生命科学史讲义课件

生命科学史

TheHistoryofLifeScience

生命科学史

TheHistoryofLifeScie1前情回顾生命科学的萌芽古希腊的遗产希波克拉底亚里士多德盖伦前情回顾生命科学的萌芽2第二讲现代科学创立时期的

生命科学第三章文艺复兴与科学革命——开端■

绘画和解剖（达.芬奇）■安德烈.维萨里关于人体的构造■解剖学和生理学（赛尔维特，哈维）■文艺复兴与自然巫术和炼金术（巴拉赛尔苏斯）第四章现代科学的创立——方法学和团体■培根和笛卡尔

■法兰西科学院■美国的科学社团第五章细胞学说——现代生命科学的基础■显微镜和微小的新世界■细胞的发现■常用的细胞/分子生物学研究方法，细胞凋亡及其信号通路第二讲现代科学创立时期的

生命3第三章文艺复兴与科技革命文艺复兴（1300-1650）：Renaissance；有些学者认为始于1453年（土耳其人占领君士坦丁堡之时），终于1640年从1300年开始成渐变过程的多元文化的会聚与冲突；发现时代（希腊哲学，艺术和科学的再发现时期），“过渡时期”人文主义;艺术上提倡精确再现自然;解释自然现象方面的变化;重新发现被遗忘的古希腊思想第三章文艺复兴与科技革命文艺复兴（1300-1650）：R4Renaissance的动力文艺复兴不只是科学和艺术的再生时期，也是社会、经济出现断层的意义深远的时期。1348年的鼠疫夺去1/4至1/2的人的生命。新技术，新发明的使用，印度航线的发展和新大陆的发现。从自然哲学到科学，“科学革命”Renaissance的动力文艺复兴不只是科学和艺术的再生5鼠疫（黑死病）鼠疫是鼠疫杆菌借鼠蚤传播为主的烈性传染病，系广泛流行于野生啮齿动物间的一种自然疫源性疾病。临床上表现为发热、严重毒血症症状、淋巴结肿大、肺炎、出血倾向等。鼠疫在世界历史上曾有多次大流行，死者以千万计，我国在解放前也曾发生多次流行，病死率极高。（百度）天启四骑士”(FourHorsemenoftheApocalypse)，暗指人类的四大祸害──战争、瘟疫、饥荒、死亡。鼠疫（黑死病）鼠疫是鼠疫杆菌借鼠蚤传播为主的烈性传染病，系广6“改变整个世界的外观和状态”的三项发明“力量，效果和结果”指南针：新航路的开辟，新大陆的发现，新的动植物和疾病，人口迁徙火药：打破了骑士和牢固的城堡难以征服的神话，推动了绝对的君主政体和现代国家的增加印刷术：维持和加速了文艺复兴到达北欧“改变整个世界的外观和状态”的三项发明“力量，效果和结果”7解剖学的一脉相承中世纪大学的医学教育（解剖）：教授（宣读者）和技师（理发师）的双簧盖伦主义者和亚里士多德哲学派的辩论解剖学的一脉相承中世纪大学的医学教育（解剖）：教授（宣读者）8绘画和解剖利奥纳多.达.芬奇传奇和神秘的一生

LeonardodaVinci(1452-1519）对于尸体的研究可以让艺术家们更加真实的表达生命绘画和解剖利奥纳多.达.芬奇传奇和神秘的一生对于尸体的研究可9达芬奇和解剖把解剖看作一门值得追求的科学，参加公开解剖，在佛罗伦萨的医院里解剖了大约30个人的尸体，包括7个月的胎儿和老年男人。第一个向大脑室里注射热蜡制作脑室蜡模的解剖学家。连续切片技术，研究眼睛，心脏没有完成关于人体解剖的伟大著作就去世了达芬奇和解剖把解剖看作一门值得追求的科学，参加公开解剖，在佛10安德烈.维萨里关于人体的构造1543，两本挑战天堂和人体本质的巨著：哥白尼的《天体运行论》和维萨里的《人体的结构》Dehumanicorporisfabricalibrispetem，（《人体的构造》，1543）•革新之处：直接观察人体，而不是研究前人的书本以前人书本为准之例：盖伦描述人的大腿骨是弯的，后人据此认为大腿骨不弯是因为穿裤子而变直的安德烈.维萨里关于人体的构造1543，两本挑战天堂和人体本质11安德烈.维萨里的事迹挑战盖伦主义；嘲讽西尔维斯；一个讲师的逆袭：教授和杀猪店；偷尸体，抢骨头；冬天的解剖；“医学上的路德教派”宫廷医生查理五世

菲利普二世圣地朝圣，死亡安德烈.维萨里的事迹挑战盖伦主义；12第一卷：骨骼第二卷：肌肉第三卷：脉管系统第四卷：神经系统第五卷：腹部内脏和生殖器官第六卷：胸腔器官第七卷：大脑，垂体和眼睛动物活体解剖第一卷：骨骼13AndreasVesalius:造物主创造静脉的基本原理就是让它们把血液输送到身体的各个部分，并且象渠道一样，身体的各个部分都可以从中吸取养料。与维萨里在解剖学上的成功相反，在生理学上，他没有建立任何不同与亚里士多德和盖伦的概念和方法。AndreasVesalius:造物主创造静脉的基本原理14解剖学和生理学大小循环的发现希波克拉底亚里士多德盖伦塞尔维特、维萨里、哥伦布阿尔.纳菲斯塞扎尔比诺哈维解剖学和生理学大小循环的发现希波克拉底亚里士多德盖伦塞尔维15一些基本知识一些基本知识16神圣的血盖伦：证明了动脉和静脉都输送血液，把动脉和左心房中明亮的红色血液归于元气或生命精神的存在维萨里：否认了盖伦理论中需要的隔膜上的小孔神圣的血17关键人物MichaelServetus(约1511－1553）塞尔维特:第一个描述肺循环的欧洲人

心脏中隔无微孔，所以没有多少血液能从心脏的右边流到左边

肺动脉粗大，血液能从心脏排到肺里•血液流到心脏，是为了通风，也是为了排出废物；在流经肺的途径中，血的颜色发生了变化关键人物MichaelServetus(约1511－15518塞尔维特的战斗的一生大部分生命都花在了和教条主义，从众主义和传统宗教做斗争上：《论三位一体的错误》和加尔文的联系；《论基督教的复兴》最终的命运塞尔维特的战斗的一生大部分生命都花在了和教条主义，从19Ibnal-Nafis（伊本·阿尔－纳菲斯）纯思索推理出的血液循环理论反对盖伦的心脏隔膜上通道的存在Ibnal-Nafis（伊本·阿尔－纳菲斯）纯思索推理出的血20RealdusColumbus(1516－1559）哥伦布留下医学专著《论解剖学》（无插图）在临床观察、解剖和动物实验的基础上，描述了心脏的形态解剖，纠正了流传了历代的错误：否定了左、右心室之间有直接的通道；指出血液是从动脉样的静脉（即肺动脉）输送到肺……然后和空气一起由静脉样的动脉（即肺静脉）再送到左心室第一个对肺循环进行明确和简单易懂描述的欧洲解剖学家RealdusColumbus(1516－1559）哥伦布21AndreaCesalpino(1519-1603)

塞扎尔比诺崇拜亚里士多德，“心脏是人体最重要的器官”；“大小循环”的发现者发现血液循环，“循环”和“毛细血管”AndreaCesalpino(1519-1603)塞扎22HieronymusFabricius(约1537－1619）

法布里修斯

1603年出版《论静脉中的瓣膜》瓣膜能阻止血液的倒流作用：使身体的各部位都能分配到恰当数量的血液，以维持各部位所需的营养；即主要是调节流量，而不是调节流向哈维的老师（帕多瓦大学，解剖学和外科学主席，大学任教50年）HieronymusFabricius(约1537－16123WilliamHarvey(1578-1657）哈维AnAnatomicalExerciseontheMotionoftheHeartandBloodinAnimals《论动物心脏和血液运动的解剖学专题论文》（1628）【心血运动论】在临床观察、解剖和动物实验的基础上，描述了心脏的形态解剖，纠正了流传了历代的错“静脉样的动脉把混和了空气的血液从肺运送到心脏的左心室”•综合了心脏和整个循环系统的作用和功能，形成了一个完整的新理论。WilliamHarvey(1578-1657）哈维An24心血运动论心血运动论25自然巫术和炼金术文艺复兴的两条主线：（1）艺术和科学；（2）迷信、神秘主义和神秘科学。在生物学史上，炼金术士被看作第一批尝试对有机材料进行化学分析的自然哲学家。炼金术起源于寻找能控制感情、婚姻、生长、死亡和使物质相互变换的方法；它不是起源于经验科学在传统上，炼金术和星占学是与医学连在一起的；而医学本身也是神秘的，不是一个推理的和严谨的科学。Paracelsus(巴拉赛尔苏斯，1493-1541)•提倡用纯粹的药物•相信“烈药治烈病”，用大剂量的汞来代替“圣木”治疗梅毒•引进许多重要的矿物质，如汞、锑、铅、硫、砷、硫酸铜和硫酸钾。自然巫术和炼金术文艺复兴的两条主线：（1）艺术和科学；（2）26巴拉赛尔苏斯PhilippusAureolusTheophrastusBombastusvonHohenheim●医学化学的奠基者，化学史上的怪胎（“双博士”）●主张生命是一个化学过程，因此，生理和病理问题能够用化学术语来解释。●所有的生理过程都基于化学的转变。●医学上偏爱复方；相信暴病要用猛药。巴拉赛尔苏斯●医学化学的奠基者，化学史上的怪胎（“双博士”）27如何理解文艺复兴?仅仅从字面上理解“文艺复兴”易望文生义,以为这只不过是纯粹的古希腊罗马文学和艺术的“复兴”。•当代科学史家乔治·萨顿(GeorgeSarton,1884—1956)认为“文艺复兴如果只是简单地回到古代,就不是一场真正的革命,远不止此,文艺复兴是回到自然。⋯⋯古代典籍的发现加强了人类的批判观念,但革命本身却只能由实验哲学家完成。很清楚,常被称作这场运动的主要特征的个性精神只是这种实验态度的一个方面”。如何理解文艺复兴?仅仅从字面上理解“文艺复兴”易望文生义,以28第四章现代科学的创立回顾17世纪，1787年当德国哲学家康德准备再版《纯粹理性批判》一书时，他认为此书是黑暗世纪的结束。对于自然哲学家，它似乎是一束突然到来的光亮，阐明了科学研究的正确方法。社团与工具（思想/实验）第四章现代科学的创立回顾17世纪，1787年当德国29科学研究建构的建立背景：大学被宗教权威所控制；所有的教授和学生都必须信仰官方的宗教才能进入学校学校和研究会的区别：学校：致力于抽象的和哲学上的研究；主要是维护和传授过去的知识，并不着重于促进新的思想和技术；“科学社团”或“研究会”：注重实用和实验；由少数有天分和热情的知识分子所组成；鼓励自由思维和实验科学科学研究建构的建立背景：大学被宗教权威所控制；所有的教授和学30AcademiaSecretorumNaturae意大利

“探索自然秘密协会”

GiambattistadellaPorta（波塔）Majorwork：Magianaturalis(“NaturalMagic”;4books,1558;2nded.,20books,1589)AcademiaSecretorumNaturae意31生命科学史讲义课件32FrancisBacon（1561-1626）培根知识就是力量，法国就是培根。Knowledgeispower.-----FrancisBaconFrancisBacon（1561-1626）培根知识就是33培根其人英国贵族新的实验科学的预言家，评论家和哲学家影响了哲学，并指引社团的科学进程以科学提高人类福利“现代科学之父”《学术的进展》《新工具》（实验调查法）与归纳法“科学是实验的科学，科学的方法就在于用理性的方法去整理感性材料，归纳、分析、比较、观察和实验是理性方法和重要条件。”-马克思培根其人英国贵族34笛卡尔法国著名的哲学家、物理学家、数学家、神学家，他对现代数学的发展做出了重要的贡献，因将几何坐标体系公式化而被认为是解析几何之父。二元论唯心主义者的代表，留下名言“我思故我在”（或译为“思考是唯一确定的存在”），提出了“普遍怀疑”的主张，是欧洲近代资产阶级哲学的奠基人之一，黑格尔称他为“现代哲学之父”。开拓了所谓“欧陆理性主义”哲学。笛卡儿自成体系，融唯物主义与唯心主义于一体，在哲学史上产生了深远的影响，同时，他又是一位勇于探索的科学家，他所建立的解析几何在数学史上具有划时代的意义。笛卡尔堪称17世纪的欧洲哲学界和科学界最有影响的巨匠之一，被誉为“近代科学的始祖”。笛卡尔法国著名的哲学家、物理学家、数学家、神学家，他对现代数35《关于世界的论述》《论方法》（1637）（有文化的人都应该学习运用推理来寻求真理）推理的规则：（1）不要把任何事情当做真理，除非它是不言而喻的；（2）把复杂问题分成最简单的部分；（3）由简单到复杂地解决问题；（4）重新评估前面的步骤。和培根的差异：把原则放在首位，然后让自己的观察和实验的结果去服从这些原则。笛卡尔《关于世界的论述》笛卡尔36笛卡尔忽略了实验的作用，培根不能正确评价数学在科学方法中的作用。这两种方法应该结合起来，或者我们应该承认，没有任何一种方法可以提出和解决所有可能存在的问题。不论科学家们宣称自己所遵循的是哪种正规的方法或前卫的学说，机械的收集事实、白日做梦，胡乱摆弄，甚至是灵感的突现都会在科学研究中起到一定的作用。——惠更斯(ChristiaanHuygens)笛卡尔忽略了实验的作用，培根不能正确评价数学在科学方法中的作37法兰西的科学院起源于非正式的科学家集会，1666年得到路易十四的资助，成为政府的一个新机构。后来，国防大臣卢弗瓦（deLouvois)主持；认为科学院应致力于对国王和政府有用的项目。法兰西的科学院起源于非正式的科学家集会，1666年得到路易十38美国的科学社团1683年，I.Mather以英国皇家学会为样板，在Boston建立了“TheBostonPhilosophicalSociety”，但因不能避免宗教和政治的争论而失败。富兰克林B.Franklin(1706-1790)在费城建立了Junto（琼托）的团体，讨论自然史，后并入TheAmericanPhilosophicalSociety.1780年在美国波士顿成立TheAmericanAcademyofArtsandSciences，延续至今。美国的科学社团1683年，I.Mather以英国皇家学会为39第五章细胞学说显微镜和微小的新世界“无论怎样小和难以辨认的字母，都能通过装满水的玻璃球或玻璃杯放大而看得更清楚”——Seneca(塞涅卡,4BC-65；罗马哲学家）但他没有意识到球面对放大的影响，而认为是水本身引起的放大。从透镜到显微镜第五章细胞学说显微镜和微小的新世界“无论怎样小和难以辨认的40IbnalHaitham（962-1038）阿尔哈增

在欧洲被称呼为爱尔海森Alhazen《阿拉伯人爱尔海森的光学宝藏》第一个真正描述了凸透镜放大图像的人…如果通过一个透明球体来观察物体…当眼镜和物体在球体的同一直径延长线上，那么所看到的是将是放大了的图像…IbnalHaitham（962-1038）阿尔哈增

在欧411352使用眼镜的证据1403波尔塔《自然魔法》（1589）描述的“奇怪的玻璃”16世纪，制造眼镜片已经成为一种产业三个荷兰人：HansJanssen,Zacharias和HansLippershey（望远镜的发明和组合显微镜）“跳蚤镜”1352使用眼镜的证据1403波尔塔《自然魔法》（1589）42生命科学史讲义课件43斯泰卢蒂的蜜蜂观察斯泰卢蒂的蜜蜂观察44罗伯特.胡(虎)克力学贡献（胡克定律；万有引力）光学贡献（光的波动说）《显微术》，Cell罗伯特.胡(虎)克力学贡献（胡克定律；万有引力）45生命科学史讲义课件46AntonivanLeeuwenhoek列文虎克(1632-1723)从织席贩履之徒到最了不起的显微镜观察者RobertHooke的《显微镜图谱》复显微镜or单筒显微镜？“文盲的好处”？1680年，皇家学会会员最早的微生物学家AntonivanLeeuwenhoek从织席贩履之徒到47Leeuwenhoek’sspecimens,intactafteroverthreecenturies,werefoundstillpackedwiththeoriginallettersinRoyalSociety’sarchives.Eachwasstoredinafoldedpaperpacket.——BrianJFord.TheLeeuwenhoekSpecimensLeeuwenhoek’sspecimens,intac48贡献给皇家学会的400封信各类标本昆虫生活史；动植物组织结构；寄生虫学；微生物学；和“自然发生说”的较量AmongstvanLeeuwenhoek’smanydiscoveriesare:In1674hediscoveredinfusoria(protistsinmodernzoologicalclassification)In1676hediscoveredbacteria.(e.g.largeSelenomonadsfromthehumanmouth)In1677hediscoveredspermatozoaIn1682hediscoveredthebandedpatternofmuscularfibers.贡献AmongstvanLeeuwenhoek’sma49JanSwammerdam

(Feb12,1637Amsterdam-Feb17,1680)

施旺麦丹

荷兰黄金时期涌现出的杰出科学家，一个有意思的昆虫观察者。他的《自然圣经》是首部对昆虫的显微解剖，变形和分类进行研究的著作。作品中还包括对海洋无脊椎动物和两栖动物变形的研究。《昆虫通史》JanSwammerdam

wasaDutchbiologistandmicroscopist.Hisworkoninsectsdemonstratedthatthevariousphasesduringthelifeofaninsect-egg,larva,pupa,andadult-aredifferentformsofthesameanimal.JanSwammerdam(Feb12,1637Am50格鲁的植物学和生理学研究《植物解剖学初探》（1682）：包括了《根部的解剖》、《树干的解剖》、和《叶子、花、果实和种子的解剖》《植物解剖学》和植物学的复兴《胃部和内脏的比较解剖学初探》NehemiahGrew(Sep1641–Mar251712)格鲁AnEnglishvegetableanatomistandphysiologist.格鲁的植物学和生理学研究NehemiahGrew51组织学说

组织学说是解剖学长期发展的产物

MarieFrancoisXavierBichat（1771-1802)比夏比夏寻找组成各个器官的“原始结构”即组织。将有机体分解成21种组织，如神经、脉管、粘液、结缔、纤维等。组织学说

组织学说是解剖学长期发展的产物

MarieFra52PhilippePinel（1745-1826）比奈法国医生，将临床研究诊断与验尸相结合，使观察得以更深入。著作《疾病的哲学记录》(PhilosophicalNosography,1795)，认为不能用体液病理学而应该追踪到器官的出现紊乱来解释疾病。组织学说PhilippePinel组织学说53细胞学说古代哲学家与解剖学家都曾探讨人体结构的本质，推测可能是由人眼看不到的东西构成。即便在显微镜发明后，在很长时间内仍未发现细胞是人体的基本结构。其形成是解剖学长期逐渐发展的产物，也离不开显微镜观察数据的积累。细胞学说成了现代生物学的基础。细胞学说古代哲学家与解剖学家都曾探讨人体结构的本质，推测可能54胡克,1635-1703《显微图谱》（1665）中，出现了cell一词和它的结构图。Leeuwenhoek(列文胡克），1632－1723发现红血球、精子、纤毛虫等；RobertBrown（1773－1858；布朗，英国植物学家）1831年研究细胞核，1833年提出有核的细胞是植物的结构单位。RobertBrown细胞学说胡克,1635-1703《显微图谱》（1665）中，出现了c55布朗运动：被分子撞击的悬浮微粒做无规则运动的现象。这是1826年英国植物学家布朗（1773-1858）用显微镜观察悬浮在水中的花粉时发现的。后来把悬浮微粒的这种运动叫做布朗运动。不只是花粉和小炭粒，对于液体中各种不同的悬浮微粒，都可以观察到布朗运动。布朗运动可在气体和液体中进行。记叙了兰花的花粉粒在柱头上萌发产生花粉管并生长达子房，并描述了细胞核（FecundationinOrchideae,1832)。发现了植物细胞中普遍有汁液流动。布朗运动：被分子撞击的悬浮微粒做无规则运动的现象。56LorenzOken（1779－1851）奥肯，德国自然哲学家）认为有一种原始的、未分化的胶状液体，称为Urschleim（原始质，后为protoplasm所取代)，能产生球状小泡，小泡能产生纤毛虫，是最简单的生物。简单的生物聚集成复杂的有机体；群体中纤毛虫失去独立性并相互依存成为完整的有机体；所以每种动物都是由纤毛虫构成的群体。LorenzOken57JohannesEvangelistaPurkinje

（1787－1869）

普金叶在1837－1838年间发表了对动物细胞的观察结果。描述了神经细胞、神经细胞核和树突、小脑皮层的烧瓶形大细胞等。JohannesEvangelistaPurkinje

58至此，人们发现动物和植物细胞之间的相似性越来越小。

但是，尽管自然科学家希望建立一种新的生命科学，来揭示生物王国千差万别表象下的基本共性，很多人对此还有怀疑。例如康德确信，在生物界中永远也不会出现牛顿式的革命，因为单纯的机械运动定律永远也解释不了有组织的生命体。

至此，人们发现动物和植物细胞之间的相似性越来越小。

59细胞学说的建立

在1838年的论文中指出：经过许多学者的努力，探索动物和植物两大界间的相似性已失败。关键人物一

MatthiasJacobSchleiden

（1804－1881）

施莱登细胞学说的建立

在1838年的论文中指出：经过许多学者的努力60傲慢的施莱登认为当时的植物学是陈旧的，系统化的；认为只有植物化学和生理学是有意义的；植物系统排列的研究是浪费时间傲慢的施莱登认为当时的植物学是陈旧的，系统化的；61cytoblast细胞核是植物中普遍存在的基本结构认识到布朗发现的细胞核的重要性，注意了细胞核，也受当时思想的影响，认为：细胞的增加犹如晶体形成的物理过程，细胞核是通过微小颗粒的逐步积累而生长的。cytoblast细胞核是植物中普遍存在的基本结构62天才的施莱登《植物学概论》坚决反对有组织的生命形式能够通过自然发生而形成植物是个体细胞群天才的施莱登《植物学概论》63受施莱登思想的启发，对动物软骨、脊索细胞和植物细胞进行了研究。著作《关于动植物的结构和生长一致性的显微研究》（1839）指出：一切动物的组织，无论特殊化到什么程度，其结构都是细胞动物组织和植物组织一样，包含有细胞、细胞膜、细胞内含物、细胞核和核仁。“现在我们推倒了分隔动植物界的巨大屏障”——即生物体由细胞组成。关键人物二

TheodorSchwann

（1810－1882）

施旺受施莱登思想的启发，对动物软骨、脊索细胞和植物细胞进行了研究64细胞学说是随着显微镜的使用逐渐发展起来的，并不断得到新观察资料的支持而日趋完善；它也是解剖学长期发展的结果。细胞学说的发展细胞学说是随着显微镜的使用逐渐发展起来的，并不断得到新观察资651.细胞的形成。不管有机体各部分如何千差万别，它们的发育都存在一个普遍的规律，那就是细胞的形成。2.细胞的发生。细胞现象分两类：第一类是和分子组合形成细胞有关的“塑形”现象；第二类是“代谢现象”细胞是代谢的基本单位和现代细胞学的不同：自由细胞形成的概念；细胞形成质的解释方面。Schwann的细胞学说1.细胞的形成。不管有机体各部分如何千差万别，它们的发育都存66对细胞学说的修正

耐格里确信新的细胞是从母细胞中分裂出来的Provost（普罗沃斯特）与Dumas（杜马）于1824年发现：蛙卵细胞分裂（但未意识到这种现象的重要性）A.Kolliker（1817－1905；克里克尔）发现卵分裂时细胞核分裂的现象雷马克1852年发现：小鸡的血球的发生是靠平均分裂弗莱明（WaltherFlemming,1843-1905）提供证据证明了核分裂是细胞分裂的基础，所有的核来源于预先存在的核对细胞学说的修正

67对细胞学说的修正

1855年的著名论断：omniscellulaecellula（即所有的细胞来源于先前存在的细胞）RudolfLudwigCarlVirchow

（1821－1902）

威尔赫对细胞学说的修正

1855年的著名论断：omniscell68CELLTHEORYHISTORICALTIMELINEHans&Zacharias

Janssen1590MatthiasSchieiden18381665RobertHooke1839TheodorSchwann1855RudolphVirchow*produced1stcompoundmicroscope*firsttocallspacesincork“cell”*observedlivingcellsthroughsimplemicroscope*discoveredplantsaremadeofcells*discoveredthatanimalsaremadeofcells1680sAntonvanLeeuwenhoek*statedlivingcellscomefromotherlivingthingsCELLTHEORYHISTORICALTIMELIN69固定剂和染色剂的作用

固定剂，如铬酸和铝酸盐作硬化剂，锇酸固定能把细胞的细微结构保存下来。染色剂，如洋红、苏木精等固定剂和染色剂的使用有利于观察细胞及细胞核内的细节。固定剂和染色剂的作用

固定剂，如铬酸和铝酸盐作硬化剂，锇酸固70现代细胞学说

1.Allknownlivingthingsaremadeupofcells.2.Thecellisstructural&functionalunitofalllivingthings.3.Allcellscomefrompre-existingcellsbydivision.(SpontaneousGenerationdoesnotoccur).4.Cellscontainshereditaryinformationwhichispassedfromcelltocellduringcelldivision.5.Allcellsarebasicallythesameinchemicalcomposition.6.Allenergyflow(metabolism&biochemistry)oflifeoccurswithincells.现代细胞学说

1.Allknownlivingthi71常用的细胞生物学/分子生物学研究方法分子克隆报告基因系统细胞培养、转染siRNA/shRNA干扰免疫共沉淀动物模型免疫荧光……常用的细胞生物学/分子生物学研究方法分子克隆72细胞培养

细胞培养：CellLine,PrimaryCells

悬浮细胞；贴壁细胞10×20×40×细胞培养

细胞培养：CellLine,PrimaryC73分子克隆目的：在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。（过表达，研究基因的功能）DNA片段的制备载体的选择DNA片段和载体的连接引入寄主细胞（转化、转染）扩增质粒分子克隆目的：在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的74TheGATEWAYreactionsareinvitroversionsoftheintegrationandexcisionreactions.Tomakethereactionsdirectionaltwoslightlydifferentandspecificsiteweredeveloped,att1andatt2foreachrecombinationsite.Thesesitesreactveryspecificallywitheachother.ForinstanceintheBPReaction

attB1onlyreactswithattP1resultinginattL1andattR1,andattB2onlywithattP2givingattL2andattR2.Thereversereaction(LRReaction)showsthesamespecificity.TheGATEWAYreactionsareinv75RNA干扰RNA干扰76报告基因系统（luciferaseassay）报告基因系统（luciferaseassay）77免疫荧光NLRC5(WT)NLRC5(K1178)UTLPSUTLPSUbNLRC5MergeHeLacells