《养殖鱼类重要病原微阵列基因芯片检测方法》征求意见稿

养殖鱼类重要病原微阵列基因芯片

检测方法Detectionmethodofmicroarraygenechipforimportantpathogensinculturedfish（征求意见稿）IIII人工养殖鱼类包括海水养殖和淡水养殖鱼类。其重要病原包括病毒、细菌和寄生虫。引起的疾病鲤浮肿病毒、鲤疱疹病毒II型、草鱼呼肠孤病毒、牙鲜弹状病毒、传染性造血器官坏死病毒、传染性脾肾坏死病毒、锦鲤疱疹病毒、真鯛彩虹病毒、鲤春病毒血症病毒、罗非鱼湖病毒、病毒性出血性败血症病毒、病毒性神经坏死病、刺激隐核虫、多子小瓜虫、溶藻弧菌和鳗弧菌等。这些病原大部分会引起疫病，它们造成的经济损失十分严重。鉴于此，高通量检测这些病原，将促进水产养殖业的健康发展。本文件由省部共建农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室组织实施。养殖鱼类重要病原的微阵列基因芯片检测方法1范围本文件规定了鲤浮肿病毒、鲤疱疹病毒H型、草鱼呼肠孤病毒、牙鲜弹状病毒、传染性造血器官坏死病毒、传染性脾肾坏死病毒、锦鲤疱疹病毒、真鍋彩虹病毒、鲤春病毒血症病毒、罗非鱼湖病毒、病毒性出血性败血症病毒、病毒性神经坏死病、刺激隐核虫、多子小瓜虫、溶藻弧菌和鳗弧菌等16种病原的基因芯片检测相关技术。本文件适于参与水生动物病害筛查病和渔业主管部门对疫病的监测和进行对水产养殖病害的调查。2规范性引用文件文中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版木(包括所有的修改本)均适用于本标准。GB/T27990-2011生物芯片基本术语标准GB/T34733-2017海水鱼类刺激隐核虫病诊断规程GB/T34734-2017淡水鱼类小瓜虫病诊断规程SC/T7011.1-2007水生动物疾病术语与命名规则第1部分：水生动物疾病术语SC/T7013—2008水生动物产地检疫采样技术规范SN/T1152—2011鲤春病毒血症检疫技术规范SC/T7225—2017草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法SC/T7228—2019传染性肌坏死病诊断规程SC/T7229—2019鲤浮肿病诊断规程SN/T2734—2010传染性鮭鱼贫血病检疫技术规范SN/T2706—2010鱼淋巴囊肿病检疫技术规范SN/T2850—2011病毒性出血性败血症检疫技术规范SN/T2982-2011牙鲜弹状病毒病检疫技术规范SN/T3584—2013草鱼出血病检疫技术规范SN/T1674—2014锦鲤疱疹病毒病检疫技术规范SN/T1675-2014真鯛虹彩病毒病检疫技术规范SN/T2121-2014流行性造血器官坏死检疫技术规范#Im-FCATCAAGCGGTGCTACTGGIm-RAAACTGCGTTATTGCCCTTGlm-pATGTTTGGTTGAAGGAGTCACCTGAGATTCGTAGCATVal-FTGI11IGCTGCACTGGGGTVal-RAACCACATAGGGATCAGCGAAAVal-pGATTATGGGCGGGATGACTATCACACCTATGCGAAATAVan-FATTCTCAGTGGCTCTTGGGCVan-RCCCCATCCCCAATCTAAGCCVan-pTCAGAATCTCATCCACCCAACCTTTACCAATGTAGTAGC注，F:正向引物；R:反向引物；PC：阳性对照；NC:阴性对照。R引物的5,端标记Hex为荧光标记微阵列基因芯片；R引物的5,端标记Biotin为非荧光标记微阵列基因芯片。附录B抗体稀释液配制BSA0.5%,NaN30.05%,用0.05mol/LpH=7.4Tris-HCl缓冲液配制。25卩LPCR扩增体系2xTaqPCRSuperMix加12.5卩L,引物加1卩L,模板1卩L,水加10.5卩L。杂交液准确称取10g硫酸葡聚糖，34mL的20xSSC溶液，加入20mL50xDenhaidfsSolution溶液，0.4gSDS粉末，加入4ml水，45ml甲酰胺溶液，・20。。保存。抗体稀释液BSA0.5%,NaN30.05%,用0.05mol/LpH=7.4Tris-HCl缓冲液配制。

附录c普通PCR扩增条件：95。（3预变性5mill；95。（3变性30s、55。（3退火