高动能研磨结合uplc-msms法快速检验出口出口、口腔药品中常见毒品及其代谢物

高动能研磨结合uplc-msms法快速检验出口出口、口腔药品中常见毒品及其代谢物

中国的药毒价格很低，新的药物也层出不穷。根据2018年中国的药物状况报告。近年来，头发药毒物分析在法庭科学领域的应用不断扩大毛发的前处理方法较多，例如酶消解、酸消解和碱消解、甲醇超声、高动能研磨法等，各有特点。与酶消解、酸消解和碱消解等前处理方法相比，高动能研磨法能够节省大量时间和成本，可以满足我国公安机关在拘留24h内必须做出决定的要求;另外与直接进行甲醇超声相比，高动能研磨可使毛发的角质层破坏得更加彻底，有利于提取剂深入毛发内部对目标物进行提取。因此，本文建立了一种高动能研磨结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法分析毛发中7种常见毒品及其代谢物的方法，采用建立的方法检测毛发样本，得到甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺的含量数据，并结合统计学方法对数据进行分析处理，分析吸毒者毛发中甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺的含量分布规律。1实验部分1.1实验仪器和材料Shimadzu30AUPLC超高压液相色谱仪(日本岛津公司);Q-TRAP5500串联质谱联用仪(美国ABSCIEX公司);纯水仪(美国MILLIPORE公司);AUW120D电子天平(日本岛津公司);台式高速冷冻离心机(德国SiGMA公司);球磨仪(北京万孚智能科技公司)。1mg/mL的甲基苯丙胺(MA)、苯丙胺(AP)、3,4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA)、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)、氯胺酮、吗啡、O甲酸、甲酸铵(色谱纯，赛默飞世尔科技(中国)公司);甲醇、乙腈(色谱纯，国药集团化学试剂公司)。空白头发取自3个月以来未使用过任何药品的健康人后枕部头发;检材头发取自浙江和云南吸毒人员(选择近3个月来有吸毒史的志愿者，均已签订知情同意书)，头发样本从后枕部的顶点采集，离头皮尽可能近。样品在室温下保存在透明样品袋中，直至分析为止。1.2正常研磨学习将头发样品置于15mL离心管中，对毛发样品进行清洗以消除外部污染。每个头发样品用5mL去离子水洗涤2次，再用5mL丙酮洗涤2次，每次清洗时间为2min。收集最后一次洗涤溶剂进行N将洗涤干净的头发从离心管中取出，置于通风橱中晾干。将头发剪成2～3mm左右的小段，准确称取20mg头发并置于专用研磨管内。在研磨管内加入1mL甲醇，振荡混匀。使用球磨仪在3000r/min的频率下研磨3min，超声处理2h，取研磨液500μL置于离心管中，以4000r/min离心5min，取上清液经0.22μm有机膜过滤，滤液待UPLC-MS/MS分析。1.3-质量分析的质量分析条件1.3.1流动相的洗脱选用PhenomenexKinetexBighenyl(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱;0.1%甲酸-水(1mmol/L甲酸铵)(A相)和乙腈(B相)作为流动相，流速0.4mL/min，进样量1μL，柱温35℃。采用6min梯度洗脱模式:0.0～1.0min,5%B;1.0～1.1min,5%～20%B;1.1～4.0min,20%～95%B;4.0～5.0min,95%B;5.0～5.1min,95%～5%B;5.1～6.0min,5%B。1.3.2质量分析条件采用电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI2结果与讨论2.1%苯甲酸和0.1%甲醛水加dmol/l酸碱作为水相时对峰形的影响考察了甲醇和乙腈作为两种有机相对分离效果的影响，结果表明甲醇和乙腈对峰形影响不大。以乙腈作为有机相(B)，分别考察0.1%甲酸和0.1%甲酸水加5mmol/L甲酸铵作为水相时对峰形的影响，结果表明0.1%甲酸水加5mmol/L甲酸铵能够有效改善峰形，梯度洗脱效果较好。最终确定以0.1%甲酸加5mmol/L甲酸铵(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱。2.2处理前方法的优化2.2.1不同提取剂的提取效率比较考察了去离子水、甲醇、乙腈、乙醇、甲醇/乙腈等体积混合溶剂这5种提取剂对毛发中7种毒品和代谢物的提取效率，通过色谱峰面积的大小比较不同提取剂对7种毒品和代谢物的提取能力，结果见图1。乙腈对于MDMA和氯胺酮的提取效果稍好于其他提取剂，而对于甲基苯丙胺、苯丙胺、MDA、吗啡和O2.2.2联合干磨或干磨研磨可分为湿磨和干磨两种方式。湿磨就是将提取剂和毛发共同置于研磨管中进行研磨，使毒品在研磨过程中进入提取剂，而干磨就是先单独将毛发研磨成灰色粉末，再加入提取剂混匀提取。对含7种毒品的毛发分别使用这两种方式进行研磨，结果表明甲基苯丙胺和氯胺酮这两种毒品采用湿磨方法提取效果较好，相较于干磨方法，提取率分别提高了18.88%和23.36%，针对其他毒品这两种方法的结果无明显区别，但总体上湿磨法的提取效果优于干磨法，因此选择湿磨法。2.3方法的线性范围和检出限准确称量20mg洗净的空白头发6份，置于6支研磨管中，在每支研磨管中加入1mL不同浓度(1,2,4,10,20,100ng/mL)的7种毒品的混合标准溶液并用N由表2可知，在0.05～5ng/mg的线性范围内，7种毒品的相关系数(r)均>0.99，该方法在该浓度区间内的线性关系良好;方法检出限(S/N=3)范围在5～20pg/mg;定量限(S/N=10)范围在20～50pg/mg。根据公安部于2018年颁布的《涉毒人员毛发样本检测规范》第九条可知，毛发样本中O2.4方法的回收方式准确称量20mg干净空白头发若干份置于研磨管中，分别添加1mL3种不同浓度(1,10,100ng/mL)的混合标准溶液并用N其中X为空白毛发中加入混合标准溶液后按照1.2的方法处理检测后得到的峰面积平均值;Y为将空白毛发进行前处理后加入混合标准溶液提取进样检测得到的峰面积平均值;Z为毒品标准溶液检测得到的峰面积平均值。制备上述浓度梯度的样品并进行前处理，在一日内的早上8:00、中午14:00、晚上20:00这3个不同的时间进行检测，通过计算各毒品峰面积的相对标准偏差，得到日内精密度。按上述方法，连续3天在同一时间进行检测，得到日间精密度。7种毒品在1.2前处理方法下的回收率、基质效应、日间精密度和日内精密度如表3。由表3数据可知，7种毒品和代谢物在上述前处理方法下的回收率范围介于63.1%～99.5%之间，且回收率与毒品含量大致呈正相关关系;基质效应范围介于82.3%～99.9%之间，证明基质对实验结果的影响较小，能够满足检测要求。2.5毛护氏样本数据的统计分析2.5.1女性样本的基本特征收集175份冰毒吸食者毛发样本，其中男性样本为125份，占样本总数的71.43%，女性样本为60份，占样本总数的28.57%。将上述样本按照1.2介绍的前处理方法进行批量处理和进样检测，对于含量超出线性范围的样品，提取液稀释至线性范围之内后再进行换算统计，以确定其中阳性样本所含毒品和代谢物的含量数据。2.5.2含量分布的分段统计通过检测可知175份毛发样本中均检出甲基苯丙胺，其中104份检出苯丙胺，所有样本中的毒品含量均在规定阈值以上，对于甲基苯丙胺和苯丙胺的含量数据借助描述性统计的相关方法由以上数据可知，阳性毛发中甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺的含量数据离散程度较大，如果直接借助描述性统计的相关方法进行分析不利于探究含量分布规律，因此必须按照一定的方法对含量数据进行分段统计。相关文献针对此类问题提出过一些分段方法，如SooyeunLee等由表4可知，数据经分段处理后，各含量区间内数据的分布趋势较为明显，当含量较少时，数据相对集中，离散程度较小;随着含量的增大，数据的离散程度也逐渐加大。从整体上看，毛发阳性样本中毒品大多集中在低浓度范围，个别高浓度数值对平均浓度的确定具有较大影响。另外通过数据分析可以发现，5ng/mg和10ng/mg是两条相对明显的分界线，一方面，所有样本中苯丙胺的含量基本维持在10ng/mg以内，且大部分样品含量维持在5ng/mg以内;另一方面，甲基苯丙胺的含量在10ng/mg以内的样本数占样本总数的64.57%，且含量分布较为均匀，而10ng/mg以外的含量分布相对比较分散，这对于理解甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺在毛发阳性样本中的含量范围具有一定的参考意义。2.5.3原药形态、代谢代谢物与母体药物含量比率可能受多种因素影响表5中的数据表明，甲基苯丙胺阳性毛发样本中母体药物含量较高，代谢物含量较低，证明毒品在毛发中主要以原药形态存在，代谢物相对较少。随着甲基苯丙胺含量的升高，其代谢物苯丙胺的含量也基本随之升高，但苯丙胺的含量远低于甲基苯丙胺，苯丙胺与甲基苯丙胺的含量比率(AP/MA)介于0.015～0.384之间，并且随着毛发阳性样本中甲基苯丙胺含量的升高，其代谢产物与母体药物的含量比率总体上呈现出一定的下降趋势，表明了二者之间呈负相关关系，图3中各区间平均含量比率的变化趋势也在一定程度上印证了这一点。3基层公安工作需要应用于麻黄供应链的研究建立了高动能研磨-超高效液相色谱串联质谱检验毛发中7种常见毒品和代谢物的方法。该方法操作简便，基质效应低，线性关系好，回收率较高，能够满足基层公安工作需