小建中汤配伍不同糖类方对胃溃疡模型小鼠影响的比较研究

小建中汤配伍不同糖类方对胃溃疡模型小鼠影响的比较研究

小建中汤是“中风”之一。“中风脉连续两天，心烦意乱，小坚中汤是大师。”其作用既温中补虚,又益气养血1实验材料和设备1.1实验动物中心提供昆明种小鼠70只,体质量(20±2)g,雌雄各半,由山东中医药大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鲁)20140003。动物实验室标准规范化饲养,光照、温度、湿度适宜,自由进食、饮水。1.2小建中汤药物剂量算例桂枝、芍药、大枣、甘草,购自山东中医药大学中鲁医院;生姜、饴糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖,购自济南漱玉平民大药店。西咪替丁(每片0.2g,批号20141102),由山东仁和堂药业有限公司生产。小建中汤中药物比例严格按照张仲景《伤寒论》的药物剂量和要求,小鼠药物使用量根据不同种类动物之间药物剂量换算法进行换算。称取饴糖7.73g(葡萄糖7.73g或白砂糖7.73g或乳糖7.73g)、芍药18.56g、桂枝9.28g、甘草6.19g、大枣20.40g、生姜9.28g,除饴糖或其他糖类外,将其余5种药物按上述剂量浸泡30min,煎煮两次,每次30min,加入饴糖或其他糖类,用双层纱布过滤去渣后经水浴蒸发制成每毫升含1g生药的水煎液(浓度为100%),高温灭菌后在4℃冰箱保存备用。1.3紫外分光光度计台式高速冷冻离心机(上海赛默飞世尔科技有限公司);显微镜测微尺(上海光学仪器厂);WFZUV-2100型紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)。超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20140604;丙二醛(MDA)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20140702。无水乙醇,分析纯AR,批号20130703;二甲苯,分析纯AR,批号20131218。2实验方法2.1灌胃小建中汤、西咪替丁的造模方法将70只健康小鼠随机分为7组,分别为小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组、小建中汤白砂糖组、小建中汤乳糖组、空白对照组、胃溃疡模型组和西咪替丁对照组,每组10只。其中小建中汤饴糖组、小建中汤白砂糖组、小建中汤乳糖组、小建中汤葡萄糖组分别按0.25mL/10g灌胃小建中汤配伍相应糖类方药液,西咪替丁对照组等体积灌胃西咪替丁(88mg/mL)药液,空白对照组、胃溃疡模型组灌胃等体积生理盐水;每日定时灌胃1次,连续灌胃7d,末次给药前禁食24h但不禁水,在末次给药1h后使用灌胃无水乙醇每只0.3mL,建立小鼠胃溃疡模型。2.2小鼠血清sod、mda的检测灌胃无水乙醇1h后,摘眼球取血1mL,4000r/min离心20min,分离血清,4℃冰箱留存备用,用于检测血清SOD、MDA的含量。之后脱颈椎处死小鼠,解剖取胃,结扎幽门及贲门并经胃壁向胃腔内注入10%中性甲醛2mL,摘除整个胃置于10%中性甲醛溶液中固定10min。从幽门沿胃大弯剪开,用生理盐水冲洗后,将胃展平于玻片上,在装有物镜测微尺的显微镜下观察胃黏膜的组织学变化。2.3腺区胃黏膜损伤程度在显微镜下观察胃黏膜的组织学变化,并用物镜测微尺测定溃疡指数、计算溃疡抑制率。测定胃腺区胃黏膜损伤的程度:(1)溃疡面长度和宽度均大于1mm者,测量最大长度和宽度,并相乘,记分;(2)溃疡面长度大于1mm,宽度小于1mm者,测量长度,并记分。(3)长度和宽度均小于1mm者记1分。将计分相加即为该动物的溃疡指数。计算溃疡抑制率:2.4光镜标本的制作全胃置10%中性甲醛溶液室温固定48h,按照组织修整,洗涤,脱水,透明,浸蜡,包埋,切片,脱蜡,苏木素—伊红染色,脱水,透明,封片的步骤制作光镜标本。用显微镜观察,并拍摄镜下照片。2.5影响大鼠血清sod和mda水平的影响按照试剂盒说明书,分别用WST-1法和TBA法检测血清。2.6统计分析方法应用SPSS17.0统计软件对数据进行统计分析,数据以ue0af±s表示,用单因素方差进行组间检验、分析,判断其差异显著性,取α=0.05为检验水准。3结果3.1溃疡指数的统计由表1可知,胃溃疡模型组与空白对照组比较差异存在显著性,有统计学意义(P<0.01)。小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组和西咪替丁对照组与胃溃疡模型组比较,溃疡指数显著降低;小建中汤白砂糖组、小建中汤乳糖组与胃溃疡模型组比较,溃疡指数无显著性差异。小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组、小建中汤白砂糖组和小建中汤乳糖组对溃疡的抑制率分别为24.90%、20.37%、15.43%和5.15%。3.2小鼠胃黏膜变化空白对照组小鼠胃黏膜表面光滑平整呈正常状态,无明显黏膜出血、溃疡。胃溃疡模型组、小建中汤白砂糖组和小建中汤乳糖组小鼠胃黏膜有不同程度的损伤,胃黏膜大面积糜烂表面附着血痂。小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组和西咪替丁对照组仅有轻度胃黏膜充血、水肿,未见明显出血或糜烂。各组小鼠胃黏膜肉眼大体观察见图1。3.3对小鼠胃黏膜病理切片的影响光学显微镜下观察空白对照组结构层次清楚,黏膜上皮无变性、坏死、脱落及溃疡形成,腺体大小、形态、分布正常,肠壁全层未见炎细胞浸润。胃溃疡模型组病理损伤较重,黏膜上皮基本损伤,腺体结构紊乱或坏死,浅层胃底腺破裂,并可见炎细胞浸润。小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组和西咪替丁对照组肠壁结构与形态基本接近正常组织,病理损伤较轻。小建中汤白砂糖组和小建中汤乳糖组可见局部腺体结构紊乱,黏膜表面可见缺损。观察比较各组胃黏膜病理切片,只有小建中汤配伍饴糖方、小建中汤配伍葡萄糖方才能够对无水乙醇法致小鼠胃溃疡具有较好的保护作用。各组的胃组织HE切片病理形态观察见图2。3.4不同类型的著性差异由表2可知,与空白对照组比较,胃溃疡模型组小鼠血清SOD、MDA含量存在显著性差异。小建中汤饴糖、小建中汤葡萄糖组和西咪替丁对照组与胃溃疡模型组比较,小鼠血清中SOD含量明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.01);小建中汤白砂糖、小建中汤乳糖组与胃溃疡模型组比较,无显著性差异。4胃黏膜组织病理学观察本实验应用小建中汤配伍饴糖、葡萄糖、白砂糖和乳糖方治疗胃溃疡模型小鼠,通过比较不同糖类物质在小建中汤中发挥的治疗作用,阐述小建中汤中君药饴糖的使用规范问题。通过各组溃疡指数对比、胃黏膜肉眼大体观察及胃黏膜组织病理学观察,可知小建中汤饴糖组和小建中汤葡萄糖组均表现出较好的小鼠胃黏膜损伤预防保护作用,且预防保护效