鸭病毒性肝炎的流行病学、症状与防治

鸭病毒性肝炎的流行病学、症状与防治

1945年，美国首次发现鸭子病毒性肝炎（dap-iii），并于1953年传播到世界各地。这是鸭子的急性致命感染。该病的特征是发病急,传播迅速,死亡率高,主要感染5周龄以内的小鸭,以2周龄内的雏鸭最易感,对新生鸭的发病率高达100%,死亡率90%以上。近几年来,该病在浙江省养鸭地区的发生率呈上升趋势。现将鸭肝炎病毒Ⅰ型的分离及其鸡胚适应性的试验结果介绍如下。1材料和方法1.1鸭水鱼鸭致病性阿拉克氏体的dhv-油乳剂灭活苗10日龄非免疫鸡胚(杭州市蛋鸡试验场提供),2日龄无DHV母源抗体的雏鸭,鸭病毒性肝炎-Ⅰ油乳剂灭活苗(浙江省农科院惠赠)等。1.2鸭的免疫治疗鸭病毒性肝炎-Ⅰ油乳剂灭活苗免疫100日龄麻鸭,1周后加强免疫1次,于最后一次接种2周后无菌采血,4000r/min离心15min分离血清,-20℃保存备用。1.3冻融法制备液、法取典型病鸭的肝脏、脑组织剪碎,按1∶5的比例加入无菌生理盐水(0.85%NaCl溶液,pH值6.8),在研钵中研磨后制成悬液,反复冻融3次,加入双抗(青霉素、链霉素各2000IU/mL),置4℃过夜,6000r/min离心30min,取上清液,用0.45μm的细菌滤器过滤,-20℃保存备用。1.4培养鸡胚的工艺条件将上清液接种20枚10日龄鸡胚的尿囊腔,0.2mL/个,置37℃条件下培养,弃去24h内死亡的鸡胚;以后每12h观察1次,收集24h以后死亡鸡胚的尿囊液,连续传代5次(F1、F2、F3、F4、F5),记录鸡胚每次传代的死亡时间和主要病理变化。1.5ld50的计算2日龄肉鸭30只,随机分成6组,每组5只,F1和F5代尿囊液分别作10倍递进稀释,每只肌肉注射0.1mL,记录48h内的死亡数,用Spearman-Karber法计算LD50,lgLD50=L+d(S-0.5)(L为病毒的最低稀释倍数,d为组距,S为死亡数比值之和)。1.6ld50的计算将F5代尿囊液稀释为200×LD50,与等量递进稀释的待检血清混合,37℃作用1h后,每一稀释度接种4只2日龄的肉鸭,记录72h内每组肉鸭的存活数和死亡数,用Spearman-Karber法计算lgPD50=L+d(S-0.5)(L为病毒的最低稀释倍数,d为组距,S为存活数比值之和)。1.7tf代尿囊液原液的制备2日龄的肉鸭分成4组,每组3只。试验组3组分别肌肉注射经不同温度(56,62,68℃)作用30min后的F5代尿囊液原液(0.1mL/羽);对照组鸭肌肉注射生理盐水(0.1mL/羽),记录肉鸭存活数和死亡数。1.8肌肉注射含有甲醛浓度的盐水2日龄的肉鸭分成组7组,每组3只。试验组(1～3组)分别肌肉注射用不同甲醛浓度(0.1%、0.2%、0.4%)37℃作用30min后的F5代尿囊液原液(0.1mL/羽);对照组(4～6组)肌肉注射含有不同甲醛浓度的生理盐水(0.1mL/羽);对照组(第7组)肌肉注射未经处理的F5代尿囊液原液(0.1mL/羽),记录肉鸭存活数和死亡数。2结果2.1亡时间延长随着传代次数的增加,DHV-Ⅰ逐渐适应鸡胚,鸡胚的死亡时间缩短,而且死亡时间趋于一致(见表1)。鸡胚在病毒连续传代(Ⅰ～Ⅴ代)中的主要病理变化包括肝脏坏死、肿大、出血,肾脏出血,脑膜水肿、出血等(见表2)。2.2fps病毒的毒价根据表3结果,计算得到F1代病毒的毒价为104.7LD50/mL,F5代病毒的毒价为104.1LD50/mL。病死鸭表现为角弓反张,病理变化为肝脏出血,胆囊肿大,肾脏有尿酸盐沉积。2.3中和试验见表4根据表4结果,计算血清的中和价为100.5PD50/mL。2.4接种后7d煤鸭病毒死亡56℃作用30min后,接种雏鸭死亡1只,表明仍有部分病毒存活,而62,68℃作用30min,接种后雏鸭均存活,表明病毒全部灭活。2.5甲醛对鸡的致病性表6显示,经0.1%、0.2%的甲醛浓度作用后的尿囊液接种,雏鸭均死亡,表明病毒对该浓度甲醛具有一定的耐受性;而试验3组加入0.4%的甲醛,使病毒的毒力显著下降;从对照组的结果分析,2日龄的肉鸭不能完全耐受过高浓度的甲醛,导致肉鸭死亡。3鸡胚连续传代用鸡胚分离DHV-Ⅰ时,主要病变集中在肝脏、肾脏和脑膜,但肾脏出血,脑膜水肿、出血等症状鲜见报道。同时DHV-Ⅰ在约经过5～6次传代后,在鸡胚中的生长已基本适应,对鸡胚的致死率增加,但病毒感染本动物的能力随着传代次数增加而逐渐下降,与其他学者的研究结果基本一致。通过鸡胚连续传代的方法,使I型DHV逐渐失去对雏鸭的致死性和致病力,可以用于弱毒疫苗的开发。有人报道,从北京地区分离的北京株经传至54代得到DHV-54,对雏鸭的致死力消失,但仍对雏鸭有致病力,使雏鸭产生典型的肝脏肿大、出血等病理变化,在第79代鸡胚适应毒(