生物实验报告-ABO血型鉴定

生物实验报告姓名： 班级： 日期： 同组者： 实验序号： 实验题目：ABO血型鉴定实验目的：1.掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点2.掌握ABO血型的鉴定方法实验原理：人类的ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一个基因只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因I则有三个不同等位基因。即同一时间内，一个位点可以有其中任何两个等位基因出现。等位基因A使红血球产生抗原A；等位基因B使红血球产生抗原B；等位基因O使红血球不产生抗原；等位基因A和B为等显性，O对A和B均为隐性。ＡＢＯ血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无Ａ抗原和Ｂ抗原或AB抗原，将血型分为Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型及Ｏ型四种。本实验采用红细胞凝集试验，用已知抗Ａ和抗Ｂ单克隆抗体来测定红细胞上有无相应的Ａ抗原或Ｂ抗原或AB抗原来确定ABO血型。抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A单克隆抗体或B抗原加抗B单克隆抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.实验对象：血液实验器材：受检者血液抗A、抗B单克隆抗体载玻片、脱脂棉、针、酒精棉球、生物显微镜、冰箱等。实验方法及步骤：1.血涂片的制作用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血针刺破指尖或耳垂，从采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻巴细胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或卵圆形，位于细胞中部，也染成深蓝紫色。单核细胞数量少，约占2%-8%，是细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞一侧，着色比淋巴细胞浅。血小板为形状不规则的细胞小体，其周围部分为浅蓝色，中央有细小的紫色颗粒，常聚集成群，分布于红细胞之间。高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒，在油镜下才能看到颗粒周围的浅色胞质部分。3.血型鉴定标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。分别吸取抗A、抗B单克隆抗体各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。采血针刺破左手无名指尖或耳垂，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取或消毒后的牙签挑取血液，分别加入到玻片左、右两侧的单克隆抗体试剂内，并用牙签搅拌，使单克隆抗体试剂与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！）然后置室温下5min后观察结果。肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。注意事项：玻片、试管都要标记！！！，A及B标准血清/抗A、抗B单克隆抗体绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。离心时间、速度严格要求，以防假阳性或假阴性结果。要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即