深部真菌药物敏感试验标准操作规程

深部真菌药物敏感试验标准操作规程1．目的规范深部真菌药物敏感试验操作规程，确保药敏结果的准确。2．适用范围本操作规程适用于念珠菌属和新型隐球菌。3．选药原则根据CLSIM27-A2的建议选择以下受试药物，5-氟胞嘧啶（5-FC）、两性霉素B（AMB）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）。4．质控见表5-55.表5-55深部真菌药敏试验质控结果QC1:近平滑念珠菌ATCC22019QC2:克柔念珠菌ATCC62585-FCSAMBMIC≤0.5mg/LFCAMIC=1~4mg/LITRMIC≤0.125~0.25mg/LVRCMIC≤0.06~0.125mg/L5-FCI/RAMBMIC≤0.5~2mg/LFCAMIC=8~32mg/LITRMIC≤0.125~0.5mg/LVRCMIC=0.125~0.5mg/L5．试验材料和仪器ATBFUNGUS3，无菌生理盐水，ATB电子移液器。ATBF2培养基。6．操作步骤6.1打开一个0.85%氯化钠培养基安？（或API培养悬液），采集不超过4日的菌落，制备成浊度相当于2McFarland的悬浮液。用Farland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT，此菌悬液必须在准备后立即使用。6.2使用一移液管转移20µl此悬浮液到一ATBF2培养基的安？中。6.3用ATB电子移液管混匀ATBF2培养基，避免产生气泡，使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135µl的ATBF2培养基，盖好试条盖子。6.4把试条放入一个密封容器或是一个装有吸潮纸是的GENbox型广口容器里，在有氧条件下35℃（+2℃）的环境中，念珠菌属要培养24小时（+2小时），新型隐球菌要培养48小时（+6小时）。6.5通过ATB仪器自动判读结果。7．判断标准见表5-56，5-57.表5-56念珠菌分界点（单位：mg/L）药物SIR5-FC≤418~20≥32AMBNDNDNDFCA≤816~32≥64ITR≤0.1250.25~0.5≥1VRC≤12≥4表5-57新型隐球的菌分界点（单位：mg/L）药物SIR5-FC≤48~16≥32AMBNDNDNDFCA≤48≥16ITRNDNDNDVRCNDNDND8．注意事项8.1在自动读取数据前，应擦拭试条的中间部分，去除可能存在的小滴液体，以便仪器辨认试条代码。8.2一个或两个生长对照杯状凹中的生长缺失时，测试无效，必须重复进行。8.3在培养后，带有脱水的杯状凹的试条可能给予错误结果，必须重复测试。8.4对于两性霉素B(AMB)，在自动判读时，建议肉眼检查在杯状凹外围是否有个别菌落或生长。8.5不同的操作环节之间间隔时间过长（从接种液的配制到试条的培养）可能会影响结果。8.6只能使用纯培养物，混合的或是污染的培养物可能会影响结果。8.7由于希木龙念珠菌（Candidahaemulonii）的生长不稳定干扰MIC的判断，故不能使用ATBFUNGUS3条对其做检测。8.8在检测白念珠菌，都伯林念珠菌和热带念珠菌时，氟康唑，伊曲康唑和伏立康唑可出现拖尾现象，导致MIC偏高，尤其在使用仪器判断结果的时候。针对这三个药建议肉眼判读其MIC值，特别是当伏立康唑结果耐药时（因为对伏立康唑耐药的非常少见）。9．结果解释9.1由于克柔念珠菌对氟康唑天然耐药，试验结果应被系统地解释为耐药（R）。9.2对于两性霉素B，MIC≥2mg/L，建议判断为耐药，（新型隐球菌通常的MIC为0.5和1mg/L。）9.3针对光滑念珠菌的检测，建议将其对氟康唑和（或）伊曲康唑敏感的结果改为中介（I），因为该菌对这两个药存在固有的敏感性低的现象。参考文献[1]ReferenceMethodforBorthDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofYeasts.NCCLSM27-A2,2002[2]