通心络、卡维地洛、沙坦对兔急性心肌梗死晚期再灌注微血管内皮功能及完整性的影响

通心络、卡维地洛、沙坦对兔急性心肌梗死晚期再灌注微血管内皮功能及完整性的影响

心肌微血管内皮细胞功能障碍，甚至微血管完整性破坏，是急性心力衰竭（pmi）血管间骨折后的心肌无再灌注（无再血流）和心肌缺血后再灌注损伤的重要机制之一。根据中药通心络胶囊有保护内皮细胞功能的作用,我们设想它可能对AMI冠脉再通后心肌微血管内皮功能乃至其完整性有保护作用,从而确保心肌的有效再灌注。本研究拟与卡维地洛和缬沙坦相对比,探讨评价通心络的这一作用。材料和方法1分组、治疗方法和药物选用健康大耳白兔48只,雌雄各半,体重2.5-3.0kg,随机分成以下6组:(1)假手术组;(2)缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)对照组;(3)通心络治疗组(以岭药业,1.0g·kg-1·d-1);(4)卡维地洛治疗组(北京巨能药业,5mg·kg-1·d-1);(5)缬沙坦治疗组(北京诺华制药,10mg·kg-1·d-1);(6)抵克力得(杭州赛诺菲民生制药,30mg·kg-1·d-1)+阿斯匹林(无锡阿斯特拉制药,20mg·kg-1·d-1)治疗组,每组8只。各组均在3d药物预处理(直接灌胃)后再行左冠脉结扎。2边位充血模型建立参照Miura等的实验方法,先肌肉注射氯胺酮(100mg/kg)麻醉兔,于右颈总动脉和右颈外静脉置管,气管插管后呼吸机辅助呼吸并心电监护。经胸骨左缘第4肋间开胸,于冠状动脉左前降支(LAD)近第1分支处穿引3号丝线结扎2h,再放松2h建立AMI晚期再灌注模型。假手术组仅在左冠脉下穿线不结扎。模型成功标准为结扎时供血区心肌颜色由鲜红转为暗紫,心电图示ST段弓背向上抬高大于0.5mV,局部心肌变成紫红色并有节段性运动不良;结扎松开后ST段抬高幅度较前下降1/2以上,局部心肌变红。3血清内皮素、no2-/no3-含量分别于AMI前、AMI后2h和再灌注后2h采右房血,以放免法测定血浆内皮素(ET)含量,以硝酸还原酶法测定血清NO2-/NO3-含量。采用改良的Hladovec法测定再灌注后2h循环内皮细胞(CEC)计数,每个样品计数4次,取其均值,结果以内皮细胞数/mm3表示。4截段心肌结构垂直于左室长轴,自心尖至冠脉结扎点连续切取厚度约3-4mm的左室环形截段,均以四氮唑红染色。各截段的截面上,存活心肌被染成深红色,梗死心肌呈灰白色。以图像分析仪测定各截段截面上心室壁面积(leftventriculararea,LV)及梗死心肌面积(infarctarea,I),并计算I/LV(%)。每个心脏标本取所有截段平均的I/LV(%)为梗死面积。5左室截面,he染色将上述左室截段以10%福尔马林固定,石蜡包埋后再切取4μm厚的左室截面,HE染色后制成病理切片。每个心脏标本随机取4张切片,每张切片在400倍显微镜下于梗死区随机取8个视野,共32个视野,计算有心肌出血灶视野的百分数。6学软件的处理本研究所有资料均用SPSS10.0统计学软件进行处理。同组间比较用t检验,多组间比较用方差分析及q检验,计数资料用方差分析,数据用均数±标准差(x¯±s)表示。血no2-/no3-、et的相关性分析1通心络、卡维地洛和缬沙坦对AMI晚期再灌注时血NO2-/NO3-和ET含量的影响(表1)AMI前,通心络组的NO2-/NO3-显著高于其它各组(P<0.01),而ET均无显著差异。AMI后2h和再灌注后2h,各组的NO2-/NO3-比缺血前均显著降低(P<0.05,P<0.01),ET则均显著升高(P<0.05,P<0.01);然而各组间相比,NO2-/NO3-在通心络组仍显著高于I-R组(P<0.05,P<0.01),并均显著高于其它治疗组(P<0.05,P<0.01);而ET在通心络和缬沙坦组均显著低于I-R组(P<0.05,P<0.01),但比其它治疗组则均无显著差异。2通心络、卡维地洛和缬沙坦对AMI晚期再灌注后血CEC计数、心肌灶性出血和梗死(MI)面积的影响(表2)再灌注后2h,I-R组的CEC计数显著高于假手术组(P<0.01);各治疗组中,仅通心络组的CEC计数显著低于I-R组(P<0.05),且与假手术组无显著差异,而抵克力得组的CEC计数则显著高于I-R组(P<0.05)。各治疗组的梗死面积均显著低于I-R组(均P<0.01)。而通心络和缬沙坦组的心肌灶性出血发生率也显著低于I-R组(P<0.05,P<0.01)。3血NO2-/NO3-、ET与心肌梗死面积的相关性直线相关分析显示再灌注2h时血NO2-/NO3-与ET含量呈负相关(r=-0.884,P<0.01);血中NO2-/NO3-含量与心肌梗死面积呈负相关(r=-0.896,P<0.01);而ET含量与心肌梗死面积呈正相关(r=0.946,P<0.01)。△△P<0.01vsshamgroup;*P<0.05,**P<0.01vsI-Rgroup;▲P<0.05,▲▲P<0.01vstongxinluogroup;#P<0.05,##P<0.01vsbeforeAMI.ami回复突变对心肌微血no和血浆et的影响AMI冠脉再通治疗(溶栓和球囊扩张支架植入术)后并发无再流现象,不能实现心肌真正的再灌注而影响AMI预后,已成为AMI再灌注治疗时代的一大难题,目前对此并无良策,其机制与心肌微血管痉挛、栓塞和结构破坏导致微血管堵塞有关。根据中药通心络有保护内皮功能作用,我们设想其对AMI时微血管的内皮功能和完整性可能有保护作用,并对此进行了研究,取得了预期结果。一氧化氮(NO)及ET是由血管内皮细胞分泌的两个主要血管活性物质,在维持血管舒缩平衡,抗血小板聚集,防止血管内凝血系统激活、血栓形成等方面起重要作用;两者平衡对血管壁具有重要的保护作用。研究表明,缺血再灌注后内皮功能受损而导致NO释放减少、ET大量释放是产生心肌再灌注损伤的重要因素,内皮素拮抗剂可防治心肌缺血再灌注时微血管血流的减少。本结果显示,I-R组AMI和晚期再灌注后血清NO均显著降低,而血浆ET则显著增高,提示心肌微血管内皮细胞功能严重受损。重要的是,本结果同时显示通心络能显著提高兔AMI前、后和再灌注后的血清NO水平,并和缬沙坦一样能显著降低血浆ET水平,提示通心络对AMI再灌注时的内皮细胞功能有明显的保护作用。通心络升高冠心病患者的血NO和降低血ET的作用已有报道,然而,在AMI和晚期再灌注后能有此作用,迄今尚未见到文献有类似报道,具有重要的临床意义。CEC即损伤脱落于血液循环中的血管内皮细胞。其数量变化可以反映病理状况下内皮细胞的损伤程度,也是活体组织内唯一直接反映血管内皮损伤的特异性指标。本研究显示I-R组循环血CEC计数明显高于假手术组,提示AMI晚期再灌注后,由于心肌微血管完整性的损伤和破坏,有大量的内皮细胞脱落入循环血;特别重要的是,本结果还显示通心络组CEC较I-R组明显降低,且与假手术组无显著差异,又比其它治疗组显著为低;提示通心络有防止AMI和再灌注后心肌微血管内皮细胞受损脱落而保护其完整性的突出作用。而抵克力得+阿司匹林组CEC计数明显高于对照组,可能是由于抵克力得和阿司匹林均可抑制血小板聚集与粘附,使AMI再灌注后因微血管完整性破坏而损伤内皮细胞迅速冲刷入血的结果。本研究进一步观察到AMI再灌注后心肌灶性出血发生率高,占所观察切片的62.5%,提示心肌微血管完整性破坏后继发了出血,这一点与血NO降低、ET增高及CEC的增加相吻合;而通心络和缬沙坦的心肌灶性出血发生率明显降低,特别是通心络组的出血率很低(12.5%),且与假手术组相当,提示在保护内皮功能的基础上,对心肌再灌注后心肌微血管完整性也有保护作用,具有重大的临床意义。目前尚未见到类似研究的报道。本研究还显示,通心络、卡维地洛、缬沙坦和抵克力得等治疗使梗死面积较对照组分别减小了42.7%、45.1%、39.9%和28.8%,特别是通心络也可减小心肌梗死面积,和文献结果相同,机制不清,可能与该药对AMI再灌注后微血管内皮功能完整性有明显保护作用,减少了心肌坏死有关。另外,经相关分析表明梗死面积与ET