PeCCR基因在提高竹子类黄酮含量中的应用的制作方法_第1页
PeCCR基因在提高竹子类黄酮含量中的应用的制作方法_第2页
PeCCR基因在提高竹子类黄酮含量中的应用的制作方法_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

PeCCR基因在提高竹子类黄酮含量中的应用的制作方法引言竹子类植物是一类重要的经济植物资源，具有广泛的应用前景。其中，黄酮类化合物被广泛研究和应用于抗氧化、抗肿瘤、抗炎症等方面。近年来，通过转基因技术引入CCR基因，可以有效提高竹子黄酮含量，具有重要的研究价值和应用前景。本文将介绍PeCCR基因在提高竹子类黄酮含量中的制作方法。1.实验材料竹子幼苗培养基叶片组织样品DNA提取试剂盒PCR试剂盒DNA酶切试剂转化载体大肠杆菌DH5α感受态细胞离心管、PCR管、琼脂糖凝胶等实验用具2.DNA提取和PCR扩增2.1DNA提取取竹子叶片组织样品，快速切碎样品并转移到离心管中。加入适量的DNA提取试剂盒提取缓冲液，并充分混匀。在65°C水浴中孵育样品30分钟，定期颠倒离心管以保证充分提取。加入等体积乙酰酸异丙酯，并充分混匀。在室温下离心离心管5分钟，离心速度为10000xg。将上清转移到新的离心管中，并加入等体积的冷异丙醇。在-20°C冰箱中冷藏样品30分钟，然后以10000xg离心20分钟，取上清。加入冷70%乙醇，轻轻混匀，保持-20°C冷藏30分钟。以10000xg离心10分钟，取上清，并在室温下放置10分钟以使其干燥。加入适量的无核酸酶水溶液溶解获得的DNA。2.2PCR扩增根据目标基因序列设计引物。准备PCR反应体系，在PCR管中加入适量的PCR试剂盒，包括引物、酶、缓冲液和模板DNA。在PCR机中设置反应条件，如预热、扩增周期等。将PCR管放入PCR机中进行扩增反应。取出扩增产物，经琼脂糖凝胶电泳验证。3.基因克隆和构建转化载体3.1DNA酶切根据PCR扩增得到的基因片段长度，选择适当的限制性内切酶。准备DNA酶切反应体系，在离心管中加入适量的DNA酶切试剂和PCR扩增得到的基因片段。在37°C恒温浴中孵育反应体系至少2小时。经琼脂糖凝胶电泳验证酶切产物。3.2转化载体构建选择合适的转化载体进行亲和性连接。将基因片段和转化载体按照1:1的比例加入连接试剂盒，并充分混匀。在16°C恒温浴中孵育反应体系过夜。酶切连接产物经琼脂糖凝胶电泳验证。4.细胞转化及筛选转基因植株将构建好的转化载体转化进大肠杆菌DH5α感受态细胞中。在LB培养基中培养转化菌落，待菌落扩散形成。提取质粒DNA进行PCR扩增验证转化是否成功。将验证成功的质粒DNA进一步转化进竹子幼苗中，采用基因枪或植物根尖离体转化等方法。在选择性培养基中培养转化幼苗，筛选出表达PeCCR基因并且黄酮含量提高的转基因植株。5.黄酮含量分析从野生型竹子和转基因植株中采集叶片样品。将样品切碎，并加入适量的溶剂提取黄酮化合物。采用光谱分析或高效液相色谱仪分析黄酮含量的变化。结果分析和统计处理。结论本文介绍了PeCCR基因在提高竹子类黄酮含量中的制作方法，包括DNA提取和PCR扩增、基因克隆和构建转化载体、细胞转化及筛选转基因植株以及黄酮含量的分析。通

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 备课教案

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论