喷酸葡胺脂质体在小鼠体内的分布与药代动力学研究

喷酸葡胺脂质体在小鼠体内的分布与药代动力学研究

为了改善图像的透明度和清晰度，大多数临床（mri）中使用合适的造影剂。钆喷酸葡胺(Gd-DTPA)为目前临床中广泛使用的一种造影剂,它具有低的毒性和高的自旋数(7/2),对中枢神经系统和脊柱的造影效果令人满意,且有实验证明对大脑造影安全有效。早期的实验结果表明,对肝其和脾的造影效果不理想,因为溶解度高的络合物不能在这些器官累积。为了使钆喷酸葡胺具有靶向性,作者实验将其包裹在磷脂中,制备成脂质体。作者用ICP发射光谱分析法代替HPLC分析法测定钆含量,克服了HPLC测定波长在远紫外区(λ=195nm)误差大的缺点,并采用ICP发射光谱分析法,进行钆喷酸葡胺及其脂质体在体内分布与药代动力学的研究和比较,考察了钆喷酸葡胺脂质体的体内靶向性。1材料表面1.1药物和试剂钆喷酸葡胺注射液(广州药业),钆喷酸葡胺脂质体(自制),生理盐水(双鹤药业)。1.2动物昆明雄性小鼠(体重20～22g,沈阳药科大学实验动物中心,辽实动字—042(2000))。1.3等离子体观测美国P.E公司ICP电感耦合等离子发射光光谱仪4300D。样品流量:1.50mL·min-1;雾化气:0.8lmin-1;辅助气:0.2lmin-1;等离子:151min-1;功率:1300W;观测高度:15mm;等离子体观测方向:垂直(径向);延迟时间:40s。定量分析在ICP电感耦合等离子发射光谱仪上进行,所得的血药时程数据用3P87药代动力学计算程序处理。2方法和结果2.1尾静脉测量样品采集共设置2个试验组,每个采样时间点使用5只小鼠。第1组:尾静脉注射Gd-DTPA注射液,给药后分别于不同时间(0.17、0.5、1、2、4、6、24h)摘眼球取血0.5mL,肝素抗凝,置-20℃冰箱备用。随即断头处死小鼠,分别取出心、肝、脾、肺、肾(取样时间为0.17、0.5、1、2、4、6、24h),蒸馏水冲洗,滤纸擦净,置-20℃冰箱备用。第2组:尾静脉注射Gd-DTPA脂质体,采样时间和采样量与第1组相同。给药剂量均为0.1mmol·kg-1。2.2热反应-硝化反应剖取小鼠心、肝、脾、肺、肾,精确称重后匀浆,用浓硝酸硝化,生理盐水定容至5mL,进行样品分析。血样取0.2mL,处理方法同“2.1”条。2.3标准曲线的绘制取小鼠全血0.2mL及各组织0.1g,分别加入含钆量为1.88、18.8、37.6、75.3、188、376、753mg·L-1的标准溶液1mL,按“2.2”条处理后,生理盐水定容至10mL,取样分析。结果表明,在0.188～75.3mg·L-1内,信号强度(X)和样品质量浓度(ρ)呈现良好的线性关系。结果见表1。2.4加标回收率测定分别测定不同组织或血浆标准曲线浓度范围内的高、中、低3个浓度1.88、7.53、37.6mg·L-1标准钆样品的日内、日间变异系数,处理方法同“2.2”条。结果测得日内的平均各浓度的RSD小于5.0%,测得日间平均各浓度的RSD小于5.5%。分别测定不同组织或血浆标准曲线范围内高、中、低3个浓度1.88、7.53、37.6mg·L-1标准钆样品的回收率,处理方法同“2.2”条。结果表明,在小鼠全血与组织中浓度的平均回收率均在89.30%～96.78%之间,其RSD小于6.76%。2.5gd-dtpa的表观分布按相同剂量(0.1mmol·kg-1)分别给小鼠尾静脉注射给药(对照组和脂质体组)后,不同时间小鼠全血中钆浓度-时间曲线如图1所示。浓度测定数据经3P87计算程序处理并判别,此血药浓度经时变化符合二室模型。其药代动力学参数见表2。得到血药浓度经时过程表达式为:Gd-DTPA水溶液:ρ=330.40e-4.16t+5.06e-0.03t;Gd-DTPA脂质体:ρ=739.52e-2.72t+22.82e-0.074t。从表2看出:Gd-DTPA水溶液的t1/2(α)为10min;而Gd-DTPA脂质体t1/2(α)为16min。Gd-DTPA水溶液的t1/2(β)为21h;而Gd-DTPA脂质体的t1/2(β)为近9h。Gd-DTPA水溶液的表观分布容积V(c)为0.03L·kg-1;Gd-DTPA脂质体的表观分布容积V(c)为0.013L·kg-1。Gd-DTPA水溶液的AUC为239.28mg·h·L-1;Gd-DTPA脂质体的AUC为582.86mg·L-1。Gd-DTPA水溶液消除速率CL(s)为0.042L·h-1;Gd-DTPA脂质体消除速率CL(s)为0.017L·h-1。静脉给药理论上应为单室模型,而本实验为二室模型最佳,主要因为Gd-DTPA能与血清白蛋白结合,影响其在体内的分布。2.6药物浓度及动力学参数小鼠单剂量(0.1mmol·kg-1)分别尾静脉注射Gd-DTPA注射液(对照组)和Gd-DTPA脂质体(样品组)后,测定不同时间钆在心、肝、脾、肺、肾中的分布浓度,见图2。并对各组织的药物浓度时间过程经3P87计算程序处理,得到各组织的主要动力学参数,见表3。LipGd-DTPA在同一时间点各组织中肝、脾有较高的分布,而与Gd-DTPA相比肝、脾的吸收明显增加。对样品组和对照组进行差异显著性检验,零假设对样本的方差相等,即H0∶σ1=σ2,显著性水平α=0.05,结论为F统计值>F临界值,P<0.05,H0假设被拒绝σ1≠σ2两样本有显著差异。2.7不同植物基因型小鼠体内各靶向菌活性的比较常用靶向参数(TI)来定量靶向制剂其靶向性,靶向参数(TI)的定义为:靶向制剂治疗组小鼠靶器官中药物浓度-时间曲线下面积(AUC)与水溶液治疗组小鼠靶器官中药物浓度-时间曲线下面积(AUC)的比值。肝