RUNX3蛋白表达基因甲基化及多态与胃黏膜病变的关系课件

RUNX3蛋白表达、基因甲基化及多态与胃黏膜病变的关系

李文庆北京大学临床肿瘤学院流行病学研究室

1RUNX3蛋白表达、基因甲基化及多态与胃黏膜病变的关系1研究背景—RUNX3与胃癌基础研究证据：胃癌的候选抑制基因。基础研究证据：与正常胃黏膜生理功能有关。

1.TGF-β通路的下游靶分子2.调控胃上皮细胞增殖和凋亡平衡，表达缺失致上皮显著增生3.调控胃上皮细胞分化，表达缺失使胃上皮向肠型细胞转化，发生IM基础研究证据：RUNX3通过异常甲基化、遗传变异等导致产物或表达水平变化，在胃癌的发生、发展中起作用。

研究背景—RUNX3与胃癌基础研究证据：胃癌的候选抑制基因。研究背景—散发病例关联研究证据蛋白表达关联研究证据：1.胃癌组织中RUNX3表达水平明显降低。2.胃癌癌前病变中已有表达水平下调。甲基化关联研究证据：1.胃癌组织的RUNX3甲基化水平升高。2.胃癌癌前病变中也有甲基化水平增加。

研究背景—散发病例关联研究证据蛋白表达关联研究证据：研究背景—RUNX3遗传变异基础研究证据：1.Li等：Arg122Cys突变导致抑癌活性的丧失2.错义突变、插入缺失突变，导致产物异常，破坏其功能关联研究证据：尚为数不多，且结论不一

研究背景—RUNX3遗传变异基础研究证据：存在问题和研究目的—表达和甲基化

现有关联性研究样本量小，涵盖胃黏膜病变种类少，医院散发病例，组织源于癌旁缺乏对各种胃黏膜病变的系统研究需要人群为基础的分子流行病学研究进一步论证关联研究RUNX3蛋白表达、甲基化与不同胃黏膜病变的关系，评价H.pylori感染与甲基化的关系及甲基化对表达的影响存在问题和研究目的—表达和甲基化现有关联性研究样本量存在问题和研究目的—遗传变异功能研究和关联研究均较少对RUNX3基因启动子区和编码区遗传变异进行筛查，探讨与胃黏膜病变患病风险和蛋白表达强度的关系存在问题和研究目的—遗传变异功能研究和关联研究均较少材料与方法—研究对象研究对象：来自山东临朐胃癌高发现场1113例最高诊断组织外周血白细胞DNA2002年胃镜检查2579例RUNX3蛋白表达及甲基化与胃黏膜病变30例外周血白细胞DNARUNX3遗传变异筛查RUNX3基因多态与胃黏膜病变对照组SG41例CAG240例IM308例IndDYS433例DYS91例材料与方法—研究对象研究对象：来自山东临朐胃癌高发现场1材料与方法—实验室分析蛋白表达：免疫组织化学方法

结果判定：以细胞浆或细胞核棕黄色为阳性四个等级：阴性、弱阳性、中度阳性和强阳性甲基化：MSP(甲基化特异性PCR)

甲基化阳性对照：AGS细胞系；非甲基化：MKN细胞系设立空白对照遗传变异筛查:PCR-DHPLC-测序

(启动子区和编码区)

大样本基因多态检测：PCR-DHPLC(筛选出的多态位点)

材料与方法—实验室分析蛋白表达：免疫组织化学方法材料与方法—统计学分析RUNX3蛋白表达、基因甲基化及多态胃黏膜病变的关系:非条件logistic回归(SAS9.1)基因甲基化及多态与表达强度的关系:非条件logistic回归(SAS9.1)单倍型与病变的关系：haplo.stats(R语言)材料与方法—统计学分析RUNX3蛋白表达、基因甲基化及多态胃研究结果研究对象的基本资料RUNX3表达与胃黏膜病变的关系RUNX3基因甲基化与病变及表达强度的关系RUNX3基因多态与病变及表达强度的关系

研究结果研究对象的基本资料研究对象的基本资料SelectedcharacteristicsandriskfactorsinsubjectsofdifferentevolutiongroupsSelectedcharacteristicsofthestudyparticipantswithdifferentgastriclesions研究对象的基本资料SelectedcharacteristRUNX3表达与胃黏膜病变的关系RUNX3expressionintensityinstudyparticipantswithdifferentgastriclesions

重度胃黏膜病变RUNX3表达阳性率明显降低。重度胃黏膜病变RUNX3表达强度明显降低。*Unconditionallogisticregressionanalysis,adjustedforbaselinecharacteristics.

RUNX3表达与胃黏膜病变的关系RUNX3exprRUNX3甲基化与胃黏膜病变的关系FrequencyofRUNX3methylationinsubjectswithdifferentgastriclesions重度胃黏膜病变RUNX3甲基化频率明显增加(Ptrend

<0.0001)。H.pylori感染者的甲基化频率明显高于非感染者(OR=1.42,95%CI=1.02-1.96)。*Unconditionallogisticregressionanalysis,adjustedforbaselinecharacteristics.

RUNX3甲基化与胃黏膜病变的关系FrequencyRUNX3甲基化与表达的关系RUNX3expressionintensityinstudyparticipantswithdifferentgastriclesions

RUNX3甲基化与表达强度负相关，尤其在H.pylori感染者。

*UnconditionallogisticregressionanalysisRUNX3甲基化与表达的关系RUNX3expresRUNX3遗传变异筛查结果共在启动子和编码区发现8个SNP位点ScreeningresultofthepromotersandcodingregionsofRUNX3

RUNX3遗传变异筛查结果共在启动子和编码区发现8个SNP位基因多态与胃黏膜病变的关系SelectedcharacteristicsandriskfactorsinsubjectsofdifferentevolutiongroupsAssociationofRUNX3geneticpolymorphismswithriskofprecancerousgastriclesions

*Unconditionallogisticregressionanalysis,adjustedforbaselinecharacteristics.

rs4265380GA基因型与IndDYS或DYS患病风险的增加有关。基因多态与胃黏膜病变的关系Selectedcharacte基因多态与RUNX3表达的关系AssociationofRUNX3geneticpolymorphismswithintensityofRUNX3expression

*Unconditionallogisticregressionanalysis,adjustedforbaselinecharacteristics.

rs4265380A及rs7536201G等位基因与表达强度下降有关

基因多态与RUNX3表达的关系Associationof连锁不平衡分析和单倍型分析

rs4265380、rs7536201和rs6672420之间紧密连锁。AGA单倍型与表达强度下降有关。AssociationofRUNX3geneticpolymorphismswithintensityofRUNX3expression

*Unconditionallogisticregressionanalysis,adjustedforbaselinecharacteristics.

连锁不平衡分析和单倍型分析rs4265380、rs7536讨论RUNX3蛋白表达与胃黏膜病变的关系

1.蛋白表达阳性率与胃黏膜病变负相关。

既往证据：RUNX3表达与胃癌患病风险相关。在IM组织也有表达的减少。

2.蛋白表达强度与胃黏膜病变负相关。RUNX3表达缺失和下调可能在重度胃黏膜病变的发病中起重要作用。讨论RUNX3蛋白表达与胃黏膜病变的关系讨论RUNX3表达下调增加胃黏膜病变风险的可能机制1.通过剂量依赖的形式影响TGF-β信号传导，影响胃上皮增殖和凋亡。

既往证据：Runx3KO鼠细胞胃上皮过度增殖，凋亡减少，黏膜增生。2.

影响胃黏膜肠上皮化生。既往证据：Runx3KO鼠胃上皮Cdx2表达增加，诱导分化为肠型细胞。

讨论RUNX3表达下调增加胃黏膜病变风险的可能机制讨论RUNX3表达下调可能在胃黏膜病变演变为IM的过程中起作用，且该作用持续在更高水平病变中存在。1.SG/CAG与IM/IndDYS/DYS表达差异大。2.DYS组趋势略有波动：样本量3.重度胃黏膜病变之间表达差异小，总体仍呈下降趋势。抗体识别全长RUNX3蛋白，可检测两种转录起始的产物。

讨论RUNX3表达下调可能在胃黏膜病变演变为IM的过程中讨论RUNX3基因甲基化与胃黏膜病变的关系1.重度胃黏膜病变甲基化阳性率高。

既往证据：胃癌组织中的甲基化水平明显升高。在IM等组织也有甲基化水平升高。

2.甲基化阳性率随病变严重程度呈增加趋势。既往证据：与Kim的研究结果相似。讨论RUNX3基因甲基化与胃黏膜病变的关系讨论RUNX3基因甲基化与蛋白表达强度呈负相关。既往证据：第2启动子周围CpG岛易发生甲基化，致表达下调来自细胞系研究和医院散发病例研究的证据支持RUNX3基因甲基化诱导蛋白表达下调，可能在重度胃黏膜病变发病中起作用。

讨论RUNX3基因甲基化与蛋白表达强度呈负相关。讨论RUNX3基因甲基化与H.pylori感染的关系1.H.pylori感染与RUNX3甲基化有关

既往证据：H.pylori促进NO生成，DNMT活性，诱导甲基化

H.pylori感染促进p16和COX-2甲基化

2.甲基化与表达的显著关联仅存在于感染阳性者H.pylori感染可刺激RUNX3甲基化导致表达水平降低讨论RUNX3基因甲基化与H.pylori感染的关系讨论RUNX3遗传变异筛查，编码区仅第一外显子发现一个SNP位点既往证据：Wei等在编码区未发现SNP位点仅rs4265380GA携带者的IndDYS和DYS风险增加，但AA未见既往证据：对RUNX3SNP与胃癌及胃黏膜病变关系的研究很少，尚无公认证据讨论RUNX3遗传变异筛查，编码区仅第一外显子发现一个S讨论rs4265380A及rs7536201G等位基因携带者的表达强度下降rs4265380A-rs7536201G-rs6672420A单倍型与表达强度下降有关既往证据：目前尚未见类似研究。Li等发现Arg122Cys导致RUNX3抑癌活性丧失。