分光光度法材料-张世春

张世春2014.12.30分光光度法1.分光光度法定义：分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性或定量分析。2.常用的波长范围为：(1)200～380nm的紫外光区，(2)380～780nm的可见光区，(3)2.5～25μm的红外光区。3.所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。4.分光光度计4.1分光光度计的简单原理

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。一、分光光度法基础知识4.2分光光度计主要结构主要部件：光源、分光系统（单色器）、吸收池（比色皿）、检测系统。4.3为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程，定期进行校正检定。4.4操作方法1）检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，接通电源开关，打开样品室暗箱盖，使电表指针处于“0”位，预热20min后，再选择须用的单色光波长和相应的放大灵敏度档，用调“0”电位器调整电表为T=0%。2.盖上样品室盖使光电管受光，推动试样架拉手，使参比溶液池（溶液装入4/5高度，置第一格）置于光路上，调节100%透射比调节器，使电表指针指T=100%。3.重复进行打开样品室盖，调0，盖上样品室盖，调透射比为100%的操作至仪器稳定。4.盖上样品室盖，推动试样架拉手，使样品溶液池置于光路上，读出吸光度值。读数后应立即打开样品室盖。5.测量完毕，取出比色皿，洗净后倒置于滤纸上晾干。各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，拔下电源插头。6.放大器各档的灵敏度为：“l”×1倍；“2”×10倍；“3”×20倍，灵敏度依次增大。由于单色光波长不同时，光能量不同，需选不同的灵敏度档。选择原则是在能使参比溶液调到T=100%处时，尽量使用灵敏度较低的档，以提高仪器的稳定性。改变灵敏度档后，应重新调“0”和“100”。4.5注意事项1）了解仪器的结构和工作原理，以及各个操作旋钮的功能。在未接通电源之前，应该对于仪器的安全性进行检查。

2）仪器在使用前先检查一下，放大器及单色器的二个硅胶干燥筒(在仪器底部)，如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶烘干后再用。

3）在仪器尚未接通电源时，各个调节旋钮的起始位置应该正确。电表的指针必须位于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

4）仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，请根据仪器调校步骤进行调整，

然后投入使用。

5）选择合适的灵敏度档。

6）如果大幅度改变测试波长时，在调整透光率“0”和“100％”后稍等片刻，(钨灯在急剧改变亮度后需要一段热平衡时间)，待指针稳定后重新调整透光率“0”和“100％”即可工作。

7）仪器工作不正常时，如无输入，光源灯不亮、电表指针不动，应首先检查保险丝有否损坏，然后检查电路。

8）当仪器停止工作时，必须切断电源，开关放在“关”。

9）比色皿保持干净，注意擦拭过程手拿不光滑那面。4.6分光光度计吸光度读数（以721分光光度计为例）

1）表盘一般有上下两排数，分别代表吸光度和透光率，你只要只按一排读就可以，一般是按吸光度算的。2）721分光光度计上的微安表上的吸光度刻度数是以透光度刻度值的负对数计算得出的。0—0.1—0.2—0.3之间都是