药物的鉴别试验

药物的鉴别试验（Identificationtest）教学目的和规定1．理解药物鉴别试验是为了鉴别药物的真伪。熟悉我国药典鉴别的项目、鉴别试验的条件及敏捷度的意义2．掌握我国药典药物的一般鉴别措施3．掌握各类有机物、无机物的鉴别试验措施及原理一、概述根据药典进行的药物分析重要有三大项：鉴别、检查和含量测定。药物的鉴别试验（identificationtest）是用于鉴别药物的真伪，在药物分析中属首项工作，只有证明被分析的药物是真的，才有必要接着进行检查、含量测定。药典所收载的药物项下的鉴别试验措施，仅合用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证明与否为其所标示的药物。它与分析化学中的定性鉴别有所区别。这些试验措施不能赖以鉴别未知物。二、鉴别试验的项目1、性状:药物的性状反应了药物特有的物理性质。包括外观,嗅味,溶解度及物理常数等。物理常数：熔点、比旋度、吸取系数。比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中具有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度称为比旋度。它是反应手性药物特性及其纯度的重要指标。吸取系数：在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸取度称为吸取系数。有两种表达方式：摩尔吸取系数和百分吸取系数。百分吸取系数：在一定波长下，溶液浓度为1%（W/V），厚度为1cm时的吸取度，用表达，是吸光物质的重要物理常数。2、一般鉴别试验(generalidentificationtest)。一般鉴别试验是以药物的化学构造及其物理化学性质为根据,通过化学反应鉴别药物的真伪。一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物或有干扰物质存在时，除另有规定外，应不合用。*通过一般鉴别试验只能证明是某一类药物，而不能证明是哪一种药物。例如，经一般鉴别反应的钠盐试验，证明某一药物为钠盐，但不能识别是氯化钠、苯甲酸钠或者是其他某一种钠盐药物。要想最终证明被鉴别的物质究竟是哪一种药物，必须在一般鉴别试验的基础上，再进行专属鉴别试验，方可确认。通过一般鉴别反应只能证明是某一类药物,不能证明是哪一类药物。无机物:阴,阳离子的特殊反应。有机物:采用药典的官能团反应。一般鉴别试验的项目：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、无机金属盐类（钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、钡盐、铵盐、镁盐、铁盐、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、有机酸盐（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐）、无机酸盐（亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物）。（一）有机氟化物1．鉴别试验取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法（附录VIIC）进行有机破坏，用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸取液，俟燃烧完全后，充足振摇；取吸取液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色；同步做空白对照试验。2．试验原理有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，为碱性溶液吸取成为无机氟化物后，与茜素氟蓝、硝酸亚铈形成蓝紫色络合物。（二）有机酸盐1．水杨酸盐鉴别试验一取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。原理本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化铁试液生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色；若在强酸性中，配位化合物分解生成游离水杨酸。本反应极为敏捷，只需取稀溶液进行试验，如取用量大，产生颜色过深时，可加水稀释后观测。鉴别试验二取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。原理水杨酸不溶于水（0℃时溶解度为1g/1500L），故供试液加酸即析出游离水杨酸。由于水杨酸的酸性（K＝1.06×10-3，25℃）不小于醋酸（K＝1.85×10-5，25℃），故能与醋酸铵作用释出醋酸，而自身形成铵盐溶解。析出的水杨酸亦可经冷水洗涤、干燥后测定熔点（158℃-161℃）。2．苯甲酸盐3．乳酸盐4．枸橼酸盐5．酒石酸盐6．醋酸盐鉴别试验取供试品，加硫酸和乙醇后加热，即产生乙酸乙酯的香气。（三）无机金属盐1．钠盐鉴别试验一取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。原理钠的火焰光谱在可见光区，有589.0nm、589.6nm重要谱线，故其燃烧火焰显黄色。本焰色反应极为敏捷（最低检出限量为0.1ng钠离子）。因此，对所用仪器和试剂规定必须很严格。在检测前应将铂丝烧红，趁热浸入盐酸中，如此反复多次，直至火焰不染黄色后，再蘸取供试品进行测定。只有当强烈的黄色火焰持续数秒钟不退，才能确认为钠盐。鉴别试验二取供试品的中性溶液，加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色沉淀。原理其反应式为：本试验中，供试品溶液应为中性；有些有机酸盐（如水杨酸钠）遇醋酸氧铀锌试液能生成有色配位化合物，故在试验前应对供试液进行预处理。其处理措施是，在供试液中加入稀盐酸，滤过，取滤液蒸干，加水溶解后，再供试验用；试验中，醋酸氧铀锌试液要加多过量；必要时，还需用玻璃棒摩擦试管壁，以增进黄色沉淀的析出。2．钾盐鉴别试液一焰色反应显紫色，但有少许钠盐混存时，须隔色玻璃透视，方能识别。原理钾的火焰光谱在可见光区有766.49nm、769.90nm与404.4nm几条谱线，其中以766.49nm与769.90nm两条谱线最强。由于人眼在此波长附近敏感度较差，故钾盐的燃烧火焰显紫色。如有钠盐混存，因钠焰敏捷度很高，需透过蓝色钴玻璃将钠焰黄色滤去，此时火焰显粉红色。鉴别试验二取供试品，加热炽灼，除去也许具有的铵盐，放冷后，加水溶解，再加0.1%四苯硼钠溶液与醋酸，即生成白色沉淀。原理其反应式为：若有NH4+存在，显相似反应，故必须预先加热炽灼除去，以免干扰试验成果的识别。3．铵盐鉴别试验一取供试品，加过量氢氧化钠试液后，加热，即分解，发生氨臭；遇湿润的红色石蕊试纸，能使之变蓝，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。原理其反应式为：试验原理其反应式为：4．钙盐鉴别试验一焰色反应显砖红色（622nm）。鉴别试验二取供试品溶液（1→20），加甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至呈酸性，加草酸铵试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀不溶于醋酸，但可溶于盐酸。试验原理其反应式为：（白色）5．镁盐鉴别试验一取供试品溶液，加氨试液，即生成白色沉淀；滴加氯化铵试液，沉淀溶解；再加磷酸氢二钠试液1滴，振摇，即生成白色沉淀。沉淀在氨试液中不溶。试验原理其反应式为：6，锂盐鉴别试验一焰色试验显黄绿色（553.56nm，500nm），通过绿色玻璃透视，火焰显蓝色（488nm）。鉴别试验二取供试品溶液，加稀硫酸，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。7，锶盐鉴别试验一取供试品溶液，加氢氧化钠试液碱化后，加入碳酸钠试液，煮沸，即生成白色沉淀（Li2O）；分离，沉淀能在氯化铵试液中溶解(NH3)。鉴别试验二焰色试验显胭脂红色。（670.78nm）鉴别试验三取供试品适量，加入稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液，不生成沉淀（与锶盐区别）试验原理锂盐和稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液不发生沉淀反应，而锶盐则相反，以此可区别锂盐和锶盐。8．铁盐（1）亚铁盐：鉴别试验一取供试品溶液，加铁氰化钾试液，即生成深蓝色沉淀，分离，沉淀在稀盐酸中不溶，但加氢氧化钠试液，即分解成棕色沉淀。试验原理其反应式为：（深蓝色藤氏蓝）（棕色）试验原理其反应式为：(深红色)鉴别试验一取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成深蓝色沉淀，分离，沉淀在稀盐酸中不溶，但加氢氧化钠试液，即分解成棕色沉淀。试验原理其反应式为：（深蓝色普鲁士蓝）试验原理其反应式为：（血红色）本试验一般应在盐酸溶液中进行；不能用硝酸，因硝酸中也许具有亚硝酸，干扰试验成果。（红色）9，汞盐（1）亚汞盐鉴别试验一取供试品，加氨试液或氢氧化钠试液，即变为黑色。试验原理其反应式为：（黑色）（黑色）试验原理其反应式为：（黄色）（黑色）鉴别试验一取供试品溶液，加氢氧化钠试液，即生成黄色沉淀(HgO)。鉴别试验二取供试品的中性溶液，加碘化钾试液，即生成猩红色沉淀，能在过量碘化钾试液中溶解；再以氢氧化钠碱化，加铵盐即生成红棕色沉淀。试验原理其反应式为：（猩红色）10,银盐鉴别试验一取供试品溶液，加稀盐酸，即生成凝乳状沉淀，分离，沉淀能在氨试液中溶解，加硝酸沉淀又重新出现。试验原理其反应式为：铬酸银沉淀能溶于硝酸中，也可和氨试液作用生成[Ag(NH3)2]+而溶解，但不溶于酸性较弱的醋酸中。11．铜盐鉴别试验一取供试品溶液，滴加氨试液，即生成淡蓝色沉淀，再加过量氨试液，沉淀即溶解，生成深蓝色溶液。试验原理其反应式为：试验原理其反应式为：（红棕色）12，铋盐鉴别试验一取供试品溶液，加碘化钾试液，即生成红棕色溶液或暗棕色沉淀，分离，沉淀能在过量碘化钾试液中溶解成黄棕色的溶液，再加水稀释，又生成橙色沉淀。试验原理其反应式为：铋盐量少时，则形成红棕色溶液。（红棕色溶液）加水稀释，即形成橙色的碘化氧铋沉淀。（橙色）如铋盐浓度较小时，这一反应现象不明显。鉴别试验二取供试品溶液，用稀硫酸酸化，加10%硫脲溶液，即显深黄色。试验原理铋盐和硫脲在酸性条件下，具有尤其敏捷的颜色反应（1），其颜色取决于生成沉淀的构成，沉淀的构成取决于反应的条件，Bi3+与SC(NH2)2的比例为1∶1时为黄褐色；1∶2时为黄色；1∶3时为黄褐色。硫脲和多数金属离子都可发生颜色反应。13．锌盐鉴别试验一取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成白色沉淀，分离，沉淀在稀盐酸中不溶解。试验原理其反应式为：（白色）亚铁氰化钾试剂过量时则生成溶解度更小的亚铁氰化锌钾白色沉淀。（白色）沉淀不溶于稀酸或氨试液，但可溶于强碱。鉴别试验二取供试品溶液，以稀硫酸酸化，加0.1%硫酸铜试液1滴及硫氰酸汞铵试液数滴，即生成紫色沉淀。试验原理锌盐和硫氰酸汞铵于酸性条件下反应，生成白色硫氰酸汞锌沉淀，当有铜盐存在时，则生成混晶而显色。若[Zn2+]/[Cu2+]不一样，则所产生沉淀的颜色也不一样。14．锑盐鉴别试验一供试品溶液，加醋酸成酸性后，置水浴上加热，趁热加硫代硫酸钠试液数滴，逐渐生成橙红色沉淀。试验原理其反应式为：（橙红色）酸化溶液时，可用盐酸，然后再加水稀释至恰有白色沉淀浑浊发生（SbOCl），即为所需酸度。由于不易控制，因此一般采用醋酸。鉴别试验二取供试品溶液，加盐酸成酸性后，通硫化氢气，即生成橙色沉淀，分离，沉淀在硫化铵试液或硫化钠试液中溶解。试验原理其反应式为：（橙色）（橙色）沉淀可和硫化铵或硫化钠作用，生成硫锑酸盐[SbS4]3-和亚硫锑酸盐[SbS3]3-而溶解。其反应式为：15．铝盐鉴别试验一取供试品溶液，加氢氧化钠试液，即生成白色胶状氢氧化铝沉淀；分离，沉淀能溶于过量氢氧化钠试液中。试验原理其反应式为：（白色胶状）当pH值超过10时，则氢氧化铝沉淀溶解。鉴别试验二取供试品溶液，加氨试液至生成白色胶状沉淀，滴加茜素磺酸钠指示液数滴，沉淀即显樱红色。试验原理其反应式为：16．亚锡盐鉴别试验取供试品水溶液1滴，点于磷钼酸铵试纸上，试纸应显蓝色。试验原理亚锡盐和三氯化锑同样不仅能将可溶性的磷钼酸铵盐还原,并且也能使不溶性的磷钼酸盐还原,生成一种钼的低价氧化物的胶体分散混合物即钼蓝，其重要成分大概是2MoO3·Mo2O5。3、专属鉴别反应(specificidentificationtest)。药物的专属鉴别反应是证明某一种药物的根据.它是根据每一种药物化学构造的差异及其所引起的物理化学性质的不一样,选用某些特有的敏捷定性反应,鉴别药物的真伪。综上所述，一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学构造为根据，根据其相似的物理化学性质进行药物真伪的鉴别，以区别不一样类别的药物。而专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础上，运用多种药物的化学构造差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相似化学构造部分的各个药物单体，到达最终确证药物真伪的目的。一般鉴别反应:以某些类别药物的共同化学构造为根据,进行鉴别.以区别不一样类别的药物。专属鉴别反应:运用多种药物的化学构造差异，来鉴别药物，区别同类药物。三、鉴别措施化学鉴别：干法：火焰（盐类药物）；湿法光谱鉴别色谱鉴别生物学法规定：专属性强、再现性好、敏捷度高、操作简朴、迅速。化学鉴别法1、干法：将供试品加合适试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测此时所发生的特异现象。①焰色反应:运用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。取铂丝，用HCL湿后，取供试品在无色火焰中燃烧→特殊颜色。②加热分解:在合适的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。2、湿法：系指将供试品和试剂在合适的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。供试品试剂+溶剂→化学变化（颜色，沉淀，气体）(1)呈色反应鉴别法：系指供试品溶液中加入合适的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：1)三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基；2)异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类；3)茚三酮呈色反应---脂肪氨基；4)重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨基；5)氧化还原显色反应及其他颜色反应。（2）沉淀生成反应鉴别法：常用的此类反应有：１)与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不一样形式的沉淀；2)与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；3)其他沉淀反应。（3）荧光反应鉴别法：常用的荧光发射形式有如下类型：1)药物自身可在可见光下发射荧光；2)药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；3)药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；4)药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其他反应后，发射荧光。(4)气体生成反应鉴别法：1)大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；2)化学构造中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；3)含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。光谱鉴别法1、UV法原则品对照法；规定吸取波长法；规定吸取波长和对应的吸取度法；规定吸取波长和吸取系数法；规定吸取波长和吸取度比值法。2、IR法：红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别措施。原则图谱对照法：中国药典和BP对照品法：USP专属性很强，新药的鉴别。色谱法运用不一样物质在不一样色谱条件下，产生各自的特性色谱行为（Rf值或保留时间）进行鉴别试验。常用的措施有：1、TLC:Rf值（原则品与供试品）一致。在实际工作中，一般采用对照品（或原则品）比较法，规定供试品斑点的Rf值应与对照品斑点一致。2、HPLC：峰值tR一致（原则品与供试品）一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验。规定供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。含量测定措施为内标法时，可规定供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰保留时间与内标物峰的保留时间比值应相似。3、GC法：同上4、(PC)纸色谱法：分离效能低，分析时间长，以被TLC或其他色谱法所取代（正相分派色谱法）。生物学法运用微生物或试验动物进行鉴别的措施药物鉴别措施新动向1，仪器措施大大增长，尤其是红外光谱和高效液相色谱。2，制剂广泛采用红外法鉴别。3，鉴别条目简洁，选择专属的措施进行鉴别，平均每个品种收载2条左右。四、鉴别试验条件鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生的明显的易于察觉的特性变化为根据。在规定的条件下完毕。否则鉴别试验的成果是不可信的。影响鉴别反应的原因重要有：被测物浓度，试剂的用量、溶液的温度、pH、反应时间和共存的干扰物质等。（一）溶液的浓度。重要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。由于鉴别试验多采用观测沉淀、颜色或多种光学参数（、、A、等）的变化，来鉴定成果，而药物和有关试剂的浓度会直接影响上述的多种变化，必须严格规定溶液的浓度。观测沉淀,颜色或光学参数(入max,入min,A,E1%1cm)变化,鉴定成果。药物的浓度或试剂的浓度影响上述的条件变化。（二）溶液的温度:每升高10℃,反应速度升高2～4倍。（三）溶液的酸碱度许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下才能进行。溶液酸碱度的作用，在于能使各反应物有足够的浓度处在反应活化状态，使反应生成物处在稳定和易于观测的状态。H+,OH-条件,使反应处在稳定的状态。（四）干扰成分的存在。在鉴别试验中，如药物构造中的其他部分或药物制剂中的其他组分也可参与鉴别反应，产生干扰，应选择专属性更高的鉴别反应将其消除或将其分离,消除干扰成分的存在。（五）试验时间有机化合物的化学反应和无机化合物不一样，一般反应速度较慢，到达预期试验成果需要较长的时间。这是由于有机化合物是以共价键相结合，化学反应能否进行，依赖于共价键的断裂和新价键形成的难易，这些价键的更替需要一定的反应时间和条件。同步在化学反应过程中，有时存在着许多中间阶段，甚至需加入催化剂才能启动反应。因此，使鉴别反应完毕，需要一定期间。有机化合物:反应速度慢,加入催化剂。无机化合物:反应速度快。五、鉴别试验的敏捷度（一）反应敏捷度和空白试验在一定条件下能在尽量稀的溶液中观测出尽量少许的供试品.反应对这一规定所能满足的程度称为反应的敏捷度(sensitivity)。以两个互相有关的量来表达:最低检出量，最低检出浓度。最低检出量(minimumdetectalbequantity，又称检出限量)(以m表达)单位一般用μg表达。1μg=10-6g最低检出量愈小，反应愈敏捷。但最低检出量不能充足表达反应的敏捷度，由于没有阐明溶液的浓度。最低检出浓度(minimumdetectableconcentration，又称界线浓度)应用某一反应，在一定条件下，可以观测出供试品的最低浓度，常以1∶G(1∶V)来表达。G和V表达具有1g重某供试品的溶液的克(ml)数。最低检出量和最低检出浓度之间的关系用下式表达 ， ν表达所取供试液的最小体积(ml)G单位g/g。在选用敏捷度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂和非常洁净的器皿，才能保证鉴别试验的成果可靠性。为了消除试剂和器皿也许带来的影响，应同步进行空白试验（blanktest）以供对照。空白试验：在与供试品鉴别试验完全相似的条件下，除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行试验。反应的敏捷度与分析措施、观测方式、反应条件、人的观测能力等原因有关。（二）提高敏捷度的措施在实际工作中，常采用下列措施提高反应的敏捷度1、加入与水互不相溶的有机溶剂.浓集有色生成物，使有机溶剂中颜色变深，易于观测。2、改善观测措施例如，将目视观测溶液的颜色，改为可见