病料采集流程

病料采集流程第1页一、用途采集病料常用于细菌分离、涂片检查、抗体检测、病毒分离、病理切片、免疫组化、PCR判定、试纸迅速诊断等。一般在出现紧急疫情情况下采集。第2页二、病料采集注意事项

1.适时采样。用于病源原分离样品应在发病早期采集或者有典型症状时采集，急性死亡动物要立即采集病料。2.合理采样。在不懂得是何种疫病时采样要全面，包括心、肝、脾、肺、肾、脑等组织器官，还要采集血液、血清、粪便和分泌液等，方便诊断。3.适量采样。一般在诊断过程中一只鸡样本是不够，经常在采集时会做到10只鸡以上，假如是血清学检测采样量一般要大于24份。单个样本量要足够，方便在复检时尚有足够样本。4.无菌采样。所用与采样器械需要通过消毒处理，每个样品单独寄存在一种包装内。采样除要避免样品污染更主要是要避免采样人员感染，因此采样人员必须佩戴乳胶手套和口罩。5.及时送样。储藏固定液固定组织和骨组织外，其他样本采集好后均需要进行冷处理。在一天内能送到检测中心放在4℃，在一天内不能运到样品最佳在-20℃做冰冻处理，然后冷链运输。6.每次采样送检。填写《送样信息表》，须注明场子、送检人、被检鸡群日龄，日期，检测项目、检测目标。7.送样时间。避免周六周日、节假日、培训日，提前和动保中心人员电话联系确定。8.让司机或班车捎样，必须电话跟踪，确定送至目标地。第3页三、采集步骤1肿瘤病料采集重点：需要用固定液固定，用于马立克、白血病、网状内皮切片检测。1.1尽可能采集活鸡病料，不要采死鸡病料。1.2采病料前放血一定要充足。1.3病鸡病变组织要显著,要有两个以上组织或器官有肿瘤病变。1.4组织块儿大小要求1cm×1cm×1cm或1.5cm×1.5cm×1.5cm,组织块儿太大固定效果不好。1.5采集正常组织和肿瘤组织交界处组织。1.6每瓶固定液只能盛一只鸡病料。1.7固定液浓度要求10%福尔马林（即10毫升40%甲醛+90毫升水）。1.8固定液最佳盛在洁净矿泉水瓶中,组织与固定液百分比为1:20以上。1.9采集脾脏时一定要剪开筋膜;腺胃不要环切,要顺腺胃长轴竖切。第4页第5页2鸡只送样要求：2.1活鸡选择有显著症状鸡只，如呼吸道、伸颈、发蔫、挣扎、神经等。2.2死鸡选择新鲜刚死亡鸡只，并放于阴凉处。2.3使用纸箱子，将鸡只放于纸箱，并用胶带缠好，并用剪刀扎上透气孔。2.4不可将鸡放于汽车高温地方，如发动机旁。第6页3组织和实质器官采样要求：用于病毒或细菌分离3.1采取刚死亡鸡只或刚杀死鸡只病料。3.2分离病毒采取脾脏、肺脏、气管、输卵管、脑部、肾脏等组织。3.3分离细菌以采取肝脏为主。3.4病料采集必须采取无菌操作。剖开腹腔后，注意肠管完整。更换无菌器械，直接将目标病变器官摘下放到无菌包装袋中封好，每只鸡一种口袋。3.5将病料袋标明时间、场名、栋舍、日龄。3.6分离病毒病样冷冻保存.3.7分离细菌病样尽可能冷藏保存，冷冻会造成细菌细胞破裂死亡。第7页气管肾脏法氏囊脾脏脑部肺脏输卵管第8页细菌病采集部位第9页病毒病采集部位第10页4、血清检测送样：用于检测抗体、凝集试验、琼脂扩散试验、Elisa。4.1血清析出后将血清放于输液管内并封好两端，放至保温盒冰袋内，送动保中心。4.2假如因时间紧急，可送全血，将注射器内血液凝固后，用胶带缠好，放置冰袋即可送检。第11页第12页5、液体病料采集胆汁、脓肿液、渗出物等液体病料，使用灭菌吸管或注射器，经烫烙部位吸取病变组织液体，将病料注入灭菌试管中，塞好棉塞送检。第13页6、肠道及内容物采集办法6.1肠道：选择病变显著部位肠道，将内容物弃掉，用灭菌生理盐水冲洗洁净，然后将病料放入盛有灭菌30%甘油盐水缓冲液中送检。6.2亦可将肠管切开，用灭菌生理盐水冲洗洁净，然后用烧红手术刀片烫烙粘膜表面，将接种针插入粘膜层，取少许病料接种于培养基上。6.3肠内容：用烧红手术刀片烫烙肠道浆膜层，将接种针插入肠道内，吸取少许肠内容，放入试管中或将带有肠内容肠道两端扎紧，去掉其他部分送检。第14页7、皮肤及羽毛采集7.1皮肤要选病变显著部分边缘，采取少许放入灭菌试管中送检；7.2羽毛也要选病变显著部分，用灭菌刀片刮取羽毛及根部皮屑少许，放入灭菌试管中送检；7.3孵化室绒毛：用灭菌镊子采取出雏机出风口绒毛3-5克，放入灭菌试管中送检。第15页8、泄殖腔、气管棉拭子采样：检测细菌、病毒取无菌棉签，插入鸡喉头内或泄殖腔转动3圈，取出，插入含无菌缓冲液离心管内，剪去露出部分，盖紧瓶盖，作好标识。第