辛伐他程序开发糖尿病慢性老龄化鼠模型的实验研究

辛伐他程序开发糖尿病慢性老龄化鼠模型的实验研究

这种支持是一种常见的抗高血压药物。抑制颗粒酶hmg-coa的代谢酶限制用于胆固醇合成，从而降低血清中的蛋酸酯。在最近的肾脏疾病的临床和实验研究中，发现这些药物对肾脏的保护并不完全取决于降脂效果。中脂纤维具有严格的组织特异性，来自同一基因家族，具有高度的同源性。中脂纤维与细胞的形成密切相关。波形蛋白是一种由单一多酚链组成的中间纤维，主要分布在中胚胎层的来自组织中。角质纤维存在于上皮细胞和结蛋白纤维存在于肌肉细胞中。研究发现肾脏固有细胞转分化在肾脏纤维化发生发展中起十分重要作用。其转化程度与肾功能下降的程度相平行。通过老龄鼠单肾切除后,给予一次性腹腔注射40mg/kg链脲佐菌素,破坏胰岛β细胞,制成糖尿病模型,辛伐他汀(8mg/kg/day)溶于CMC液灌胃干预治疗,探讨他汀类药物不依赖降血脂的肾脏保护作用。1.材料和方法1.1材料测试1.1.1实验动物和设备健康、雄性、15月龄、清洁级SD大鼠32只,体重480-550克,动物生产许可证号:SCXK(苏)2007-0023由南通大家动物实验中心提供。1.1.2光学显微镜以及图像分析系统LKB-V超薄切片机,LKB公司(瑞士),显微数字图像分析系统,ZEISS公司(德国),倒置显微镜IX70,OTYMUPS公司(日本),OTYMPUSBX50光学显微镜,OTYMUPS公司(日本),IBAS2.5全自动图像分析系统,IBM公司(日本)。1.1.3主试剂1.2标本与观察方法1.2.1动物模型的制备和分组:32只15月龄清洁级SD大鼠随机分为正常对照(N组),肾切对照(C组),糖尿病组(D组),新伐他仃组(S组)。1.2.2标本收集和处理。1.2.3血尿生化指标及肥大指数的测定。1.2.4电镜观察。1.2.5光镜检查:石蜡切片的制备(通大附院脏病理室),PASM染色(通大附院病理教研室)。1.2.6免疫组化。1.2.7统计方法:运用stata8.0统计软件分析,所有数据均采用x±s表示,多组间两两比较采用q检验,差异显著性:P<0.05。2.结果2.1糖尿病大鼠一般情况正常对照组大鼠饮食饮水情况、精神状态、日常活动均正常;肾切对照组饮食饮水情况、精神状态、日常活动正常;糖尿病组大鼠在注射STZ后2天即出现多尿,多饮,多食症状,随病程的延长,上述症状更加显著,毛发色泽暗淡,精神萎靡,活动减少;治疗组一般情况与同期糖尿病组相比明显的改善。2.2各组均有大小岭血、甘油三油tg、胆固醇tc、尿素氮、肌肉注射体重和24小时尿蛋白2.2.1mlo/lD组、S组大鼠血糖在实验期均维持在较高水平>16.67mmlo/L,两组间无明显差异(P>0.05);N组、C组大鼠血糖在试验期均维持在正常水平,两组间无明显差异(P>0.05),D组与N组、C组相比有明显差异(P<0.05)。2.2.2血液中的血液2.2.3各组、d组、p组、c组蛋白比较S组同单肾切除糖尿病模型组相比减少(P<0.01),N组、C组相比比较明显差异(P>0.05),D组与N组、C组相比明显差异(P<0.05)。2.2.4氮肥指数肾重量D组较同期N组均显著升高,(P<0.05),S组同D组相比明显减少(P<0.01),N组、C组相比无明显差异(P>0.05)。2.2.524小时尿蛋白测量D组较同期N组均显著升高(P<0.05),S组同D组相比明显减少(P<0.01),N组、C组相比无明显差异(P>0.05)。2.3各组均大便组织病理学2.3.1各组细胞数、系膜形态变化肾组织基底膜呈黑色,肾小球基质系膜呈棕黑色,D组肾小球内细胞数减少肾小球囊壁增厚,系膜增生,基底膜断裂,系膜宽度超过毛细血管径,呈弥漫分布,小管结构紊乱,S组较D组病变减轻,C组与N组病理改变无明显差异,(图3-2)。2.3.3基底膜的变化D组可见系膜区系膜基质增生,上皮细胞足突融合,使原来附在基底的排列有序的足状突起贴附基底膜上,毛细血管基底膜增厚,基底样物质均匀增多,基底膜细微结构消失;S组较D组病变减轻,基质增生减轻,上皮细胞足突融合减轻(P<0.01);C组与N组病理改变无明显差异(P﹥0.01)(图3-3)。2.3.4胞胞浆内表达波形蛋白只在正常大鼠血管壁、、肾小球、间质少量表达,近曲小管上皮细胞胞浆内无表达;D组肾小球少量表达,近曲小管上皮细胞胞浆内大量阳性表达,间质表达增加(P<0.05);C组肾小球、间质、小管上皮细胞胞浆内少量阳性表达,与N组相比,差异无统计学意义(P﹥0.01)。3.对肾间质及肝肾上皮细胞的作用CorsiniA等研究发现,辛伐他仃对单侧肾切除STX诱导的糖尿病大鼠,可减少尿蛋白量,抑制细胞外基质形成。本实验12周大鼠肾脏组织病理学检查显示D组较C组、N组大鼠出现明显的肾脏肥大、肾小球体积增加、基底膜增厚。免疫组化发现,N组、C组肾脏vimentin在肾小球,小管、间质病变在糖尿病肾病中的作用也越来越引起重视。D组免疫组化显示小管波行蛋白表达增加,而N组和C组肾小管波行蛋白质表达不明显,推测肾小管上皮受损后可能发生表型转化,表达间充质来源的波行蛋白质,而波形蛋白质(vimentin)是一种中间纤维蛋白,由单一多肽链构成。肾小管上皮细胞在损伤因素的作用下可能转化为肌纤维母细胞而参与间质纤维化,肌成纤维细胞除了表达特征性的α-SMA外,可表达多种中间丝蛋白,如波形蛋白、结蛋白、膜突蛋白和根蛋白以及肌凝蛋白重链。MyoFb来源于成纤维细胞的分化,血管外周围细胞的迁移、局部增殖、小管上皮细胞的转化以及系膜细胞的增殖、转化。TGF-β具有促进成纤维细胞及肾小管上皮细胞发生表型转化、促进细胞外基质分泌增加、促进肾小管上皮细胞凋亡等多方面纤维化相关作用,还能促进骨桥蛋白、弹性蛋白等多种物质共同作用促进梗阻性肾病的进展。在肾小球疾病慢性进展过程中,肾间质内表达a-SMA的肌成纤维细胞是肾间质纤维化过程中细胞外基质沉积的最主要的来源。他汀类药物通过抑制系膜细胞增生,减少TGF-β和胞外基质蛋白分泌、延缓DN进展的作用。本研究通过糖尿病大鼠模型证明,辛伐他汀可能有独立于调脂作用之外抑制TGF-β,可能间