小柴胡汤中黄芩苷在大鼠体内药代动力学研究

小柴胡汤中黄芩苷在大鼠体内药代动力学研究

我院长期以来，小柴胡汤已被用于治疗儿童病毒性心肌炎，并取得了满意的效果。小柴胡汤中黄芩为臣药,在体外有明显的抑病毒作用。黄芩苷单一成分的体内代谢?动?力?学?研究已有报道,而关于小柴胡汤中黄芩苷的体内代谢动力学研究尚未见报道,本研究对大鼠灌胃给药小柴胡汤煎剂后尿、心、肝、肾中黄芩苷进行监测,现将研究结果报道如下。1材料和方法1.1超声清洗器日本岛津LC-6A高效液相色谱仪,紫外检测器,C-R3A色谱数据处理机,SIL-6A自动进样器;KQ-250E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);TGL-16B台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂);DY89-1型电动玻璃匀浆机(宁波新芝科器研究所)。1.2小柴胡汤的制备黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯);其余试剂为分析纯。小柴胡汤煎剂:柴胡、黄芩、人参、半夏、大枣、生姜、甘草(剂量为经典方剂量)头煎加水2000mL,煎1h,取汁;二煎加水1000mL,煎1h,取汁,两煎相混,过滤,浓缩至浓度为1000g/L。1.3ds柱及流动相色谱柱:shim-packCLC-ODS柱;检测波长:278nm;流动相:甲醇-0.025mol/L磷酸(45∶55);流速:1.0mL/min。1.4动物120～130g健康SD大白鼠,雌雄兼用,沈阳医学院实验动物中心提供(动物合格号:辽实动字第001号)。1.5方法学的形成1.5.1组织病理学检测精密称取黄芩苷对照品约6mg,置100mL量瓶中,加入甲醇溶解后稀释至刻度,即得6mg/L的标准溶液。取空白尿及加药的尿0.5mL;取空白心、肝、肾及加药的心、肝、肾样品(脏器经匀浆处理)的匀浆液0.5mL(匀浆液均为每mL含1g的组织量),将以上样品均加乙腈1.5mL,超声振荡30min,分别离心(2000×g)10min,取上清,备用。取标准液、空白对照液和模拟试样液,分别进样5μL,按上述HPLC条件测绘色谱图。由图1可见,空白对照液不干扰黄芩苷的分离测定。1.5.2标准样品标准精取一定量黄芩苷标准液于2mL容量瓶中,分别加尿液配成0mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L的标准样品,超声振荡,离心(2000×g)10min,分别测定黄芩苷色谱的峰面积,并以峰面积对进样量进行直线回归。回归得直线方程为:Y=0.0486X-0.0015(r=0.9992)。1.5.3计算样品的回收率配制含黄芩苷20mg/L、40mg/L、100mg/L的尿样品,样品处理同上,份样品测定5次,计算样品的回收率,结果见表1。将以上样品同1d内反复测定5次,每天测定1次,连测5d,计算精密度,结果见表2。1.5.4分组及实验组的分组取21只大鼠,分2组。即空白对照组和实验组。空白对照组4只,其中取尿2只,取脏器2只;实验组17只,其中取尿5只,取脏器12只。1.5.5给药给药前禁食、不禁水12h。空白对照组予以生理盐水,实验组予以小柴胡汤水煎液,分别以每100g体重灌胃3mL。1.5.6尿药浓度的测定30min、1h、2h、3h、4.5h、6h、8h、10h、12h、16h、20h、24h,测定尿量,并取尿量0.5mL,置2mL离心管,加乙腈至2mL后摇匀,超声提取10min,超速离心(2000×g)10min,取上清液滤过备用,测定尿药浓度并计算尿药量。1.5.7动物组织匀浆0.25h、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h杀2只鼠,取心、肝、肾,称重,剪碎,加乙腈(1mL/g),组织匀浆后(匀浆液为每毫升含1g组织量),取量及处理方法同上。2结果2.1采用高效液相层析成像法测定尿中黄酮含量结果见表3。尿液中黄芩苷的时间-浓度曲线见图2。2.2模拟模型的建立采用3P87药代动力学程序对尿药量随时间变化进行拟合,根据AIC最小,R值最大原则,选择二室模型为其模拟模型所得参数见表4。2.3h所采心脏中麻黄苷的含量结果表明,在0.25h,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h所采心脏中黄芩苷的含量分别为0.316mg/mL,0.723mg/mL,0.436mg/mL,0.372mg/mL,0.125mg/mL,0.083mg/mL,心?脏?中?黄?芩?苷?时?间-浓?度?曲?线?见?图3。2.4不同肝脏中自组织中麻黄苷的时间-浓度关系结果表明,0.25h,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h所采肝脏中黄芩苷的含量分别为2.265mg/mL,4.215mg/mL,1.734mg/mL,0.486mg/mL,1.125mg/mL,0.056mg/mL,肝脏中黄芩苷时间-浓度曲线见图4。2.5脏器中麻黄苷的浓度结果表明,0.25h,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h所采肾脏中黄芩苷的含量分别为0.472mg/mL,0.674mg/mL,0.332mg/mL,0.275mg/mL,0.161mg/mL,0.105mg/mL,肾脏中黄芩苷时间-浓度曲线见图5。3药代动力学参数黄芩在小柴胡汤中为臣药,具有清解少阳之郁热的作用。黄芩苷是黄芩的主要成分,它不仅具有保肝作用,而且还有抗菌、解热、降压、利胆和免疫抑制等功效。我们在预试验中曾经采用大鼠取血,观测血浆中黄芩苷的药物浓度变化,但因血中浓度维持时间短,给后期的数据处理及参数计算带来困难。因此,我们采用监测不同时间尿药含量观察体内的黄芩苷代谢情况,结果十分理想。从小柴胡汤中黄芩苷在大鼠体内的药代动力学参数可以看出,黄芩苷在体内吸收较快,ka为1.187;与文献报道的略有不同,可能是因为其它文献的受试对象是家兔,种属差异导致对黄芩苷的吸收不同;黄芩苷分布较快,t1/2α为0.701h,而消除相较慢,t1/2β为5.65h,这些结果?与?文?献?报?道的代谢规律基本相符。说明黄芩苷在体内的代谢基本上不受小柴胡汤中其它成分的影响。黄芩苷在大鼠尿、心、肝、肾中的代谢过程各不相同。心、肾脏器中黄芩苷的代谢,首先于30min出现高峰,峰值较高,随后缓慢下降;同时还发现心肌中黄芩苷的含量较高,黄芩苷在心肌中的出现,为临床应用小柴胡汤治疗病毒性心肌炎提供了良好的药物归经依据。黄芩苷在肝脏中的药-时曲线不同于心、肾,肝脏药-时曲线中有次峰,提示可能有肝肠循环。肝脏中黄芩苷含量大大高于