临床微生物标本采集程序

标题：临床微生物标本采集操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

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临床微生物标本采集程序

1、目的：

规范规范临床标本的采集，减少实验室前的差错影响

因素，避免医疗缺陷发生。

2、范围：

为协助临床诊断和治疗而进行的临床微生物标本的采

集。包括血液，骨髓，下呼吸道标本，尿，粪便，化脓和创

伤标本，穿刺液，生殖道标本，烧伤标本,。

3、职责：

指导临床科室正确采集标本，提高实验室的准确性。

4、采集程序

1.血骨髓

1.1送检指征

1.1.1症状指征：发热、皮疹、肝脾肿大、关节疼痛、神志

昏迷或休克。

1.1.2疾病指征：化脓性病灶或损害、黏膜损伤性疾病、肝

脏疾病、糖尿病、血液疾病及恶性肿瘤、爱滋病、呼吸道感

染或呼吸衰竭、长期输液或导管介入疾病、血液透析患者。

1.2标本采集时间：

一般情况下应在病人发热初期或发热高峰时采集。原则

上应选择在抗菌药物应用之前，对已用药而因病情不允许停

药的患者，也应在下次用药前采集。

1.3采集部位何采集的频率

1.3.1急性败血症在24小时内抽血3次或更多次，并可在

不同部位，如左、右手臂或颈部。

1.3.2急性心内膜炎、治疗前1-2小时内，在三个不同部

位采集血样本。

1.3.3亚急性心内膜炎第一天在身体不同部位取三次标

本。如果24小时血培养结果阴性，应继续加抽3份血样或

更多次，多部位采样送检。

1.3.4无名热应不定期多次、多部位采样送检。24小时内

不超过3次，如培养阴性应继续采样送检。

1.4标本采集的量

｛成人采血量8-10ML｝｛婴幼儿采血量2-5ML)｛骨髓采集量

1-2ML｝

1.5送检

采血后立即送检，切勿放冰箱存放

1.6结果报告

有迹象细菌生长者，立即图片，染色镜检，结果用电话

报告临床。将可疑生长的培养瓶

转种于血平板及巧克力平版生长后鉴定报告。若7天仍无细

菌生长，报告无菌生长。临床诊断为亚急性心内膜炎者可继

续培养2周再出阴性报告。

1.7临床意义

正常人血液及骨髓内是无菌的。现代临床医学的发展，广

谱、超广谱抗生素的广泛使用，使耐药株增加，院内感染率

上升，血液培养中分离出各种微生物种类显著增多，以前认

为致病、条件致病或非致病菌的界限现在已不再如此绝对区

分。因为任何一种机会致病菌均可能成为败血症的病原菌。

其鉴别可依据：L培养结果2次以上为同一细菌者；2,患

者于检出细菌2—3周后，血液中相应抗体滴度上升，均可

视为败血症的病原菌。

2,下呼吸道标本送检指征

2.1症状指征：咳嗽、咯血、呼吸困难、发热。

2.2疾病指征：白喉、百日咳、猩红热、肺炎、肺结核、

肺脓肿。

2.3标本采集时间：以清晨留取标本为好。留取前最好用

清水漱口三次.痰由患者用力咳出.纤维支气管镜检查者可

同时抽取分泌物.昏迷患者可作气管穿刺吸取.所有标本最

好在应用抗菌药物之前采集标本。

2.4采集方法

自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、气管穿刺法、

小儿取痰法

2.5上呼吸道标本采集上呼吸道标本通常采用无菌棉拭

子。采集前患者应用清水反复漱口，由检查者将舌头向外拉,

使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂

的后侧，涂抹数次，但拭子药避免接触口腔和舌粘膜。

2.6检验方法直接涂片法

2.6.1痰标本

挑取阳性（脓性或血）部分制备2张涂片，一张做革兰染色,

另一张根据需要做其他染色。革兰染色后用低倍镜观察白细

胞和上皮细胞数量的多少来初步判定。如白细胞＜10,上皮

细胞〈25,则要求重新留取标本，不宜做培养；白细胞＞10,

上皮细胞＜25时，还要参照高倍镜下的情况进行区分：①视

野中有少量扁平上皮细胞（或无），少量白细胞，见3种以

上细菌，说明为唾液，不宜培养。②视野中见有数量不等的

白细胞或纤毛拄状上皮细胞或二者同在，有一种细菌或两种

（少见，见于免疫功能低下者），将结果记录下来，同时报

告临床医师。③标本被证实来自下呼吸道后，用油镜观察细

菌的着色、形态及排列，大致可以通过涂片镜检做出初步病

原学诊断，如葡萄球菌、肺炎链球菌、假丝酵母菌。

2.6.2上呼吸道标本涂片

将分泌物直接涂于两张清洁玻片上，一张做革兰染色，另一

张根据情况做特殊染色。

白喉棒状杆菌：查见革兰阳性棒状杆菌，排列不规则，用异

染颗粒染色有明显异染颗粒，则可作出初步报告。

3.尿

3.1送检指征

3.1.1症状指征:尿频、尿急、尿痛等膀胱刺激症状、血尿、

尿道口脓性分泌物、发热。

3.1.2疾病指征:泌尿系统感染、肾结核、泌尿结石、前列

腺增生、无症状性菌尿。

3.2标本采集时间：

一般用中段尿采集方法采集。通常应清晨起床第一次

尿液送检。必要时可导尿留取标本.（不应该从留置导尿管中

抽取尿标本），必要时也可作耻骨联合上膀胱穿刺抽取尿液

标本.原则上应选择在抗菌药物应用之前采集尿液。

3.3采集方法

中段尿采集方法、肾盂尿采集方法、膀胱穿刺采集方法、

导尿法

3.4培养检查

3.4.1普通培养，用无菌接种环取尿液分别接种于血平板

麦康凯35度培养18-24小时观察结果选择相应方法进一步

鉴定。48小时无细菌生长报告无菌生长。

3.4.2定量培养1倾注平板法用无菌生理盐水9.9ML尿液

0.1ML充分混匀，取1ML放入平皿中，同时加入已融化并冷

却至50度的培养液与尿混合，待凝固后置35度24小时。

生长菌落数乘以100既相当于每ML中菌落数2）平板接种法,

取尿5UL滴注于平版上抹匀35度24小时记数生长的菌落数

乘以200既为每ML菌数3）定量接种环涂抹法用定量接种环

（10UL）蘸取尿液。在平板上均匀划线接种35度24小时计

数生长的菌落数乘以100,求出每ML的菌数。做定量培养，

菌落数过多时不可计数时则报告》10.5CFU/ML。

3.5临床意义

尿液细菌学检验可以反映肾脏,膀胱,尿道,前列腺等处

的炎症变化.尿液的细菌学检验除有诊断价值以外，还可以

帮助临床医师选择有效抗菌药物，以减少因用药不当而造成

的耐药菌株的增加.诊断泌尿系感染的细菌学标准是：菌落

计数>10CFU/ML

4.粪便送检指征

4.1症状指征：腹泻、高热惊厥。

4.2疾病指征：侵袭性病原引起的腹泻1）细菌性痢疾2）

肠炎3）肠结核。肠毒素性病原引起的腹泻、抗菌药物相关

性腹泻。

4.3标本采集：腹泻病人应在急性期采集，以提高检出率,

亦最好在用药之前。沙门氏菌感染肠热症在2周以后，胃肠

炎病人在急性期，早期采集新鲜粪便,应采集粪便异常部分

最好在抗菌药物应用以前留取。

4.4采集方法

自然排便采集法、直肠拭子方法

4.5检验方法

4.5.1直接涂片检查

霍乱弧菌涂片检查

染色法，涂片用甲醇或乙醇固定革兰氏染色镜检观察革兰氏

阴性，呈鱼群样排列杆状或弧形菌。悬滴（压滴）检查，检

查细菌动力，霍乱弧菌古典生物型和ELT0R生物型均呈

川梭状运动在悬滴涂片中加入01群霍乱弧菌诊断血清后，

在显微镜下观察。若原运动活泼的现象停止，为制动试验阳

性。可初步报告为疑似01群霍乱弧菌。并申报上级卫生机

构做出处理。

4.5.2培养检查

将大便接种于中国兰或麦康凯及SS培养基经35C0,

18-24小时，挑取可疑不发酵乳糖菌落接种三糖铁和尿素动

力定基质根据其生化反应结果选择适宜的血清学分型

霍乱弧菌。1克大便直接接种于磴性蛋白陈水中于35co

6-8小时转种4号琼脂平板挑取生长菌落进行进一步监定。

4.6临床意义

肠道病原菌能引起人类感染性腹泻，亦能由细菌的代谢

产物而造成食物中毒，亦能由于长期应用抗菌药物而导致菌

群紊乱所致严重腹泻，因此，应及早做出诊断以免延误治疗。

5.化脓和创伤标本送检指征

5.1症状指征：局部症状如红、肿、热、痛和功能障碍时

化脓性感染的五个典型症状。

全身症状轻重不一，感染轻微的可无全身症状，感染重的

常有发热、头痛、全身不适、乏力、食欲减退等。

5.2疾病指征：软组织的急性化脓性炎症、化脓性疾病、

脓肿、创伤感染。

5.3标本采集：开放性感染和已溃破的化脓灶：标本采集

前先用灭菌生理盐水冲洗表面污染，

用灭菌拭子采取脓液及病灶深部的分泌物。封闭性脓肿通

常采用引流术采集。如为慢性感染可抽取感染坏死组织于健

康组织之间的少许组织作为培养标本.

5.4检验方法：

5.4.1直接涂片检查：取洁净玻片将标本均匀涂成薄膜，

自然干燥，经火焰固定革兰染色镜检，根据细菌的染色特点、

形态、排列作出初步报告“找到革兰阴性或阳性球或杆菌呈

**排列”。如发现具有芽抱或荚膜的细菌，报告时应注明芽

抱的大小位置：如镜检发现细菌。可初步报告“未找到细菌”;

对疑有分枝杆菌感染时，标本应作抗酸染色；疑是白喉感染

时，标本除作革兰染色，还应作异染颗粒染色。

5.4.2细菌培养：取脓汁棉拭子或脓汁接种于血平板上划

线分离，置37℃培养18-24小时，观察结果，如有菌落生长,

根据涂片染色特点和菌落特征初步判断细菌的类属，然后再

按其生物学特性进行鉴定。

5.5临床意义：所有创伤均可有细菌污染，但不一定发生

感染，细菌学检查对局部细菌的控制是有价值的。同时对导

致伤口感染、脓肿形成的病原学诊断有重要意义。确定常居

菌是否为创伤感染的病原菌时，要注意该菌是否在数量上占

优势。目前看细菌向活组织深部侵入程度及细菌每克组织含

细菌量是否达到一定阈值。一般认为每克组织内细菌数量在

10-106个以上时，即可造成伤口感染。

6.穿刺液送检指征

6.1脑脊液

6.1.1症状指征：在成人一般表现为发热、头痛、恶心、

呕吐、颈强直和反射增强，婴儿和新生儿临床表现经常不明

确和无特异性，对婴儿不明原因的发热，应怀疑为脑膜炎，

应采集脑脊液即使送检。

6.1.2疾病指征：细菌性脑膜炎拭一组病情较严重的急性

感染性疾病。本病可由多种致病菌引起。

6.2胸腹水送检指征

6.2.1症状指征：临床症状多伴由胸痛和发热，腹部出

现局限性腹胀及揉面感，胸腔积液有混浊、乳糜性、血性或

脓性，腹水成人多于肝硬化腹水者。

6.2.2疾病指征：结核性胸膜炎、细菌性肺炎引起的胸膜

炎、真菌、原发性腹膜炎、续发性急性腹膜炎。

6.2.3采集：怀疑为脑膜炎的病人，应立即采集脑脊液，

最好在使用药物之前采集标本。胸腹水怀疑感染存在，应

尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停用后「2

天采集。

7,生殖道标本送检指征

7.1症状指征：全身症状：发热、乏力、食欲不振。皮肤

黏膜损害。男性泌尿生殖道系统表现：尿痛、尿频、尿急、

尿道分泌物增多、性功能障碍等。性生殖系统表现：阴道

分泌物增多及性状异常、月经失调、阴道出血等。

7.2疾病指征：前庭大腺脓肿、外阴阴道念珠菌病、细菌

性阴道病、急性子宫颈炎、急性盆腔

炎、急性尿道炎、急性膀胱炎、羊膜腔感染、产褥气感染。

7.3标本采集：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，采

取脓形分泌物。

8.烧伤标本送检指征

8.1症状指征：烧伤伴有细菌感染或出现败血症等。

8.2疾病指征：烧伤创面脓毒症。烧伤病发症：如肺部感

染、静脉炎、烧伤败血症、肠原性感染等。

8.3采集：烧伤面愈合前，都可能发生侵袭性感染，通常

在早期、深度烧伤溶痂和3度焦痂分离期、后期采集标本。

用无菌棉拭子，直接从烧伤创面的脓汁多部位采集，发生败

血症应同时做血培养。

5、注意事项

当某些标本的留取出现困难和问题时，请临床科室和实

验室密切配合,及时处理。

为确保病原微生物的检出率,应尽量减少中间环节.采集好

的标本应立即送检,争取在10-20分钟内送到实验室,否则有

些微生物会死亡而影响检出。

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微生物标本接收处理

接种前标本接收处理：

1、核对接到标本后，检查化验单填写和标本是否一致，和标

本是否合格.若标本不合格,退回临床并及时通知临床,然后

记录退回标本的病人姓名。

2、标本拒收出现以下情况，工作人员可根据具体判断拒

收标本。

1.申请单无检查项目或检查项目不清楚的标本，非本实验

室检测项目的标本。

2.姓名明显变更，或出现多个姓名，无法确认标本正确归

属的。

3.申请单和标本分离，标本容器上又无明确患者信息标识

的。

4.空管、标本量过少（标本量见《临床微生物标本采集程

序》）的标本。

5.收集容器不正确；使用非无菌管留取培养标本，用普通大

便盒留取培养标本等。正确收集容器见《临床微生物标本采

集程序》。

6.检标本类别不符，如申请单注明血，但送检标本为胸水。

7.标本外部有严重的遗洒、渗漏，怀疑标本可能交叉污染

的，化验单严重污染，无法填写报告的。

8.经询问确认标本保存、运输方式不正确的，具体保存方

式见《临床微生物标本采集程序》。

9.审核报告时发现标本超过有效检测时间或污染的，也应视

为不合格标本，按拒收标本处理，不能发出报告。

3、拒收处理

1.对不合格标本应在化验单上注明拒收原因及处理建议，及

时发回。

2.如为门诊或急诊患者标本，应由服务台人员或值班人员

尽快告知送标本者。

3.如为病房急诊或常规标本，当时发现的应及时退给护理

员；经核查后发现的应在2h内给病房打电话，并填写《不

合格标本电话通知记录表》，且于当日将标注清楚的化验单

发回病房；对于无法及时报告的不合格门诊标本，应当天将

标注清楚的化验单反给病案室或化验单查询处。

4.将不合格化验单中患者信息和拒收原因填写《不合格标

本电话通知记录表》，以备查询。

5.对于审核报告时发现与临床严重不符或临床根本不可能

出现的结果，而怀疑标本超过有效检测时间或污染的情况，

应及时与临床电话联系，并填写《不合格标本电话通知记

录表》。

6.对于同一病人多次因相同原因拒收标本的，应及时与主

管医生联系，了解原因提出建议。

4、标本接种合格标本写上接收日期和时间，并登记,记帐.

然后接种.

1.接种的方法以及分类.

⑴点燃酒精灯,右手持接种工具,在火焰上烧灼灭菌.

⑵左手持标本管或原代培养物的平皿,试管等.

⑶用接种工具挑取适量标本或细菌，痰液挑取脓块,避开口

水;痢疾粪便挑取脓血部分.原代培养物挑取单个菌落,液体

中取菌，只需在培养液蘸取一满环即可.

⑷按培养目的分区划线或区域涂布的方法接种.接种到液体

中时，将挑出的菌落在试管有液体的管壁中研磨，细菌即可

转入液体中.做穿刺接种时,可垂直刺入高层琼脂中，并沿原

位退出,注意不要穿刺到管底.

⑸接种后，把接种工具于火焰上烧灼后,放回原处.

1.1血培养：以无菌手法真空采血，采血量为5—10ml,放

35c孵育5天后连续划线盲种一次。

1.2脑脊液：连续划线接种于血平板及巧克力平板放于C02

10%环境18-48小时后取出生长细菌染色。根据革兰氏染色

的形态进行细菌鉴定。

1.3痰及上呼吸道标本的检测：接种于巧克力平板、血平板、

麦康凯培养基,并四区画线分别放入35c孵箱18-24小时后

观察菌落特征。

1.4尿标本的检测：连续划线接种于血平板及麦康凯培养基,

放35C孵育18—24小时。

1.5分泌物、化脓性感染标本分区划线接种于血平板及麦康

凯培养基，放35C孵箱18—24小时。

1.6胸腹水、穿刺液连续划线接种于血平板及麦康凯培养

基，放35℃孵箱18—24小时。

1.7大便标本：腹泻、高热标本如怀疑霍乱弧菌用碱性蛋白

陈水培养6-8小时,连续划线接种于4号琼脂孵育18-24小

时。常规用分区划线接种于麦康凯培养基35度生长18-24

小时

5、接种后标本处理

1.标本接种后的微生物标本放入贴有生物危险2级的污物

桶内，血培养标本接种后放置7天转种血平板，已转种的培养

瓶放入贴有生物危险2级的污物桶内.贴有生物危险2级的

污物桶用高压灭菌.

2.抗酸杆菌标本放入用清洁的玻璃瓶留取后放入贴有生物

危险2级的铁盒高压灭菌后涂片镜检.

3.吸取菌液的滴管用后放入装有含氯2克/升的消毒液中冲

洗后高压灭菌后使用

6、工作总结及临床沟通：

1.定期（一般一个季度）向临床科室报告从临床各种标本分

离的细菌种类以及对抗菌药物的敏感性结果.供临床医生初

步选择抗菌药物参考.

2.分段报告微生物培养结果，以便临床医生及时用药.

2.1实验室工作人员接到标本后，按要求进行涂片和接种。.

不符合质量要求的标本,应及时与临床科室联系并重新留取

标本.

2.2需要涂片的标本立即涂片染色，并尽快电话报告临床科

室，正式报告于第二个工作日出具。

2.3在三个工作日内，对接种的标本进行鉴定并做抗菌药物

敏感性试验,并出具书面报告。特殊疑难菌种及时向临床电

话报告，书面报告依鉴定程序顺延。

2.4需要保存的标准菌株和各种质控细菌按培养要求进行

培养或保存。

2.5做好报告回访工作，了解实验室诊断结果和临床诊断的

符合情况,从而找出存在的问题，以备改进工作。

7、紧急情况的处理如遇到烈性传染性病原菌或严重院内

感染和其他需要上报的菌种，需要立即与临床联系和上报保

健科，并填写《医院紧急情况处理登记册》。

标题：基本染色方法操作程序版本号：A修订号：0

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基本染色方法

1、染色准备：

染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取

菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时,

先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水

中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌

细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准

确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不

宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形

态改变。将固定后的涂片进行染色。

2、几种基本染色方法

1.革兰染色

本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。

染色结果将细菌分为革兰阳性（紫色）和革兰阴性（红色）两

类。

1.1结晶紫溶液

A液：结晶紫2g

95%乙醇20ml

B液：草酸镀0.8g

蒸储水80ml

需在用前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内

备用。

1.2碘液

碘1g

碘化钾2g

蒸镭水300ml

碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解,

然后研磨，继续加入少量蒸储水至完全溶解。最后补足水量。

也可用少量蒸储水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片,

待完全溶解后，加水至300mlo

1.3脱色液：95%乙醇。

1.4复染液

A.贮存液：沙黄2.5g

95%乙醇100ml

B.应用液：A液10ml

蒸储水90ml

1.5染色方法：

A.涂片经火焰固定，加结晶紫液染30s,清水冲去染液。

B.加碘液染30s,水洗。

C.加脱色液，不时摇动约5〜10s,至无紫色脱落为止，

水洗。

D.加复染液，染30s,水洗。

E.干后镜检。

3、抗酸染色

抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的

厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须掌握复染色时间。如

果背景过深，影响镜检。

奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色

时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴

性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予

汪思。

抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋纳

（Ziehl—Neelsen）法（我们使用的方法）。②荧光染料金胺

0法（也称金胺0-罗丹明B法）。

碱性复红染色法

1.试剂

1.1萋纳石炭酸复红溶液

碱性复红乙醇饱和溶液10ml

5%石炭酸溶液90ml

1.2脱色剂*

浓盐酸3ml

95%乙醇97ml

1.3复染液（吕弗勒美蓝液）

美蓝乙醇饱和溶液30ml

10%氢氧化钾0.1ml

蒸储水100ml

2.染色方法

2.1涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸

汽出现，切不可沸腾。染5min(若染色奴卡菌需要加长时间)，

水洗。

2.2加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。

2.3加复染液，染0.5-1min,水洗。

2.4干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。

2.5奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用2%硫酸水溶

液。

4、墨汁荚膜染色

用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些菌，如新型隐

球菌。

传统的方法是用印度墨汁，但目前国内无售。常规工作可

以用墨汁或墨水代替，但应注意颗粒不能太粗，否则影响观

察结果。有人用5%黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果

较好。

1.试剂

印度墨汁或5%黑色素水溶液。

2.染色方法

将标本与1滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压

一下，使标本混合液变薄。在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。

找到后，转换高倍镜确认。

标题：生物安全柜操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

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BSC-1100A2-X生物安全柜操作规程及维护

1、目的：

为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护

操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操

作的标准化。

2、原理:

通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部

的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相

对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准

化。

3、工作条件：

环境温度：18-30℃相对湿度：＜80%

安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有

潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部

30-35cm空隙。

环境必须有良好的通风设备。

4、操作步骤：

生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请

参看BSC-1100A2-X生物安全柜使用说明。具体操作步骤为:

1.将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。

2.有系统管理员（即本室负责人）开启玻璃门门锁，并将总

开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。

3.检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV

灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。

4.当系统稳定后，对设备进行安全性检查。（检查项目包括:

工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100

级；设备的密封有没有被破坏。所有的安全检查项目中的洁

净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和

菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。

5.如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用

记录》上写下相应的信息。在使用时需要注意的是，操作必

须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。

6.操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟，以使柜子

适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气

流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使

跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入

柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是，

使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。实验操作方向应

从清洁区到污染区，一般要求为左一右。

7.当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其

他物品从设备中取出。

8.关闭前玻璃门前，需要维持气流循环一段时间（时间长

短视所操作材料的危险性而定）。

9.关闭风机，停止气流循环。

10.每日使用后维护（见后面维护中的第一二步）。

11.维护完成后，关闭电源开关。

12.锁住前玻璃门，并如实填写《使用记录》。

5、仪器的维护：

1.基本保养：

1.1清洁：在通常的情况下，清洁只需要用少量家用或商用

的碗碟清洗剂，将它溶于水后直接擦洗，就可将设备表面的

污染擦掉。请不要擦拭任何玻璃，以免产生摩擦。

2.在使用过程中每日或每周的清洁：

2.1消毒（一般使用1000mg/L的次氯酸钠溶液）和清洁

工作室

2.2对操作面板进行消毒和清洗。

2.3用柔性的清洁剂或玻璃专用清洁剂清洗箱体外表面和

玻璃。

2.4对照说明书对设备的各种功能进行检查。

2.5将本次工作记录下来。

3.月清洗：

3.1用清洁剂将所有外表面的尘埃清除。

3.2对设备内部进行消毒处理。

3.3对设备进行功能检验，并在通常使用时检查设备的安

全。

3.4将本次清洗记录下来。

3.5每月必须对紫外灯进行照射强度检测。

4.每年维护：

4.1对设备进行安全性全面的检查，对设备进行维护。包括

柜体防泄露、高效过滤器的完整性、人员保护能力、产品保

护能力、下降气流流速、流入气流流速、负压、气流模式、

警报和联锁等的检测。一般安全检测由仪器公司进行。

4.2检查前玻璃门驱动装置的松劲程度。

4.3检查紫外灯管。

4.4将本次维护记录下来。

5.每两年更换日光灯管。

6.故障的维护处理：

当故障发生时必须停止一切操作，尽量维持设备内部空

气的循环过滤，将正在进行的试验材料和工具全部取出并

妥善管理，然后通知有关部门前来维修。每次仪器出现故

障时必须填写故障登记表，注明故障情况及处理情况。常

见的故障，原因及其处理方法见下表：

现象原因处理方法备注

照明光源或线路故障检查线路

紫外灯无法灯管坏更换灯管

点亮镇流器失效更换镇流器

蜂鸣器间断过滤器失效更换过滤器安全检查

报警

蜂鸣器连续可能玻璃门向下调整玻

报警过高璃门

6、注意事项：

1.只有负责管理本设备的人员才有权关闭风机。

2.只有经过培训和指导的人员才能操作本设备。

3.顶部通风口不能被任何东西覆盖以保证排气通畅。

4.当系统失效时会发出声讯号，此时不能继续操作，否则

会导致材料的损失，污染和人身安全方面的危险。

5.如果发现过滤器失效，要更换过滤器时，必须由专业人

员进行更换。

6.柜内溅出物的处理：在柜内如果出现危险生物材料溅出，

应该不能关闭风机继续运行，覆盖滤纸或吸水纸于溅出物表

面，然后向滤纸上滴加消毒液（1000mg/L的次氯酸钠溶液）

浸泡5分钟，用钳子钳取滤纸丢入感染性废物收集袋中，然

后用浸泡了消毒液的干净抹布擦拭柜内表面。

7.生物安全柜内避免使用明火，因为使用明火会破坏柜内

的气流方向。也禁止使用易挥发易燃易爆物品，以免造成危

险。接种环可以使用微波炉或“电炉”，最好使用一次性接

种环。

标题：微生物高压蒸汽灭菌器操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

实验室高压蒸气灭菌器操作程序

1、目的：

1.培养基等的液体灭菌，溶解。

2.器具等的灭菌。

3.废弃物的处理灭菌。

2、原理：

高压蒸气灭菌。灭菌温度105C-135C,溶解温度60℃

-100℃,保温温度45℃-60℃；压力0-0.235兆帕

3、工作条件：

环境温度：5℃-35c

背面距离墙10厘米以上,右侧距离墙5厘米以上。

需放置在无阳光直接照射及湿度不高,灰尘少的地方。

4、操作步骤：

单置排气储存桶

”注意:不得在灭菌器附近放置或放入可燃性物

质,爆炸性物质,氧化性物质，易燃性物质,可燃

性气体。

在排气容器孔中务必插入排气软管

添密件,关紧盖罩,

隼通电源开关

”注意：安装专用电源连接插口，安装地线，可靠

接地。

发生异常情况时立即停止运转,切断

电源。检修时要切断电源。

打开盖子

1

注入加热用水

I

注意：需采用蒸储水或自来水。

放入灭菌物品

注意：不得将灭菌物品装入蒸气不能进入的容

器和袋子，否则无法灭菌；装盛灭菌物品的容

器不得密封。不要让灭菌物品堵塞和挤压灭菌

器内的孔和温度传感器。仅对试管，烧瓶等容器

本身灭菌时,开口要向下或横放。物品灭菌时，

应同时放入监控指标。用对热敏感的染料标记

的变色带子。灭菌时，将变色带夹放在试验包

裹中，以监视灭菌效果，

氏闭盖子

选择过程（变更设定内容）（设定预定运行作业）

注意：运行中要开启排水阀。

运行注意:运行中如有蒸气泄漏时，不要靠近安

全阀排气口。

B行完毕，打开盖子,取出灭菌物品

注意:不要被烫伤,脸不要靠近灭菌器。

切断电源开关

排放加热用水

标题：微生物全自动血培养仪标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

LABSTAR50全自动血培养仪操作程序

1、注意：临床送检血培养瓶上的双条码是否一贴于检验单

上。

2、上机：（屏幕方7.目、

1.在主界面上按91,进入第二界面

2.二二二面时，用扫描器扫入培养瓶条码，扫描后可看

到仃1------'处有条码号

3.此时可看到抽屉上亮起绿色指示灯，任意打开亮有绿灯

的抽屉，将培养瓶任意插入亮有指示灯的孵育孔中

4.关上抽屉

5.在屏幕上按之］确认，屏幕回到主界面

3、取阳性瓶或产3.

1.当主界面上或上显示有数字时及说

明有阳性贵;二

2.直接按电1或电1,有阳性或阴性瓶的抽屉

会显示绿灯，打开抽屉，有阳性或阴性瓶的孵育孔指示灯会

亮起（一次只能卸载一个瓶）

3.取下培养瓶，取下后该瓶的ID会出现在----1中

标题：微生物细菌分析系统标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

DL-96细菌分析系统操作程序

1、仪器常规操作

1.开机：插上电源，待UPS亮灯稳定、打印机和显示器启

动，打开电脑，再打开读数箱2个开关。输入用户名：SUPV,

密码：SUPVo点击VITEK-*readerstatusfprocessonfgo,

查看温度。

2.取24h内的纯单个菌落配制成菌悬液，按鉴定要求制成

不同使用麦氏单位浊度的菌悬液（比浊法）。

3.选好鉴定、药敏卡，按顺序编上卡号，接上充填装置。

4.充填：把充填装置放入充填箱，先按ON,再按FILL键即

开始充填工作。

5.充填完毕，从荧屏中打开Vitek查看reader-status,

将卡放入仪器最早读的卡架内。

6.把卡平稳放入仪器最先读卡的读数箱的卡架内，关闭箱

门。

7.从荧屏输入病人资料。

8.关机：本机平时不用开关，全日自动工作，当仪器遇需

要搬动移位时才可关机。点击system、再点击system

maintenance,选择stopthesystem并运行0分钟，按顺

序关闭荧屏、显示器、读数箱、打印机、UPS,最后拔除电

源。

2、注意事项

1.菌落要纯且新鲜（培养不超过48小时）。

2.混悬液浓度要符合要求（按VITEK技术指南操作）。

3.卡里不能混有气泡。

4.在打开读数箱时，一定要查看荧屏上readerstatus0

5.充卡完毕，20分钟内要放入读数箱（YBC、NHI、ANI除外）,

否则会影响读数效果。

标题：微生物氧化酶实验标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

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氧化酶实验

1、目的：

规范氧化酶试验标准操作规程。

2、原理

氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的酶。

具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化性细

胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醒类化合物。

3、试剂盐酸二甲基对苯二胺（或四甲基对苯二胺）0.1g,

加蒸储水10ml,置棕色瓶内可用1周。冰箱保存，或分装于

棕色瓶内密封。

4、质控：

铜绿假单胞菌ATCC27853阳性，大肠埃希菌ATCC25922

阴性。

5、操作步骤：

取洁净的滤纸一小块，蘸取菌苔少许，加1滴10g/L盐酸

二甲基对苯二胺溶液于菌落上，观察颜色变化。

6、结果判断：

立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性。

7、注意事项:

1.试剂在空气中易氧化，故应经常更换新试剂，或配置时试

剂内加入0.1%维生素C以减少自身氧化。

2.不宜采用含葡萄糖培养基上的菌落（葡萄糖发酵可抑制氧

化酶活性）.

3.实验时应避开含铁的培养基等含铁物质，因本试验过程

中，遇铁时会出现假阳性。

8、临床意义：

1.用于奈瑟菌属，非发酵菌等细菌鉴定。

2.所有的革兰阴性菌均应进行氧化酶试验，如果肠杆菌科不

进行本试验，则可能将氧化酶阳性的嗜水气单胞菌错误地鉴

定为大肠埃希菌或沙雷菌。

标题：微生物触酶实验标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

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触酶试验

1、目的：

规范触酶试验标准操作规程

2、原理

具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出

新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。

3、试剂

3%过氧化氢溶液。

4、质控：

金黄色葡萄球菌ATCC25923阳性，肺炎链球菌ATCC

49619阴性。

5、操作步骤：

取3%过氧化氢溶液0.5mL滴加于不含血液的细菌琼脂

培养物上，或取「3ml滴加入盐水菌悬液中。

6、结果判断：

培养物出现气泡为阳性。

7、注意事项：

1.细菌要求新鲜。

2.不宜用血琼脂平板上的菌落作触酶试验，因红细胞内含

有触酶，可能出现假阳性。

3.需用已知阳性菌和阴性菌作对照。

8、临床意义：

在革兰阳性球菌中，链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌及

微球菌均阳性，因此可用于革兰阳性球菌的初步分群。

标题：微生物凝固酶实验标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

凝固酶实验

1、目的：

规范凝固酶试验标准操作规程。

2、原理

金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，

结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附

着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。另一种是菌体

生成后释放于培养基中的游离凝固酶，能使凝血酶原变成凝

血酶类物质，从而使血浆凝固。

3、试剂

新鲜人或兔血浆，生理盐水。

4、质控：

金黄色葡萄球菌ATCC25923阳性，表皮葡萄球菌ATCC

57625阴性。

5、操作步骤：

5.1玻片法取兔或混合人血浆和盐水各1滴分别置清洁

载玻片上，挑取待检菌菌落分别与血浆及盐水混合。如血浆

中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。

5.2试管法取试管2支，分别加入0.5ml的血浆（经生

理盐水1：4稀释），挑取菌落数个加入测定管充分研磨混匀,

用已知阳性菌株加入对照管，37°C水浴3~4小时。血浆凝

固为阳性。

6、结果判断：

玻片法：如血浆中有明显的颗粒出现盐水中无自凝现象为

阳性。试管法：血浆凝固为阳性。

7、注意事项：

若被检菌为陈旧的肉汤培养物（＞18~24小时）或生长不

良，凝固酶活性低的菌株往往出现假阴性。

8、临床意义：

金黄色葡萄球菌凝固酶试验为阳性，而表皮葡萄球菌及

腐生葡萄球菌凝固酶试验为阴性，故此试验对鉴别葡萄球菌

有重要价值。

标题：沙门、志贺菌标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

沙门、志贺菌血清学实验

1、目的：

规范氧化酶试验标准操作规程

2、原理

用已知的沙门菌或志贺菌诊断血清在载玻片上直接与

细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集

块，表示该菌即为沙门菌或志贺菌。

3、试剂

沙门菌或志贺菌诊断血清，生理盐水。

4、质控：

伤寒沙门菌ATCC50096阳性或福氏志贺ATCC12022阳性;

大肠埃希菌ATCC25922阴性。

5、操作步骤：

沙门菌：

1.首先用可凝菌与沙门菌。多价血清（A-F）进行凝集，若

呈明显凝集，提示被检菌株可能属于A~F6个。群范围内，

再用H因子第一相（特异相）定型，最后用H因子第二相（非

特异相）辅助定型。

2.若生化反应符合沙门菌，但A~F多价血清不凝集，首先

考虑是否出现表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断。抗

原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。应将细菌制成菌

悬液，放入沸水中加热15~30分钟，冷却后再次做凝集试验。

若去除Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A~F以外菌

群，应送专业实验室进行鉴定。

志贺菌：

3.首先用志贺菌属4种多价血清作玻片凝集，如凝集再进

一步作血清定型（用福氏志贺菌「6型、痢疾志贺菌广2型、

鲍氏志贺菌「6型以及宋内志贺菌鉴定到种、型）。一般先

用福氏志贺菌血清凝集，因我国以B群最为多见，如出现生

化反应符合志贺菌，而与4种多价血清不凝集的菌株，应考

虑为K抗原存在，将菌液加热到100°C15~30分钟后再进行

凝集。

4.与各型志贺菌血清不发生凝集，菌落特征与生化反应似

痢疾志贺菌，可考虑非典型痢疾血清型，应送到专业实验室

进行鉴定。

6、结果判断：

阴性：试验一侧及对照一侧均匀混浊。阳性：对照一侧

均匀混浊，实验一侧明显凝集。自凝：实验一侧及对照一侧

凝集。

7、注意事项：

伤寒沙门菌菌体表面常有一层Vi抗原，志贺菌菌体表

面常有一层K抗原，它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从

而导致假阴性的结果。此时应将菌悬液于100°C中煮沸1

小时，以破坏Vi抗原或K抗原，然后再作试验。

8、临床意义：

主要用于沙门菌属鉴定。

标题：葡萄菌属标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

葡萄菌属的鉴定

1、标本要求：

1.尽量用药前采集标本。

2.痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾

液送检。

3.尿液：病人留取12h尿液，送检。

4.粪便：病人留取粪便5~10g,送检。

5.脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。血标本不

要冷冻。

6.不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取

24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。

2、仪器

35℃孵箱、普通光学显微镜

3、试剂

血平皿、麦康凯平皿、尹红美兰平皿、OF试验管、氧化酶试

剂。

4、试验方法及原理：

1.触酶试验（过氧化氢酶试验）

方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上,

然后滴加3%过氧化氢溶液1〜2滴。静置之，Imin内产生

大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。

注意点：A.注意过氧化氢为3%,应用30%浓的H202,

用时稀释10倍。

B.不应在培养基上做试验。

C.每次试验时，应以阳性和阴性菌株做对照。

2.葡萄球菌凝固酶和凝聚因子试验

葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡

萄球菌与其他葡萄球菌。试管法凝固酶试验称为葡萄球菌凝

固酶，玻片法为检测凝聚因子。

2.1凝聚因子试验：取1滴蒸镭水于洁净的玻片上，用接种

环挑取待检菌一环置于蒸储水中，制成浓的菌悬液，无自凝

现象。然后加一环家兔血浆混合，10s内观察结果，出现明

显细菌凝块为阳性，否则为阴性。如超过10s可出现假阳性,

有10%—15%金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管

法验证凝聚因子试验。

操作过程中的注意点：

(1)10s内观察结果。

(2)必须制备浓厚的均匀菌悬液。

(3)用EDTA抗凝的兔血浆为最好。

(4)加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小。

(5)生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。

2.2葡萄球菌凝固酶试验：用生理盐水将血浆4倍稀释，取

0.5ml。然后挑取3〜5个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。

置37℃水浴，3〜4h后读取结果，凝固者为阳性。若阴性，

继续观察到24h,不凝固者为阴性。试验应同时作阳性、阴

性对照。试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的

纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝

固，应判为阴性。中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时

间孵育，才可出现阳性。凝固酶试验应考虑下述情况：

①某些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶,溶解纤维蛋白

凝块。

②所用血浆缺乏纤维蛋白原。

③试验菌株不纯。

3.碳水化合物氧化、发酵试验（0F试验）

葡萄球菌的0F试验应使用专用配方，不可与非发酵菌

用的0F管混用。培养基用的指示剂必须用水配制，因为个

别菌株能分解乙醇产酸。

方法：挑取待检菌落，接种于2支0-F培养基管中，发

酵管加灭菌液体石蜡油约1cm深，氧化管不加。35℃孵育

24h后观察，培养基变黄即产酸。结果判定如下：

代谢型加石蜡不加石蜡

发酵产酸产酸

氧化不变色产酸

4.氧化酶（改良法）试验

方法：被检菌株移种于7%羊血琼脂上，30℃需氧条件

下孵育15〜18h,刮取菌落涂布于无色滤纸片上，加1滴上

述试剂，阳性者在2min内呈深蓝色。

若被测菌株移种在蛋白陈酵母浸出液琼脂上，至少孵育3天

以上，才可检测，阳性反应5〜lOmin出现。

5、常规鉴定过程：

1.形态与染色：本菌属革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5

—1.5uin不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液

培养物中，可见单个，成对或短链排列。无鞭毛和芽胞，某

些菌株能形成荚膜。

2.培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸

液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。最适pH

为7.4,最适温度为35—37℃。

在普通琼脂培养基上经37C24—48h培养，可形成圆形、凸

起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2

—3mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬

色色素。

在血琼脂培养基上，几乎所有的葡萄球菌可产生a、B、

Y和3溶血素（一种或一种以上）。

在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。

3.与链球菌鉴别：葡萄球菌与链球菌的区别如下：在镜下，

葡萄球菌以单、双、葡萄状排列，菌体呈圆形。链球菌以成

单、双、链状排列，菌体形态为圆形或椭圆形。葡萄球菌触

酶试验阳性，链球菌则阴性。

4.与微球菌的鉴别：实验室常用的鉴别依据是形态和发酵葡

萄糖产酸。在镜下，葡萄球菌以葡萄状排列为主，菌体较小；

微球菌以四联排列为主，且菌体较大。葡萄球菌发酵葡萄糖

产酸试验阳性，微球菌阴性。此外杆菌肽、吠喃理酮敏感试

验有利区别两属菌种。

5.鉴定要点及生化反应：

目前根据《伯杰鉴定细菌学手册》第九版报告葡萄球菌

共包括32个菌种、15个亚种，临床标本中最常见有意义菌

种是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血

葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和

猪葡萄球菌。首先用凝固酶试验将其分为凝固酶阳性的金黄

色葡萄球菌（包括中间和猪葡萄球菌）和凝固酶阴性的其他

葡萄球菌，然后用新生霉素敏感试验。推断新生霉素耐药为

腐生葡萄球菌。下表1列出了关键鉴定试验来区别上述8个

菌。

6、药物敏感试验：

1.挑取单个血平板上菌落（革兰染色阳性球菌,触酶阳性性）,

配成0.5T.0个麦氏单位药敏液，滴加于天地人微球菌药敏

板中进行药敏试验，结果通过天地人药敏软件判读。具体可

参看天地人药敏板半自动操作规程。

2.耐苯噗西林的金葡菌为MRSA,耐苯睡西林的凝固酶阴性

葡萄球菌为MRSCNo也可以选用头抱西丁来检测MRSA和

MRSCNo

7、临床意义：

凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌，可引

起社区和医院感染。感染常以急性、化脓性为特征，如果未

经治疗，感染可扩散至组织或经菌血症转移至其他器官。常

见的感染有拜、痈外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓

炎、化脓性关节炎、肺炎心内膜炎、脑膜炎等全身感染。此

外，某些菌株产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃

肠炎。主要的致病物质有血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀

白细胞素、肠毒素、表皮溶解毒素和毒性休克综合症毒素等。

凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤粘膜正常菌群之一，是医

院感染的主要病原菌，其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心

内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植感染

和人工关节感染等；腐生葡萄球菌则是女性尿路感染的重要

病原菌，其他凝固酶阴性葡萄球菌也以成为重要的条件致病

菌和免疫受损患者的感染菌。感染的发生常和细菌产生荚膜

多糖或糖萼有关，它增强细菌与外来物质（生物性瓣膜、导

管等）表面的粘附或在其表面形成一层生物膜而保护细菌对

抗杀菌物质作用。

治疗原则：由于耐药菌株的日益增多，治疗葡萄球菌感

染时，应根据体外药敏试验选择抗生素。如果是危、急、重

症感染，应首先经验选药，如万古霉素等，待体外药敏试验

结果回报后，再调整用药，针对治疗。

8、表1有临床意义的8种葡萄球菌关键性鉴定

试验

多需氧下产气

褥鸟B刹—

桐田产粘D

菌凝热氨西半生DDDD

，性咯生窟D|

菌种落聚D酸孚L霉1111麦蔗

磷烷V素1纤

色因N脱糖素蕈甘甘松芽

淘W肺1B小维

素子A竣随昔t露露二犍糖

但臃酶P褥槌二

酶酶酶及、犍醇糖糖

要犍

金黄色葡

+++++--d-+-+++++--++

萄球菌

表皮葡萄(d

---+-+-+-+--(+)(d)--++

球菌)

溶血葡萄

d-———————―^"--+d-(d)--++

球菌

里昂葡萄(+

d---++d+-d+-+(d)--++

球菌)

施氏葡萄

-++++-++--d-+

球菌

)

腐生葡萄

d------++++-+d+++

球菌

中间型葡

-++d++-+--++-(d)+d±+

萄球

猪葡萄球

-dd-++-+-+-+--+

菌菌

符号：+,90%以上阳性；土，90%以上弱阳性；一,

90%以上阴性；d,11%—89%阳性；（）迟缓反应。

9、质量控制：

进行了各种标准菌株的耐药及各种鉴定试验方法的质

控，以保证本室结果的准确性。

标题：微球菌标准操作程序版本号：A修订号：0

文件编码：WSW-SOP-003发布日期：年月日

生效日期：年月日发布部门：质量管理小组

编制人：审核人：

批准人（签章）：页码：第页共页

微球菌属的鉴定

1、标本要求：

1.尽量用药前采集标本。

2.痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾

液送检。

3.尿液：病人留取12h尿液，送检。

4.粪便：病人留取粪便5~10g,送检。

5.脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。血标本不

要冷冻。

6.不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取

24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。

2、仪器

35c孵箱、普通光学显微镜

3、试剂

血平皿、麦康凯平皿