电泳技术-电泳的分类（药物分离纯化课件）

药物分离与纯化技术课程电泳技术--电泳的分离方法电泳的分离方法—电泳技术大纲纸电泳2.凝胶电泳3.醋酸纤维素薄膜电泳4.等电聚焦电泳5.等速电泳6.双向凝胶电泳7.免疫电泳电泳的分离方法—电泳技术

指用滤纸作为支持载体的电泳方法。

是最早使用的区带电泳。纸电泳操作：将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压（100V～1000V）进行电泳。1.纸电泳平卧式电泳槽纸电泳电泳的分离方法—电泳技术2.凝胶电泳

由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以凝胶作为介质。电泳的分离方法—电泳技术2.凝胶电泳

电泳中常用的凝胶:

葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。它具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小(1～100μg）、分辨率高等优点。琼脂糖凝胶电泳电泳的分离方法—电泳技术3.醋酸纤维素薄膜电泳

电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。

此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。电泳的分离方法—电泳技术4.等电聚焦电泳

是一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。适用于中、大分子量如蛋白质、肽类、同工酶等生物组分的分离分析。电泳的分离方法—电泳技术5.等速电泳采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。

前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动，实现分离。电泳的分离方法—电泳技术6.双向凝胶电泳（二维电泳）第一向采用等电聚焦，根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。

第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳，按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果呈现为斑点状。双向电泳电泳的分离方法—电泳技术7.免疫电泳：琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体，做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体，在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。电泳分类药物分离与纯化技术课程电泳技术--电泳技术的分类电泳技术的分类—电泳技术大纲1.电泳的分类电泳技术的分类—电泳技术根据工作原理的不同，可分为：移界电泳区带电泳等速电泳等电聚焦电泳免疫电泳等。1.根据工作原理的不同电泳技术的分类—电泳技术(1)区带电泳：是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后在介质上加电场，带电颗粒在支持介质上或支持介质内迁移，在电泳过程中，不同的离子成分在均一的缓冲液系统中分离成独立的区带(图a)，这是当前应用最广泛的电泳技术。电泳技术的分类—电泳技术(2)移界电泳：是把电场加在生物大分子溶液和缓冲溶液之间的界面上，带电颗粒的移动速度通过光学方法观察界面的移动来测定(图b)。电泳技术的分类—电泳技术(3)稳态电泳：带电颗粒在电场作用下电迁移一定时间后达到一个稳定状态，此后，电泳条带的宽度不随时间的变化而变化，如等速电泳（ITP))(图c)、等电聚焦电泳(IEF)(图d)。电泳技术的分类—电泳技术2.根据有无固体支持物可分为：自由电泳支持物电泳3.根据支持载体的位置或形状可分成：

水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细管电泳等。电泳技术的分类—电泳技术4.根据电源控制的不同，一般可分

为以下3类：

恒压电泳;恒流电泳;恒功率电泳。5.根据支持物的特点又可分为：

①无阻滞支持物电泳。

②高密度的凝胶电泳。电泳技术的分类—电泳技术6.根据自动化程度的不同，可分为:

半自动和全自动型。7.根据其功能的不同，可分为:

制备型、分析型、转移型、浓缩型等。电泳