制剂的亚胺培南抑菌圈直径与单药相差≥5mm以上，该菌株产丝氨酸酶。抗菌药物的联合药敏试验单个抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)检测：采用微量肉汤稀释法分别对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、阿米卡星、左氧氟沙星进行单个药敏MIC值检测。按各药物折点需求，进行对倍浓度稀释，加入到微量孔中。制备0.5麦氏的菌液，加入到药敏试验培养基，菌液和培养基的比例为1:100，每孔100μL接种到含有不同药物浓度梯度的微量孔中，经35℃16～20h培养，以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)，质控菌株为ATCC27853。联合药敏试验：采用微量棋盘释释法，对头孢他啶、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦+头孢哌酮/舒巴坦4个单药分别与阿米卡星、左氧氟沙星进行8个组合，检测对CRPA体外联合的抗菌效应。根据单药测定的MIC值，选取2倍MIC为最高浓度，依次对倍稀释8个稀释度，分别选取所需两种药物以1:1的比例各50μl加入96孔平板的横轴和纵轴混匀，再用移液器取100μl菌液接种到微量孔中，35℃培养16～20h，按2020年CLSI的判定标准读取MIC结果。部分抑菌(Fractionalinhibitoryconcentration，FIC)指数的计算与判读标准：FIC为联合用药时各药的MIC值分别除以单药时MIC值商的和，即FIC指数=MICA药联用/MICA药单用+MICB药联用/MICB药单用。抗菌药物的联合效应：FIC指数≤0.5为协同；0.5<FIC≤1为相加作用；1<FIC≤2.0为无关作用，FIC>2.0为拮抗作用.采用SPSS17.0软件进行数据统计分析。结果.216株CRPA碳青霉烯酶表型检测结果中产碳青霉烯酶的构成比为38.4%，不产酶的构成比为61.6%，具体情况见表1。pa和crpa对imp的耐药情况2018—2020年东莞地区CRPA检出率为12.9%～14.6%，PA对亚胺培南(IMP)和美罗培南(MEM)耐药率分别为9.0%～11.3%和7.1%～9.1%，CRPA对IMP和MEM耐药率分别为93.4%～97.8%和71.2%～71.8%，具体情况见表2。阿米卡星/mic抗菌药物头胞他啶(CAZ)、头孢哌酮/舒巴坦(CSL)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、美罗培南(MEM)单药和左氧氟沙星(LEV)及阿米卡星(AMK)联合应用时的MIC不同协同能力描述联合药物FIC指数的构成比(%)结果中，以协同或相加作用构成比为主，协同最高构成比为CAZ+LEV67.1%，相加最高构成比为CSL+AMK46.8%，无关作用构成比为8.3%～39.8%，拮抗作用构成比相对较低为1.4%～5.6%，具体情况见表4。讨论.近年来PA对碳青霉烯类抗生素耐药率不断上升。据报道各类产丝氨酸酶、金属酶和不产碳青霉烯酶的产酶在216株CRPA碳青霉烯酶表型检测结果中，产碳青霉烯酶共83株，占38.4%(83/216)，其中单一产丝氨酸酶为17.6%(38/216)，单一产金属酶为13.9%(30/216)，同时产丝氨酸酶+金属酶为6.9%(15/216)，不产碳青霉烯酶为61.6%(133/216)。本研究中产碳青霉烯酶只是PA对碳青霉烯类耐药的机制之一，不是对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制，与刘涛等报道相似近3年pa对亚胺培南耐药率近3年东莞地区CRPA检出率分别是13.5%、14.6%、12.9%，检出率在15%以下，总体变化不大。2019年CARSS监测数据显示近3年东莞地区PA对亚胺培南耐药率为9.0%～9.7%，美罗培南的耐药率为7.1%～9.1%，CRPA对美罗培南耐药率为71.2%～71.8%，亚胺培南耐药率93.4%～97.8%。CARSS监测网报告中的2014—2019年PA对亚胺培南耐药率为18.2%～21.0%，美罗培南的耐药率为15.1%～18