抗血清制备原理、步骤及应用

抗血清制备原理、步骤及应用注。：清、。：1、选择免疫动物Ø免。Ø抗。Ø针。Ø制备H血备R血清用兔，制备体用豚鼠清。备Ø抗原剂量：用灭菌生理盐水将抗原稀释为2mg/mL，与佐剂混合制成乳剂后用于动物免疫。Ø免疫原的注射剂量应考虑其抗原性的强弱、分子量大小、动物的个体状态和免疫时间。通常小鼠首次抗原剂量为50～100μg/次，大鼠为100～200μg/次，兔为100～1mg/次，合成免疫原为2mg（半抗原约为20200μ，的1/2。Ø抗原乳剂的配制：将等量的佐剂与抗原溶液倒入钵内，经过反复碾磨，形成油包水乳剂。制成的油包水乳剂直接影响免疫效果因此使用前需进行质量检查检查方法是将制成的乳剂滴一滴在自来水表面，质量合格的乳剂滴入水面保持滴珠完整不分散不合格的乳剂立即扩散水面油亦逐渐扩大若检查不合格，则须继续操作至质量合格为止。案Ø根或脉腔=＞宝射。疫接、状。Ø免以1020为7～0。法）Ø第一次免疫：剂量为每只兔子注射1.0mL抗原乳剂（含抗原量1～2mg）。掌的皮内各注射0.2mL，其余0.6mL分多点注入脊二侧、部、腹股和腋窝处淋巴结近部位内，每点可注入0.05mL，分12次注入。Ø后20为1.0mL/只，加福氏完全佐剂注射部在腹部下多点注射，每点注入0.1mL。Ø第三次免疫：次免疫7～0。Ø试疫5～d价在6。清Ø放食h心脏刺。血静缓入量5萄液补血。的经2～3再。Ø置4℃血。6、抗血清的鉴定与保存Ø抗。Ø血。Ø抗用SDS法进行纯度鉴定。Ø抗血清的纯化：见的纯方法是提特异性I性IgG抗血清制备：首先用硫酸铵或硫酸钠盐析法粗提丙种球蛋白，再进一步纯化。粗提法提取γ球蛋白：采用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法，硫酸铵盐析法须经多次沉淀，经三次提取后的γ球蛋白大多属于Ig。Ø抗血：格清以1:100的入1的硫柳汞或5%的叠氮钠，使其最后浓度分别为0.01%或0.05%。用无菌滴管将抗血清分装小管，每管装约1m，置于4℃保存，可保存3～6；-℃～-℃保可存2～3年；真空冰冻干保存，保存4～5年。三、实流程图四、主要仪器试剂Ø抗原与免疫对象：抗原、健康家兔。Ø试剂：生理盐水、福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂、注射器、石炭酸、防腐剂(1%的硫柳汞或5%的叠氮)等。Ø设备与器材：剪刀、镊子、注射器等器材和冰箱、离心机等设备。五、注意事项：(1) 动物的免疫反应存在个体差异，因此制备血清时，应同时免疫3～4只。(2) 为制备单价特异性高的抗血清，所用抗原纯度越高越好，因此在纯化抗原过程中应尽可能除去可能存在的杂蛋白。(3) 要制备高效价的抗体，必须要加佐剂，但若抗原中存在杂蛋白，则可能因佐剂的存在而产生非特异性的抗体，所以要根据实验需要和抗原的纯度适当地使用佐剂。(4) 制成的抗原乳剂是否为油包水乳剂应进行检查，否则会影响免疫效果，若不是油包水乳剂，应重新制备。(5) 当抗原量过少不易提纯时，可采用抗原抗体在琼脂扩散中形成的沉淀线直接免疫动物制备抗体。(6) 抗血清效价一般以抗血清稀释倍数表示。血清效价检测方法很多，灵敏度各不同，在表示抗血清效价时，应注意标明检测方法。(7) 分装保存的抗血清应标明抗血清的名称、效价、制备日期以及包装量。六、抗血清的应用1)疾病的紧急预防与治疗：当动物接种相应抗血清后，机体迅速得到大量非自身免疫抗体，从而快速中和侵入人体的病原，如抗猪瘟血清能有效控制猪瘟的疫情，抗犬瘟热血清对犬瘟热有独特的疗效。2)疾病诊断和病原鉴定：血清学诊断方法在疾病诊断和病原鉴定中具有十分重要的地位，其中采用高效价特的抗血清阳性血）作为反的诊断是血清学断方法重点。