丹莪妇康煎膏对子宫腺肌病小鼠异位和体位内膜vegf及mmp-2的影响

丹莪妇康煎膏对子宫腺肌病小鼠异位和体位内膜vegf及mmp-2的影响

子宫腺炎是妇科常见的疾病。据研究，异常的血管生长和子宫内原始生长因子（vegf）对引起血管生成起着重要作用。血管生成的生长因子（vgf）是控制血管生成的重要药物，是血管生成的重要指标。kimp-2的过度发现可能是子宫腺炎的生物学行为（基质层膜湿润）的原因之一。而现有行气化瘀类中药治疗子宫腺肌病具有多靶点作用,临床运用行气化瘀法治疗子宫腺肌病取得良好疗效。本研究通过建立子宫腺肌病动物模型,以血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2为靶点,运用病理切片、HE染色、免疫组化技术的研究方法,观察VEGF及MMP-2在治疗前后及在子宫在位与异位内膜不同部位的变化,探索行气化瘀法治疗子宫腺肌病的作用机理和环节,为中医药治疗子宫腺肌病的临床疗效寻找新的证据。1材料和方法1.1研究主题健康雌性未孕ICR小鼠,健康雄性ICR小鼠,鼠龄8周龄,体质量(30±2.5)g,由四川简阳动物实验中心提供。1.2实验方法1.2.1明清时期云南积极开展以发挥为原料的抗菌药及其他信息丹莪妇康煎膏(紫丹参、莪术、三棱、香附、延胡索等),由昆明滇虹药业有限公司出品,国药准字Z20025253,产品批号110503。1.2.2小鼠脑垂体活检采用同种异体ICR小鼠宫腔内垂体移植的方法。腹腔注射1%戊巴比妥钠,麻醉后,常规腹部消毒,下腹偏右侧纵向切口2cm,分离出右侧子宫。另取同周龄ICR雄鼠,断颈处死,取出脑垂体,混合少许生理盐水后,吸入部分垂体生理盐水悬浊液约0.5~1mL于50mL注射器针头内,注射器针头穿刺进入雌鼠右侧子宫内后,将垂体生理盐水悬浊液缓慢推入宫腔,注射器针头退出。腹腔内放入庆大霉素溶液0.25mL(2×104U/20g),关腹。术后常规饲养。1.2.3动物分组及处理将健康雌性未孕ICR小鼠28只,随机抽取6只设为空白组,其余22只小鼠按上述造模方法制作小鼠子宫腺肌病动物模型。造模饲养3个月后,随机抽取模型小鼠10只取右侧子宫组织送检,证实造模成功,再将其余12只造模动物随机分为模型组、丹莪妇康煎膏组。丹莪妇康煎膏用蒸馏水配成质量浓度为0.35mg/mL的水溶液,每天1次灌胃丹莪妇康煎膏水溶液0.4mL/20g体质量(相当于0.14g/20g体质量);模型组每日灌胃蒸馏水0.4mL/20g体质量;空白组每日灌胃蒸馏水0.4mL/20g体质量。连续给药2月。1.2.4样品采集与处理方法于末次给药后24h,引颈处死小鼠,取出右侧子宫标本固定、脱水、包埋、切片、并采用免疫组化SP法染色。1.3移动组织学观察取模型组及丹莪妇康煎膏组小鼠右侧子宫纵切面及横切面切片,一个标本的同一切片显微镜下可同时观察异位内膜及在位内膜。采用Mias图形分析系统,在200倍显微镜视野下分别测量同一切片内异位内膜及在位内膜一定面积中阳性物质的积分光密度,以此表示VEGF及MMP-2的表达情况。1.4统计学分析方法所有数据均由SPSS17.0统计软件进行处理,定量指标用单因素方差分析,组间比较用LSD、S-N-K分析和Tamhaneue679sT2检验。2免疫组化检测结果2.1小鼠含vegf检测的小鼠精子缺陷与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01;与模型组(在位)比较,■P<0.01模型组在位内膜VEGF表达明显高于空白组(P<0.05);经过丹莪妇康煎膏治疗后的小鼠在位内膜VEGF显著低于未经治疗的小鼠(P<0.01);治疗后的小鼠在位内膜VEGF低于空白组(P<0.01)。通过检测VEGF在模型小鼠子宫不同部位的表达,异位内膜显著低于在位内膜(P<0.01);但经过治疗后的小鼠异位内膜显著低于空白组在位内膜(P<0.01)。2.2治疗的模型小鼠异位内膜的MMP-2表达丹莪妇康煎膏治疗组与未经治疗的模型小鼠有显著性差异(P<0.01)。通过检测MMP-2在模型小鼠子宫不同部位的表达,异位内膜显著高于在位内膜(P<0.01)。3调节性药物在肺癌体内的表达行气化瘀药物有调畅血行、活血通络、祛除瘀滞作用,通过修复血管内皮细胞损伤,抑制其增殖,可能有效改善组织缺血缺氧的“血瘀”状态,而消除新生血管生成的条件,在血管形成前期阻断病变进一步发展。活血化瘀中药能够从形态学上修复PCOS大鼠损伤的内皮细胞,调整内皮细胞功能。三七、丹参、川芎可以使转移灶内新生的毛细血管退化及改善循环中的免疫识别。而蒲黄-五灵脂药对对大鼠急性血瘀模型的血液流变性及体外对家兔血小板聚集及凝血酶时间的影响均有显著作用。姜黄素抑制肝癌细胞BEL-7402中VEGF的mRNA和蛋白表达。活血化瘀药还可通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤的发生和转移,丹参的有效抗癌成分丹参酮ⅡA纳米粒在治疗小鼠肝癌时,通过参与Fas/FasL的表达,阻止细胞进入s期,抑制DNA合成,诱导细胞凋亡。姜黄素可以影响Caspase-8和Caspase-9的表达,调整Bcl-2/Bax的表达,增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性,来诱导多种肿瘤细胞的凋亡。莪术油和莪术醇能通过抑制HepG2细胞COX-2和VEGF基因表达,调节膜受体通路(Caspase-8)和/或线粒体通路(Caspase-9),促进肿瘤细胞凋亡。益母草水和乙醇提取物可使乳腺癌细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡。子宫腺肌病小鼠模型已经成功的运用在致病机理研究方面。ZhouYF等通过动物模型验证普罗布可(降脂药)对子宫腺肌病的治疗效果。Suzuki-KakisakaH等将人体的子宫腺肌病组织移植于裸鼠,探讨通过氨基酮戊酸治疗后产生光动力学效应。LiuX通过子宫腺肌病小鼠模型观察丙戊酸缓解子宫腺肌病的泛发性疼痛的结果。本实验通过子宫腺肌病的小鼠模型观察发现,疾病模型组在位内膜VEGF表达明显高于空白组,而异位内膜该因子的表达与空白组无显著差异。实验小鼠在位内膜VEGF造模后表达的增强,与目前临床研究结论一致,验证了“EMS原位内膜决定论的观点”。异位内膜的VEGF表达丹莪妇康煎膏治疗组与未经治疗的模型小鼠无显著性差异,而在位内膜VEGF表达治疗组显著低于未经治疗的模型组,推测丹莪妇康煎膏治疗可能主要通过作用在位内膜的血管生成靶点,从而达到治疗子宫腺肌病的作用。疾病模型组异位内膜MMP-2表达显著高于空白组及模型组在位内