乙肝病毒表面抗原测定的影响因素及解决方法

乙肝病毒表面抗原测定的影响因素及解决方法

用酶联免疫吸附试验（elisa）检测肝肾患者的病毒，具有操作简单、特异性强、敏感性高、试剂成本低、快速等优点。现在它在中国广泛使用，但也有许多影响手术结果的因素。为提高乙肝病毒的检测质量,本文通过对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的测定探讨其重要影响因素及解决方法,现报道如下。1后hbsag检测1.1标本应按常规方法采集,不可溶血(因红细胞溶解释放出过氧化酶活性物质可引起非特异性显色),对严重脂血、黄疸及药物治疗等会影响检测结果,其标本应叮嘱受检者重新采集。1.2在检测HBsAg同时又有其他检测项目的,要采集双管血。对只有单管血的标本,应先检测HBsAg,后送其他检测室进行检测,以避免相互交叉污染,出现错误结果。1.3严格执行标本的查对制度,接收标本应将标本上的标签与申请单逐一核对,确定姓名、性别、年龄,有差错应及时和临床沟通,避免标本采集错误。1.4HBsAg检测使用血清,标本一定要充分离心,彻底去除纤维蛋白。否则加进反应孔的血浆凝固可阻止HBsAg的游动,不利于与吸附在反应杯上的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)结合,从而产生错误的假阴性结果。1.5标本应及时检验,一次性塑料管标本放置时间不宜过久。需第2天检测的标本要冰箱冷藏保存。2试剂的原因2.1试剂的选用试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。要选购知名度相对高、具有厂商证照齐全的试剂,不要用无批号的试剂,最好选用与仪器配套的试剂。勿混用不同厂家不同批号的试剂和过期失效的试剂,即使是同一厂家生产的洗涤液和显色剂也不要通用,以确保结果的准确性。2.2试剂盒的使用前与温室的平衡有些实验室工作量很大,不太注意试剂的准备,将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响一些弱阳性标本的检测。正确的做法是实验开始前将试剂在室温下放置20~30min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。3操作因素3.1滴加试剂的使用3.1.1微量加样器要定期校正,以保证加样量的准确。3.1.2标本应加入反应孔的底部,避免加在孔壁上,不得溅出或有气泡,不得加入纤维蛋白原。加样力度和速度应均匀。3.1.3滴加试剂(包括酶结合物及显色剂)时,应摇匀试剂,使液体混匀,瓶身保持垂直,并弃去1~2滴,避免滴加在孔壁上,并注意不可溅出,不可产生气泡,要注意滴加的角度、速度。角度要一致,滴加速度适中,否则太快容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象,引起非特异显色造成1份标本用相同的试剂盒测定结果重复性差。3.1.4要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。3.1.5标本较多时,应分批操作,防止加样后放入温箱前等待时间过长,以减少实验时间延长造成的误差。3.2反应时间的确定3.2.1加样完成后,应充分振荡混匀。3.2.2微孔板应贴上封板胶放入温箱中,以减少孔内液体的蒸发。反应温度应准确(37℃),而且还应考虑反应板放置水浴达到37℃后所需的时间。尤其在室温较低的时候或在非水浴的状态下。因此,为保证37℃条件下足够的温育时间,临床实验室应确定本实验室在不同季节不同温度下将微孔板从室温下拿至温箱后需要多长时间,孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中放置的时间。3.2.3反应时间要准确,时间过短特异性结合不够,易产生假阴性;时间过长,非特异性结合物紧附于反应孔难以洗脱,测定值偏高。3.3电子商务面为硬的患者,加液清洗并过硬在ELISA操作过程中,洗涤是决定试验成败的关键步骤之一。ELISA测定的洗板一般有两种方式,即手工和洗板机洗板。洗板机要保证洗板针畅通,洗涤时设定每遍30~60s浸泡时间,使洗涤彻底,加液的速度、力度适宜。手工洗板加入的洗液量以刚满反应孔为限,防止孔口内有游离酶未能洗净,同时防止孔与孔之间液体交叉。并且洗涤结束后扣干亦非常重要,否则易造成假阳性。每次洗完板后,在吸水纸上轻轻拍干,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;吸水纸要一次性使用,应使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。3.4elisa测定显色液及时间的确定显色是ELISA的最后一步温浴反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。加显色液顺序不可颠倒。温度和时间是影响显色的因素。两者在ELISA定量中尤其重要。因此,在一定时间内,适当提高温度有助于加速显色进行。3.5elisa法测定结果读取结果要在15~30min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10~15cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15~30min再进行测试。定性测定报阴性或阳性即可,定量测定则报出具体的数值。结果解释比较复杂,它要求实验技术人员对所测定的项目有较为全面的知识基础。综上所述