2,6-二氯靛酚法测定青椒中抗坏血酸的脱色条件研究

2,6-二氯靛酚法测定青椒中抗坏血酸的脱色条件研究

刘晶，李会（1.武汉尚码生物科技有限公司，湖北武汉430073；2.北京华测食农认证服务有限公司，北京102199）食品中抗坏血酸的测定方法有很多，国标GB5009.86—2016[1]中第一法为高效液相色谱法，第二法为荧光法，第三法为2,6-二氯靛酚法，除此之外，还有猝灭-恢复型电化学发光传感器法[2]、比色法[3-4]、液相色谱-串联质谱法[5-6]、共振散射法[7]、氧化还原法[8]、修饰电极伏安法[9]等，这些方法各有特点，适用于不同样品和场景分析。其中，2,6-二氯靛酚法具有不需要大型分析仪器设备、操作简单、试剂价格便宜、精密度和准确度高等优点，广泛用于水果、蔬菜及其制品中L-抗坏血酸的测定。由于该方法利用颜色判断终点，因而对于富含色素的样品如青椒、番茄等测定存在一定的干扰，往往需要进行脱色处理，而脱色过程中不可避免地会对抗坏血酸造成吸附损失，从而造成测定误差。拟考查3种吸附剂皂土、高岭土和活性炭对青椒中抗坏血酸的脱色效果及抗坏血酸吸附率，从中选取较优的吸附剂，为2,6-二氯靛酚法测定深色果蔬中抗坏血酸含量提供参考。1材料与方法1.1材料2,6-二氯靛酚钠为分析纯，上海赛诺化工有限公司提供；抗坏血酸、草酸、氢氧化钠、无水乙醇、丙酮、活性炭，均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司提供；皂土为化学纯，上海山浦化工有限公司提供；高岭土为化学纯，天津市凯通化学试剂有限公司提供。1.2仪器设备722型可见分光光度计，天津市普瑞斯仪器有限公司产品；AL-104型分析天平，瑞士Mettelertoledo公司产品；DF-2电热磁力搅拌器，金坛市医疗仪器有限公司产品。1.3试验方法1.3.1抗坏血酸吸附试验取50mL0.2mg/mL的抗坏血酸溶液于100mL烧杯中，加入一定质量的皂土、活性炭和高岭土，将烧杯分别置于一定温度下的磁力搅拌器中恒温搅拌，过滤，采用2,6-二氯靛酚滴定法测定滤液中抗坏血酸的含量。1.3.2叶绿素吸附试验取5g新鲜的青椒，加入少许提取剂（无水乙醇∶丙酮=1∶1）进行研磨后定容至100mL，然后将其转移至烧杯中，加入一定质量的皂土、活性炭和高岭土，将烧杯分别置于一定温度下的磁力搅拌器中恒温搅拌，过滤，参照NY/T3082—2017[10]中的方法测定溶液中的叶绿素含量。2结果与分析2.1吸附温度对抗坏血酸吸附率的影响研究了吸附温度分别为25，35，45，55，65℃时对抗坏血酸吸附率的影响。吸附温度对抗坏血酸吸附率的影响见图1。图1吸附温度对抗坏血酸吸附率的影响由图1可知，吸附温度对抗坏血酸吸附率有比较明显的影响，随着吸附温度的升高，3种吸附剂对溶液中抗坏血酸的吸附率都呈先快速上升后缓慢上升并逐渐趋于平缓的变化趋势。当吸附温度达到45℃时，吸附率增长趋势趋于平缓。3种吸附剂中，高岭土对抗坏血酸的吸附率最高，当吸附温度为25℃时，吸附率为50.7%；吸附温度为65℃时，吸附率可达72.0%。皂土对抗坏血酸的吸附率最低，当吸附温度为25℃时，吸附率仅为4.8%；吸附温度为65℃时，吸附率达到了33.5%。随着吸附温度的升高，吸附剂孔径因热胀冷缩效应而增加，从而使更多的抗坏血酸被吸附。此外，溶液中部分抗坏血酸也因为过高的温度而被破坏掉，使溶液中抗坏血酸含量降低，从而造成最终吸附率的增加。2.2吸附剂添加量对抗坏血酸吸附率的影响研究了吸附剂添加量分别为2%，4%，6%，8%，10%时对抗坏血酸吸附率的影响。吸附剂添加量对抗坏血酸吸附率的影响见图2。图2吸附剂添加量对抗坏血酸吸附率的影响由图2可知，吸附剂添加量对抗坏血酸吸附率的影响不是很明显，当吸附剂添加量为2%时，抗坏血酸的吸附率较低，当继续加大吸附剂添加量，对于皂土和高岭土而言，抗坏血酸吸附率略有增加，对于活性炭而言，抗坏血酸吸附率由28.2%迅速增加到42.8%，继续加大活性炭添加量，吸附率增长趋缓。2.3吸附剂添加量对脱色效果的影响研究了吸附剂添加量分别为2%，4%，6%，8%，10%时对青椒叶绿素吸附率的影响。吸附剂添加量对叶绿素吸附率的影响见图3。图3吸附剂添加量对叶绿素吸附率的影响由图3可知，皂土和活性炭对青椒中叶绿素的吸附效果相当，皂土效果略好于活性炭，且随着吸附剂添加量的增加，对叶绿素吸附率变化不大，基本维持在80%～90%。而高岭土对青椒中叶绿素的吸附率随着添加量的加大而逐渐减小，当添加量为6.0%时，吸附率转为负值，可能是高岭土中某种成分促进了吸光值的增加。也有可能是过滤时部分高岭土穿透滤纸进入溶液中，从而使滤液浑浊，导致吸光度增加。2.4吸附时间对脱色效果的影响研究了吸附时间分别为10，15，20，25，30min时对青椒叶绿素吸附率的影响。吸附时间对叶绿素吸附率的影响见图4。图4吸附时间对叶绿素吸附率的影响由图4可知，随着吸附时间的延长，皂土和活性炭对青椒中叶绿素吸附率呈现先上升后趋于平缓的趋势，当吸附时间为15min时，吸附率基本达到较高水平，皂土对叶绿素最大吸附率为86.1%，活性炭对叶绿素最大吸附率为78.2%。高岭土对叶绿素的吸附效果低于皂土和活性炭，且基本不受吸附时间的影响，其对叶绿素的最大吸附率为78.2%。综上而言，结合3种吸附剂对抗坏血酸和叶绿素的吸附效果分析，可以得出，当采用2,6-二氯靛酚法测定青椒中抗坏血酸含量时，采用4%皂土为吸附剂，在25℃下脱色25min，此时对抗坏血酸的吸附率最小而脱色效果最好。2.5方法精密度对该方法的精密度进行测定。方法精密度见表1。表1方法精密度从表1可看出，方法的相对标准偏差为4.17%，表明该方法测定青椒中抗坏血酸的精密度较好。2.6方法回收率对该方法的回收率进行测定。方法回收率见表2。从表2可看出，抗坏血酸的加标回收率在97.7%～107.0%，能够满足测定要求。表2方法回收率3结论为了减轻2,6-二氯靛酚法测定青椒中抗坏血酸含量时叶绿素对终点颜色的判断，研究3种吸附剂对叶绿素的脱除效果，同时将其对抗坏血酸的吸附率降至最低。结果表明，以4%的皂土为吸附剂，在25℃下吸附25min，对抗坏血酸的吸附