临床实验定性半定量项目的质量控制及性能验证课件

定性半定量项目的质量控制及性能验证定性半定量项目的质量控制及性能验证1内容定性项目如何做质控？免疫学定性项目如何做性能验证？内容定性项目如何做质控？2什么是定性/半定量检测？定性检测：不能提供浓度结果的检测生长或不生长阴性或阳性正常或异常有反应或无反应颜色有没有变化半定量检测：检测结果表示为被测量物的大致估计量“微量”，“少许”，“1+”,“2+”,“3+”血清学检测中的滴度或稀释倍数什么是定性/半定量检测？定性检测：不能提供浓度结果的检测3政策法规中国卫生部《临床实验室定量测定室内质量控制指南》：每个分析批长度内至少检测一次质控品。所选质控品的浓度应反映临床有意义的浓度范围的变异。CLSI

C24-A3：在每个用户定义的分析批长度内至少检测一次质控品，质控品的浓度必须覆盖医学决定水平。《医学实验室质量和能力认可准则：在临床免疫学定性检验领域的应用说明》CNAS-CL02-A004：每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控物进行质控。实验室应定义自己的质控批长度。美国CAP、CLIA：定量项目必须每天至少检测2个不同水品的质控品，定性项目必须每天至少检测1个阳性和1个阴性质控品。澳洲NATA：质控品必须覆盖整个分析浓度，对于适用的测试，必须检测低/正常/高、正常/异常、阳性/阴性、反应/无反应质控品。政策法规中国卫生部《临床实验室定量测定室内质量控制指南》：每4定性/半定量检测项目的分类直接报告阴阳性的报告“n+”或报告稀释度的仪器判读连续检测信号，报告S/CO比值以定量方式报定性结果的定性/半定量检测项目的分类直接报告阴阳性的5直接报告阴阳性的纯定性免疫检验以肉眼直接判断，无法（需）辨别检测信号的大小（强弱），直接报告阴阳性的。如：妊娠试验、ENA抗体、金标法项目、免疫印迹法项目。质控如何做？只要每批次选择“阴性”和“阳性”两个质控品，与样本一起检测，以符合度来辨别是否在控最好选择弱阳性质控，记录质控结果建议每盒各随机抽出1条试纸进行质控检测回顾性统计符合率直接报告阴阳性的纯定性免疫检验以肉眼直接判断，无法（需）辨别6免疫层析法上的质控线能作为常规质控吗？质控线胶体金免疫层析检测，所用试纸条设有“质控线”或“质控点”，如显色，则反映了检测过程的无失误，也反映了被测物中没有抑制物，但不能完全说明试纸条灵敏度有无变化，即不能用“质控线”或“质控点”的结果来完全代替对试纸条质量的评价。免疫层析法上的质控线能作为常规质控吗？胶体金免疫层析检测，所7半定量（分级、稀释度）的免疫检验以肉眼或者仪器判读，判别颜色强弱，并按分级和稀释度报告“n+”或报告稀释度的。如：尿干化学、大便隐血（化学法）、血清凝集（滴度实验）等。质控如何做？可以选择“++”的质控品，上下一个“+”的差别（1+~3+）为在控同样选择阳性第二个稀释度的质控品，上下相差一个稀释度为在控回顾性统计各结果比率半定量（分级、稀释度）的免疫检验以肉眼或者仪器判读，判别颜色8回顾性统计各结果比率25%50%90%25%5% 5%++++++回顾性统计个结果比率A老师 B老师回顾性统计各结果比率25%50%90%25%++++++回顾9仪器判读连续检测信号，报告S/CO比值质控如何做？用阴性（S/CO值在临界值0.5倍左右），阳性或（和）弱阳性（S/CO值在临界值2.0~4.0倍之间）的质控品检测用“符合度”判断质控情况以S/CO值建立均值和SD，画质控图，观察质控变化趋势和定期计算CV%，夹心法使用弱阳性和阳性统计；竞争法用阴性和弱阳性统计。避开极低的S/CO，规则由实验室自行设置用仪器判读连续检测信号，可以报出S/CO值，使用Cut-off来判断阴阳性的。如：肝炎等传染病，用ELISA或其他方法检测的定性项目等。仪器判读连续检测信号，报告S/CO比值质控如何做？用仪器判读10质控品浓度的选择11109876543210Signal/CutoffKitPositiveControlExternalControlCutoff试剂盒自带阳性质控第三方外部质控质控品浓度的选择11Signal/CutoffKitPos11三种报告方式--举例：HBeAg报告只报“反应性（阳性）”、“非反应性（阴性）”，无S/CO数值只报S/CO数值+参考范围报告S/CO数值+“反应性（阳性）”&“非反应性（阴性）”123三种报告方式--举例：HBeAg报告只报“反应性（阳性）”、12以COI或S/CO比值表示结果的定性免疫测定的精密度以COI或S/CO比值表示结果的定性免疫测定的精密度13应用统计学规则时的注意事项举例：乙肝核心抗体Anti-HBc

IgM假设某项目阳性质控的均值为S/CO=1.5，标准差SD=0.3，实验室设置质控规则为1-3s，2-2s，那么当该质控结果为0.97时，当天结果在控吗？注：

该项目Cutoff值为S/CO=1.0应用统计学规则时的注意事项举例：乙肝核心抗体Anti-HBc14试剂盒内质控品vs外部质控品试剂盒内质控品与试剂同时提供用于确认检测是否有效具有试剂批特异性（Kit

lot

specific）外部质控品购买的商品化质控品或自制质控品独立于检测试剂/仪器，与患者样本同样检测无试剂批特异性用于监控检测系统趋势/波动以及改进常规检测的质量和能力试剂盒内质控品vs外部质控品试剂盒内质控品外部质控品15试剂盒内质控品vs外部质控品检测有效（Valid）

Vs

无效（Invalid）根据厂家说明书规定的判断标准，认定检测有效

/

无效使用内部质控品/阴性或阳性对照品/校准品重在确认检测系统的各个组分是否正常工作过程在控，接受结果（accepted）Vs

过程失控，拒绝结果（Rejected）根据实验室室内质控SOP规定的判断标准，认定在控或失控使用外部质控品重在监控实验室结果的一致性试剂盒内质控品vs外部质控品检测有效（Valid）Vs16定性项目质控应注意的几个问题许多检测项目没有阴性、弱阳性质控品，需自己制备，但要注意稳定周期。若质控数据不呈正态分布，不要勉强地去绘制质控图。虽然质控图是室内质控重要的手段和方法，但不是唯一的质控手段和方法。ELISA方法的检测结果可以用S/CO比值来计算SD和CV，不建议用OD值来计算，有些项目检测值（如OD值、发光值等）读数很低的竞争法项目，在统计学上是不符合计算SD和CV的。除了试剂盒内的阴、阳性对照外，还应选择外部质控品。最好有超高值的质控来确认每批试剂钩状效应是否符合要求不论用何种方法进行质控，必须详尽记录质控结果及对“失控”采取的措施。同一项目有几台仪器和几种方法检测，应分别做质控，并每年进行两次比对。定性项目质控应注意的几个问题许多检测项目没有阴性、弱阳性质控17组成结构项目分类定量项目系统分类AAA或ABB性能验证本底携带污染精密度批内日间准确度正确度线性范围可比性模式间系统间生化免疫批内室内线性范围可报告范围参考区间ABC系统性能确认检出限符合率精密度*其他血液学WS/T

406-2012精密度EP15-A2/A3WS/T

492-2016正确度EP6-A、EP34WS/T

408-2012WS/T

420-2013EP28WS/T

402-2012WS/T

404免疫定性项目EP12-AWS/T

505-2017CNAS

GL038CNAS

GL037组成结构项目分类定量项目系统分类AAA或ABB本底携带污染批18定性项目方法学验证UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

GuidelineEP12-

A定性检测系统的性能评价方案定性测定性能评价指南WS/T

505-2017定性项目性能评价指南临床免疫学定性检验程序性能验证指南CNAS-GL038免疫学定性检验程序性能验证指南定性项目方法学验证UserProtocolforEva19性能验证的时机和参数引入新的检测方法变更现有检测程序严重影响检验程序分析性能的情况发生后仪器主要部件故障实验室搬迁环境改变仪器更新试剂升级校准品溯源性改变更改实验流程参数符合率精密度检出限临界值抗干扰能力血清与血浆结果一致性性能验证的时机和参数引入新的检测方法变更现有检测程序严重影响20定性项目的性能评价要求CNASCL02

A004检出限符合率血清盘（按照说明书操作）方法学比较诊断符合率（诊断准确度）（诊断明确的病人样本）方法符合率（一种检测方法vs另一种检测方法）精密度*（以定量方式报定性结果）定性项目的性能评价要求CNASCL02A004检出限21检出限验证（CNASGL038）验证要求：所用检验程序在厂商试剂使用说明书等有检出限声明时，有标准物质时，或以定量形式表达定性结果时，应进行检出限的验证。选用定值标准物质如国际参考品、国家参考品、厂商参考品进行检出限验证。国际参考品国家参考品厂商参考品日期第1天第2天第3天第4天第5天检测稀释后的样本可接受标准：如果≥95%的样本检出阳性(如：20份样本中19份检出阳性)，检出限验证通过如：验证HBsAg检出限，稀释液使用的是阴性血清，除

了

HBsAg需为阴性外，Anti-HBs也需为阴性检出限验证（CNASGL038）验证要求：所用检验程序在厂22EB病毒试剂盒的检出限声明本试剂的分析灵敏度小于0.25AU/mLEB病毒试剂盒的检出限声明本试剂的分析灵敏度小于0.25AU23符合率验证--诊断符合率TPFPFPTP临床免疫学定性检验程序可根据诊断准确度标准是否明确来验证诊断符合率。验证要求：当诊断和被检测物的结果明确，即用金标准进行检测，且满足诊断准确度标准时，可采用评估诊断灵敏度和诊断特异性的方法来验证诊断符合率。可接受要求：如果实验室计算得出的诊断灵敏度、诊断特异性和诊断符合率不低于厂商检验方法声明，则通过验证；如果低于厂商检验方法声明，则未通过验证，应寻找原因或更换检验方法。符合率验证--诊断符合率TPFPFPTP临床免疫学定性检验程24符合率验证--方法符合率临床免疫学定性检验程序当诊断准确度标准不明确时，可采用评估方法符合率的方式来实现符合率的验证，包括用候选方法评估已知能力验证或室间质评的样本以及不同方法学或/和相同方法学在不同实验室之间的比对。验证要求：参比系统（在用检测方法）经验证性能符合设定标准，日常室内质控、室间质评/能力验证合格的在用检测方法。优先选用符合以上要求的经CNAS认可的医学实验室的检测方法。符合不代表准确可接受标准：可接受标准为所用厂商检验方法（候选方法）标准。