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文档简介
§5.1DNA的粗提取与鉴定学习目标:
1.简述DNA的物理化学性质,学会对植物或动物组织中的DNA进行粗提取。2.简述DNA鉴定的原理,说出DNA鉴定的过程。
激情投入,快乐学习,反思进步。展示内容展示组点评组1.画出DNA在Nacl溶液中的溶解度曲线,并解读该曲线G1G62.DNA和蛋白质在酒精溶液中的溶解度的区别G2G53.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性如何?G3G44.如何鉴定DNA?G4G35.去除滤液中的杂质的三种方案分别是什么?G5G26.DNA进一步析出的方法是什么?G6G1展示要求:1、语言简洁、准确。2、非展示同学认真思考,准备点评补充和质疑。点评要求:1、点评同学声音洪亮,言简意赅。2、非点评同学注意倾听、思考,关键内容做好笔记,有补充或不明白的地方及时提出。高效展示Letmetry!探究讨论:探究讨论1:什么样的材料更适合提取DNA?对植物和动物细胞处理的方法是否相同?探究讨论3:若用二苯胺鉴定DNA时试管中不呈现蓝色或蓝色较浅,你觉得原因可能有哪些?探究讨论2:在DNA的进一步析出过程中为什么酒精要冷却?此步骤中玻璃棒能否快速地搅拌?为什么?1.DNA的溶解性
基础知识:2.DNA不溶于酒精溶液DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。3.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质,
对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60~80℃
而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——瓦解细胞膜,
但对DNA没有影响4.特定的颜色反应——鉴定DNA沸水浴条件下,DNA与二苯胺反应呈现蓝色。探究讨论:探究讨论1:什么样的材料更适合提取DNA?
选用DNA含量相对较高的组织,易得易破裂你认为下列哪些材料更适合提取DNA?菜花、香蕉等植物细胞;鸡血、哺乳动物的红细胞;在液体培养基中培养的大肠杆菌观看视频,思考下列问题:(1)对植物和动物细胞处理的方法是否相同?
(2)结合课本,试想想视频中对植物细胞处理时加入的研磨液中可能有哪些成分,作用分别是什么?
(3)鉴定DNA时,为什么用三支试管?
观看视频,思考下列问题:(1)对植物和动物细胞处理的方法是否相同?
(2)结合课本,试想想视频中对植物细胞处理时加入的研磨液中可能有哪些成分,作用分别是什么?
不同,动物细胞直接加蒸馏水吸水涨破植物细胞如菜花还需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨研磨液中可能含有洗涤剂和食盐洗涤剂作用:溶解细胞膜食盐作用:有利于溶解DNA去除滤液中的杂质有哪些方案?方案一方案二方案三恒温水浴锅DNA的进一步析出:探究讨论2:在DNA的进一步析出过程中为什么酒精要冷却?此步骤中玻璃棒能否快速搅拌?酒精冷却的原因:
①低温可抑制核酸水解酶的活性,防止DNA降解②低温可降低分子的运动,易于形成沉淀析出③低温有利于增加DNA分子的柔韧性,减少断裂玻璃棒不能快速搅拌的原因:防止DNA分子断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀探究讨论3:若用二苯胺鉴定DNA时试管中不呈现蓝色或蓝色较浅,你觉得原因可能有哪些?DNA的鉴定:原因可能有:1.材料中核物质没有充分释放出来,如研磨不充分或蒸馏水的量不够2.加入酒精后摇动或搅拌时过猛,DNA被破坏3.析出含DNA的黏稠物时,蒸馏水一次快速加入,影响实验结果4.实验中有多次搅拌,但是其目的及操作方法是不同的,操作时不注意区分,影响实验结果(3)鉴定DNA时,为什么用三支试管?第一支试管中加从动物细胞中获得的DNA提取液第二支试管中加从植物细胞中获得的DNA提取液第三支试管中不加DNA提取液,作为
空白对照,其他条件一致归纳总结:DNA粗提取和鉴定的主要步骤1、材料的选择
2、破碎细胞释放DNA3、去除滤液中的杂质4、DNA的析出与鉴定DNA含量丰富的细胞含核物质DNA的滤液DNA在NaCl中溶解度不同向2mol/lNaCl中加入冷酒精,让DNA析出物在沸水浴下与二苯胺反应显蓝色当堂检测:见检测案1、关于DNA的粗提取与鉴定的实验,不是该实验依据的实验原理的一项是(
)。A.DNA在NaCl溶液中的溶解度,随着NaCl溶液浓度的不同而不同B.利用DNA不溶于酒精的性质,可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC.DNA是大分子有机物,不溶于水而溶于某些有机溶剂D.在沸水中DNA遇二苯胺会出现蓝色反应当堂检测:见检测案2、下表有关“DNA粗提取与鉴定”的相关操作中所选取的试剂,不正确的是(
)。当堂检测:选项相关操作
选取的试剂A
破碎鸡血细胞
蒸馏水B
溶解核内DNA
2
mol/L
NaCl溶液C
提取杂质较少的DNA
冷却的95%的酒精D
DNA的鉴定
双缩脲试剂当堂检测:3.在DNA的粗提取的步骤中,对增加DNA提取量不利的是(
)。A.使血细胞在蒸馏水中充分破裂,充分放出DNA等物质B.在滤取含DNA的黏稠物时,要用多层纱布C.在析出含DNA的黏稠物时,要缓缓地加入足量的蒸馏水,稀释度越小越好D.要用冷酒精沉淀DNA,再将混合物放入冰箱中冷却4、某同学在做DNA的粗提取与鉴定实验中,加入二苯胺鉴定的结果是有DNA的试管中溶液颜色很淡,其原因不可能是()A.经蒸馏水处理的红细胞,在用玻璃棒搅拌时,时间偏少,
使红细胞破裂数量少
B.未进行沸水浴或沸水浴时间短,导致DNA含量少,染色
时间不够
C.选择鸡血液时,选用鸡血细胞液,D.用NaCl溶液进行盐析时,所配制的NaCl溶液浓度达不到0.14moL/L,使析出的DNA少C1.填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。
⑴提取鸡血细胞中核物质:
⑵溶解核内DNA:
⑶析出2mol/LNaCl溶液中
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