考试题型打包天然药物化学生物碱

第四节 生物碱的提取分离除挥发性生物碱用生药粉末碱化，水蒸气蒸馏外，一般都可借助于酸、碱和有机溶剂来提取。一、总生物碱的提取总生物碱的提取方法主要有：溶剂法、离子交换树脂法和沉淀法等方法。水或酸水溶剂提取法（一）溶剂法高极性有机溶剂提取法低极性有机溶剂提取法用酸水提取----以生物碱盐的形成提出H2SO4

、HCl、醋酸、酒石酸、柠檬酸(1-5%)渗漉法酸水用碱(Na2CO3，氨水，石灰水)碱化游离出生物碱，离心过滤转移至低极性有机溶剂中，蒸去溶剂，亲水性生物碱可用离子交换树脂进行分离。优点：安全，经济，适合于工业生产缺点：水溶性杂质较多(糖，蛋白，皂苷，鞣质，无机盐，水溶性色素)2.

用高极性有机溶剂提取----以生物碱和生物碱盐的形式提出无论游离，成盐，均易溶于甲醇，乙醇，丙酮；可不加酸或少量酸。优点：可避免亲水性的多糖、蛋白质、无机盐溶入缺点：使树脂、叶绿素等脂溶性成分增加初步纯化提取液浸膏大量酸水搅拌均匀水不溶杂质(沉淀)水层浓缩1~2%放置碱化水层水层(亲水性生物碱、水溶性杂质)CHCl3CHCl3层(亲脂性生物碱)3.

用低极性有机溶剂提取----以游离生物碱的形式抽提出通常先用浓氨水,石灰水,Na2CO3，NaOH水润湿并

研磨生药或用石灰，氧化镁等固体碱与生药拌匀，再用低极性有机溶剂渗漉或加热抽提(汽油，石油

醚，苯，乙醚，氯仿，二氯乙烯等)碱的使用视生物碱碱度而定，但如存在酸性生物碱则不能使用NaOH，KOH等强碱优点：提出液色浅，杂质少，纯化容易对于含有脂溶性杂质，可先用汽油，石油醚，CCl4提一次或用下列方法进行初步纯化：低极性溶剂提取物酸水水层:生物碱有机层:杂质（二）离子交换树脂法酸水液与阳离子交换树脂进行交换，以与非

生物碱成分分离。交换后树脂，用碱液碱化，再用有机溶剂进行洗脱，回收有机溶剂得总

生物碱。（三）沉淀法——用于水溶性生物碱及季胺碱基本原理：利用生物碱在酸性条件下，与一些沉淀试剂形成难溶性复盐而从水溶液中分离。常用的沉淀试剂：雷氏氨盐、三硝基间苯二酚、苦味酸、碘化物等。以雷氏氨盐为例，一般操作及原理：1）季胺碱水溶液原理：B++NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]B[

Cr(NH3)2(SCN)4]调至弱酸性加入雷氏铵盐饱和水溶液至不再产生沉淀过滤沉淀溶于丙酮，过滤（雷氏生物碱复盐）滤液滤液加入硫酸银饱和水溶液过滤滤液沉淀（雷氏铵盐沉淀）原理：2

B[

Cr(NH3)2(SCN)4]+Ag2SO4

B2SO4+

2Ag[Cr

(NH3)2(SCN)4]2)滤液加入氯化钡溶液过滤滤液（季胺生物碱盐酸盐）沉淀（硫酸钡沉淀）BaSO4

+2B

·Cl3)原理：B2SO4

+BaCl2二、生物碱的分离分离程序一般有系统分离与特定生物碱的分离；生物碱的结构差异大，对酸，碱等的溶解性有所差异。按溶解度及碱性可把生物碱进行简单的分类。系统提取分离生物碱的程序：单体生总碱 类别或部位物碱类别:按碱性强弱或酚性、非酚性组分的生物碱类别。部位：主要指最初层析中洗脱的极性不同的生物碱。生物碱的简单分类(按碱度和溶解度)弱碱性或近中性生物碱。

(包括弱碱性叔胺生物碱、酰胺碱、部分N-氧化物)酚性弱碱性生物碱(1a)非酚性弱碱性生物碱(1b)一般叔胺碱酚性叔胺碱(2a)非酚性叔胺碱(2b)(3).水溶性生物碱（季胺碱，酸碱两性生物碱，部分N-氧化物）3a

3b

3c类别生物碱的一般分离流程总生物碱的酸性水溶液氯仿萃取氯仿层水层氯仿层1-2%NaOH萃取氯仿层水层1b弱酸调节~

pH

7氯仿萃取氯仿层1a水层水层氯仿层1-2%NaOH萃取水层2b水层氯仿萃取氯仿层2aNH4OH碱化至pH9-10氯仿萃取氯仿层水层氯仿层NH4OH碱化至pH

9-10氯仿萃取水层加NH4Cl或通CO2至pH

9~103c强碱性生物碱水层酸化生物碱沉淀剂沉淀母液分解3a,

3b其它水溶性杂质特定生物碱的分离通过上述分离，在成分比较简单的情况下，通过重结晶即能得到单体的结晶，但在成分复杂的情况下，仍有可能是混合物，必须继续分离。常用以下几种方法：1.

利用生物碱的碱度差异同一类生物碱结构相似，但碱度仍有差异。利用不同碱度的生物碱与酸结合成盐的稳定性差异而达到分离的目的。将生物碱溶于酸水中，用碱调节pH值，每调一次，用CHCl3等有机溶剂抽提，检测后分离（弱碱先提出）。将生物碱溶于CHCl3或乙醚中，用不同pH值（由高到低）的酸性缓冲液提抽（强碱先提出）。千金藤中非酚性生物碱的分离NO

CH2OCH2CH2

ONCH3CH3OCH3O

CH3OCH3岛藤碱insularineNOCH3OCH3NCH3OCH3OCH3OONOOCH3OCH3千金藤碱stephanineCH3OOCH3N

CH3CH3O

OCH3原千金藤碱protostephanineCH3OCH3OO

OCH3OCH3N

CH3表千金藤碱epistephanine莲花宁碱hasubanonine非酚性叔胺生物碱3克溶于100毫升氯仿pH5.8缓冲液

100mlX8次萃取pH4.4100

ml

X

6萃取pH

3.6100

ml

X12萃取pH

2.8100

ml

X6萃取pH

2.0100

ml

X

4萃取缓冲液 缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液氯仿10%NaOH碱化乙醚萃取脱水浓缩同左处理同左处理同左处理同左处理浓缩岛藤碱表千金藤碱0.36克未得结晶原千金藤碱母液中得

千金藤碱莲花宁碱0.25克莲花宁碱0.04克千金藤中酚性生物碱的分离NOCH3NCH3OOCH3OCH3HOO次表千金藤碱hypoepistephanineHOCH3ON

CH3O

OCH3OCH3高千金藤醇碱homostephanolinepH5.2缓冲液

80

ml

X

20次萃取pH5.080ml

X

10萃取pH

4.680

ml

X

6萃取pH

2.880

ml

X

4萃取缓冲液

缓冲液缓冲液缓冲液氯仿10%氨水碱化乙醚萃取脱水浓缩同左处理同左处理同左处理次表千金藤碱0.13克次表千金藤碱未得生物碱0.3克高千金藤醇碱0.2克酚性叔胺生物碱1.8克溶于80毫升氯仿2.

利用生物碱及其盐的溶解度差异利用某些生物碱（盐）不溶或难溶于一般生物碱（盐）易溶的某种溶剂，或易溶于一般生物碱（盐）难溶于的某种溶剂的属性进行分离。例如：在分离麻黄中的麻黄碱和伪麻黄碱时，常利用l-麻黄碱的草酸盐难溶于水而与伪麻黄碱分离。金鸡纳树皮粉末以Ca(OH)2润湿，苯提取苯提液稀硫酸酸水液用NaOH调至pH6.5,温热，放置析晶硫酸奎宁晶体母液碱化、过滤滤液沉淀乙醚不溶物（金鸡宁）乙醚液稀HCl酸水液

乙醚液酒石酸钾纳酒石酸金鸡宁丁母液KI氢碘酸奎宁丁母液麻黄水煎液NaOH调节至pH

11.5-12流经甲苯萃取塔甲苯液碱水液流经1.2%草酸液吸收塔甲苯液草酸吸收液（pH

6.5-7）加HCl调节至pH6.5-7浓缩，放冷，过滤l-麻黄碱盐酸盐结晶粗晶(l-麻黄碱草酸盐)母液溶于水,加CaCl2过滤d-伪麻黄碱（可转化为l-麻黄碱）草酸钙沉淀溶液浓缩，放冷,过滤加水稀释

NaOH调节至pH11.5-12过滤NNCH3OCH3ORCH3OOOOCH3CH3汉防己碱(汉防己甲素)tetrandrine防己诺林碱(汉防己乙素)fungchinolineR=HR=CH33.

利用生物碱的极性度差异色谱法：如硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺柱以极性递增的溶剂相继从碱性水溶液中分离 不同的生物碱。己烷＜石油醚＜乙醚＜苯＜氯仿<乙酸乙酯＜甲醇生物碱分子极性强弱规律相似结构分子中: 双键增加

fi极性增强含O官能团增加

fi

极性增强酰胺>羧酸>醇>醛>酮>醚伯醇>仲醇>叔醇e-键(OH)>a-键4.

水溶性生物碱的分离先用雷氏铵盐沉淀，再用Ag2SO4或BaCl2分解，或用阴离子交换树脂或用生物碱盐的溶解度差异分离。三点金草根水溶季氨碱（碱性水溶液）调节pH至9.0加雷氏铵盐60°饱和溶液至沉淀完全溶液沉淀I乙醇溶解调节pH至