湖北某养殖场鸡常见的问题

湖北某养殖场鸡常见的问题

近年来，随着特种鸟类市场需求的增加，特种鸟类育种和畜牧业的快速发展。七彩山鸡作为一种具有极高综合利用价值的特禽,不仅抗病能力和适应力强、繁殖快,而且肉质细嫩、鲜美,还具有药用价值。随着七彩山鸡规模化养殖的开展,其感染因素和发病风险增加1材料和方法1.1疾病信息来源病料为湖北某养殖场饲养的4月龄七彩山鸡(进行过火鸡疱疹病毒活疫苗的免疫)。1.2pcr及dmem等9~11日胚龄SPF鸡胚购自济南赛斯家禽科技有限公司;rTaq、dNTPs等PCR相关试剂,以及DL2000DNAMarker等为宝生物工程(大连)有限公司产品;DMEM、0.25%胰酶、胎牛血清为GBICO产品;淋巴细胞分离液购自北京博润莱特科技有限公司。1.3病理组织切片制备观察鸡群临床症状,对症状典型的病鸡进行剖检,查看各组织器官的病变情况,取病变典型的组织,按照常规方法取材固定,以制备病理组织切片。1.4mdv的培养采用无菌注射器采集2mL病鸡抗凝血,按常规方法在无菌环境中用淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞,接种长至80%~90%的单层鸡胚成纤维细胞(CEF),37℃恒温培养2h,弃去上清液,PBS洗涤2~3次后加入培养液继续培养,培养4~7d后未见明显蚀斑则盲传1代继续培养,若培养3代后仍未见蚀斑出现即代表该样品不含MDV。若出现蚀斑则将该细胞瓶中的细胞消化,收集部分含毒细胞提取基因组DNA。1.5引用设计根据GenBank中的MDV强毒株和超强毒株序列,参照文献1.6lmfmv/mdv预变性循环PCR反应体系均采用25μL体系:10×PCRBuffer2.5μL,MgPCR反应条件:94℃预变性3min;94℃变性30s,58℃(ALV-A/B/J)退火30s或55℃(REV/MDV)退火30s,72℃延伸1min,共进行30个循环;72℃终末延伸10min,4℃10min。PCR扩增产物采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。2结果与分析2.1病理组织学检测病鸡精神萎靡,整体消瘦,鸡冠、肉髯苍白,视力减退,羽毛色泽暗淡,并伴有腹泻现象。剖检可见多种脏器均发生肿瘤,肝脏肿大,呈暗红色,表面有凸起的大小不等的针尖状白色结节;肾脏亦肿大,表面和切面有弥散分布的灰白色结节;心外膜下、冠状沟、心尖等处均见脂肪样光泽的黄色结节(见图1A);腺胃肿大,乳头出血(见图1B);脾脏肿大,表面覆盖栗粒大小的结节(见图1C);肾脏组织肾小管间可见多形态淋巴细胞增生并伴有明显的核分裂相(见图1D)。病理组织切片H.E.染色镜检结果显示:肝细胞变性坏死,可见大量形态不一的淋巴细胞增生(见图1E);脾脏亦见多形态淋巴细胞增生;心脏固有肌纤维萎缩、断裂,心肌纤维间可见多形态淋巴细胞增生(见图1F)。2.2病毒分辨率采集病鸡抗凝血分离外周血淋巴细胞接种于CEF单层细胞,盲传两代后可产生典型的MDV噬斑(见图2)。2.3pcr鉴定使用针对meq的特异性PCR引物对从感染的CEF细胞中提取的基因组DNA进行PCR鉴定,在856bp处出现特异性条带,与预期片段大小相符(见图3)。使用针对ALV-A/B/J的Multi-PCR引物和REV的引物进行PCR鉴定,均未扩增出任何条带(见图4)。3病毒的感染及防控MDV是高度接触传染性病毒,疫苗接种是防控该病的关键,尽管疫苗预防能起到很大的作用,但免疫失败导致该病的暴发时有发生,雏鸡的早期感染可能是引起免疫鸡群大量死亡的最重要因素。年龄大的鸡感染MDV后,病毒在体内不断复制,带毒鸡成为了隐形的传染源,病毒从鸡脱落的羽毛囊和皮屑排出,使污染鸡舍的灰尘保持传染性,致使该病的传播以难控制。随着特禽养殖业的发展,七彩山鸡的市场需求量日益扩大,许多养殖户为了抓住商机,开始人工饲养七彩山鸡。在人工规模化饲养中,由于饲养管理的不科学,疫苗接种的忽视,疫苗接种方法的不正确等常导致MD的暴发。根据症状和病变发生的主要部位,该病在临床上分为神经型、内脏型、眼型和皮肤型四种近年来,MD在全国许多地方均有发生,MDV已由强毒演变成超强毒株,给养禽业造成了巨大的危害。建议特禽养殖业者加强对该病的重视,不可免