几种抗生素对刺参幼参急性毒性试验

几种抗生素对刺参幼参急性毒性试验

勘探生殖器是珍贵的海报纸。近年来,随着我国沿海地区的人工育苗、养殖生产规模的不断扩大,生产过程中病害问题也越来越严重。为解决育苗和养殖过程中抗生素及消毒剂的合理、安全使用量,笔者对幼参进行了急性毒性试验,旨在了解各种药物毒性影响及其安全浓度,为海参育苗生产应用提供一定的参考依据。1材料和方法1.1试验药品及水质幼参取自大连小长山玉琳育苗厂;试验用海水为沙滤水,盐度31.4;pH8.1～8.3;水温(12.6±0.2)℃。试验药品见表1。试验情况见表2。1.2试验设计按急性毒性试验的常规方法—死亡概率法配制溶液,见表3。(1)随机抽取培育池中的幼参,选择标准:体态粗壮,伸展自然,疣刺尖挺;体褐色,混有少量青色;摄食速度快;排便不粘而散健壮的幼参,测量其自然伸展体长;伸张体长;收缩体长;体重;体积。(2)将塑料桶记为1#～6#,在1#～6#装有幼参的4000ml塑料桶中配制设计好浓度的抗生素及甲醛溶液,其中1#为空白对照组。此试验是在不投饵、不充气条件下进行,同时用空白组对照以消除自然死亡等带来的误差。24h、48h后检测,记录死亡个体数。为防止甲醛的挥发性以及抗生素失效,每隔12h全量换水并加药一次。(3)幼参死亡设计标准:身体柔身,自然卷曲,管足及触手收缩回体内;疣刺收缩;无附着能力;无活动及摄食能力;对轻微刺激无反应。试验组死亡率的计算:P=(P′-C)/(1-C)式中:P′—试验组死亡百分数,C—对照组死亡百分数,P—经校正后的死亡百分数。(4)以抗生素及甲醛的浓度对数为横坐标、幼参死亡率的概率单位为纵坐标作曲线,并作回归检验,求95%置信区间,确定24hTLm(半致死浓度)(LC50,24h)和48hTLm(半致死浓度)(LC50,48h)(5)安全浓度(SC)为刺参幼参安全生活的最高浓度,其计算公式:SC=48hLC50×0.3(24hLC50/48hLC50)2。配制安全浓度测试液,检验该浓度在24h内是否对幼参有影响。1.3获得安全浓度的验证在得出抗生素以及甲醛对幼参的安全浓度后,既与空白对照组的原液进行安全浓度存活率的对比检验,时限为24h。2结果2.1甲醛对幼参的毒性幼参在甲醛溶液中均表现出身体收缩,疣刺收缩,活力下降,附着能力减弱,“化皮”、排脏现象较为严重。甲醛对海参幼参24hTLm毒性试验结果见表4,甲醛对幼参48hTLm毒性试验结果见表5。从试验结果看:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=12.52x-9.8574,解得x=1.1867,即甲醛对幼参24hLC50=15.4×10-6。24hLC50的95%置信区间=14.3×10-6～16.5×10-6(图1)。从试验结果:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=10.623x-7.035,解得x=1.1329,即甲醛对幼参48hLC50=13.6×10-6。48hLC50的95%置信区间=13.0×10-6～14.2×10-6(图2)。2.2试验结果及讨论幼参在氯霉素溶液中表现为身体大多自然伸展,部分个体身体伸张,活力下降,附着能力减弱的现象。氯霉素对幼参24hTLm毒性试验结果见表6,氯霉素对幼参48hTLm毒性试验结果见表7。试验结果得知:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=6.5241x-9.1375,解得x=2.1670,即氯霉素对幼参24hLC50=146.9×10-6。24hLC50的95%置信区间=137.7×10-6～156.7×10-6(图3)。从试验结果看:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=6.9397x-9.0827,解得x=2.0292,即氯霉素对幼参48hLC50=107.0×10-6。48hLC50的95%置信区间=100.0×10-6～114.3×10-6(图4)。2.3lm毒性试验幼参在环丙沙星测试液中表现为身体大多自然伸展,部分个体身体收缩,活力下降,附着能力减弱的现象,个体摆头现象较为严重。环丙沙星对海参幼参24hTLm毒性试验结果见表8,环丙沙星对幼参48hTLm毒性试验结果见表9。从试验结果看:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=9.6148x-16.532,解得x=2.2395,即环丙沙星对幼参24hLC50=173.6×10-6。24hLC50的95%置信区间=166.2×10-6～181.1×10-6(图5)。从试验结果看:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=10.551x-17.787,解得x=2.1597,即环丙沙星对幼参48hLC50=144.4×10-6。48hLC50的95%置信区间=138.2×10-6～151.0×10-6(图6)。2.4tlm毒性试验幼参在盐酸土霉素测试液中表现为身体大多收缩,部分个体身体自然伸展,活力下降,疣刺收缩,附着能力减弱的现象,部分个体出现水肿现象。盐酸土霉素对幼参24hTLm毒性试验结果见表10,盐酸土霉素对幼参48hTLm毒性试验结果见表11。试验结果看:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=26.229x-58.49,解得x=2.4206,即盐酸土霉素对幼参24hLC50=263.4×10-6。24hLC50的95%置信区间=258.7×10-6～267.9×10-6(图7)。从试验结果看:幼参死亡率50%时,查表得概率单位y=5.000,代入公式y=14.602x-29.878,解得x=2.3886,即盐酸土霉素对幼参48hLC50=244.7×10-648hLC50的95%置信区间=237.7×10-6～251.8×10-6(图8)。2.5盐酸土霉素对刺参幼参的安全浓度根据公式可计算出甲醛、氯霉素、环丙沙星、盐酸土霉素对刺参幼参的安全浓度分别为:3.18×10-6、17.03×10-6、29.97×10-6、63.35×10-6。2.6甲基丙烯酸酯对幼具潜在毒性药物的影响的验证结果3讨论3.1烷基化菌的作用甲醛,杀菌杀虫能力很强,其作用机制是与蛋白质相作用,与细胞质的氨基部分结合,使其烷基化而呈现杀菌作用。幼参在甲醛测试液中身体收缩,疣刺收缩,活力减小,附着能力减弱,个别个体有化皮现象,排脏现象较为严重。甲醛对幼参24hLC50、48hLC50分别为15.4×10-6、13.6×10-6,安全浓度为3.18×10-6。3.2甲醛、氯霉素和甲醛氯霉素,其作用机理是抑制肽基转移酶的作用,阻止肽链的增长,从而抑制了细菌蛋白质的合成,起到了抑菌作用。本次试验显示,氯霉素对幼参的24hLC50,48hLC50分别为146.9×10-6,107×10-6,SC为17.03×10-6。如果大量或长期使用氯霉素,会损害动物肝功能,并引起血液毒性,免疫抑制等多种不良反应和耐药性。由于甲醛、氯霉素是目前我国禁止使用的药物,故在生产中不宜使用。但氯霉素的第三代产品福来可(FLYCOL),能阻止细菌乙酰基转移酶在此位置上的乙酰化作用,从而显著降低细菌耐药性;它的结构中无P-位硝基,从而克服了氯霉素的多种不良反应,是美国FDA认可的动物专用广谱抗生素。环丙沙星是第三代喹诺酮类合成抗菌药,由于抗菌谱广,吸收安全,不易产生耐药性等优点,广泛用于水生动物的细菌性疾病的防治。环丙沙星对刺参幼参的24hLC50,48hLC50分别为173.6×