刘姝颍梅毒实验室检测工作概况和要求

梅毒实验室检测

工作概况和要求安徽省皮肤病防治所刘姝颖

2015年11月主要内容梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动监测性病病种梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣生殖器疱疹性病实验室在性病防治中的作用效果评价临床服务疫情监测科学研究实验室诊断第十一条省、市和县级疾病预防控制机构职责组织开展本行政区域性病实验室质量管理第十三条开展性病诊疗业务的医疗机构职责开展实验室检测质量控制5《性病防治管理办法》梅毒控制相关政策卫生部于2010年6月3日下发了关于《中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）》卫生部2011年2月12日下发《预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案》国务院2012年1月13日《中国预防控制艾滋病五年行动计划（21011-2015年）》梅毒控制主要措施：提高梅毒实验室检测质量加强梅毒筛查力度主要内容梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动常用梅毒实验室检测方法病原学检测血清学检测病原学检测原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：（1）暗视显微镜检查

（2）镀银染色法（3）核酸检测意义：螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。

梅毒血清学检测方法(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验

（特异性梅毒抗体）两类方法。非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)

（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等

非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，RPR/TRUST试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。一期梅毒1年后转为阴性二期梅毒2年后转为阴性。晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；（2）结合梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒现症感染和既往感染VDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。梅毒病期敏感性(%)特异性(%)一期86（77-99）-二期100隐性98(95-100)（一般滴度>1:8，但不排除<1:8）晚期73非梅毒-98(93-99)梅毒螺旋体抗原血清学试验原理抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)

梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)

梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光免疫分析法（CLIA）

梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)

荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验，排除RPR假阳性。不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。不能作为疗效观察的指标。梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）

17试验结果参考结果解释*梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性阳性可能为现症梅毒阴性阳性非梅毒螺旋体血清试验假阳性阳性阴性临床治愈的早期梅毒（既往感染者）或极早期梅毒阴性阴性排除梅毒感染或极早期梅毒*该结果解释不适用于胎传梅毒、神经梅毒梅毒IgM抗体（TP-IgM）IgM抗体的产生是感染后的早期体液免疫应答反应。IgM分子比较大，所以不能通过胎盘屏障。因此若在新生儿血中检测到IgM抗体是先天梅毒的诊断依据。目前已有商品化的TP-IgM检测试剂盒，检查到IgM抗体可作为对先天梅毒临床诊断的依据，其特异性较高，但敏感性较低。因此，IgM阴性，不能排除先天梅毒感染。18

梅毒实验室检测基本策略--

血清学检测19非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验排除试验假阳性确证梅毒螺旋体现症感染排除治愈的既往感染者确证梅毒螺旋体现症感染？RPR：初筛试验TPPA：确证试验2021阳性主要内容梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室检测基本要求一、人员

检测技术人员需经过上岗培训。接受上岗培训内容应包括：梅毒检测相关基础知识、梅毒实验室检测技术基本实验操作要求、结果解读及临床意义、质量保证与生物安全等。二、试剂

常规血清学检测应采用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂。因不同厂家生产的同一种试剂的敏感性和特异性存在一定的差异，建议选择临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。所有试剂须严格按要求妥善保存，并控制在有效期内使用。23梅毒实验室检测基本要求三、设备及环境

实验室应根据开展的方法配备基本的仪器设备24检测方法仪器设备暗视野梅毒螺旋体检测镀银染色梅毒螺旋体检测快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)暗视野显微镜普通光学显微镜水平旋转仪甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）水平旋转仪梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)震荡仪酶联免疫吸附试验（ELISA）酶标仪、洗板机梅毒快速检测(RT)无需特殊仪器不同方法所需主要仪器设备

2014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果

(非梅毒螺旋体抗原血清学试验)

试剂简称敏感性(%)特异性(%)上海科华97.7899.55

北京金豪97.7899.55

上海荣盛96.67100.00

厦门英科95.5698.18

北京万泰91.1198.64

2014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果

(梅毒螺旋体抗原血清学试验-ELISA)

试剂简称敏感性(%)特异性(%)

北京华大100.00100.00

北京万泰100.00100.00

北京现代100.00100.00北京金豪100.0099.48珠海丽珠100.0098.95

潍坊三维100.0083.25

上海科华99.1100.00

北京科卫99.1100.00

厦门英科98.29100.00北京科美(化学发光)

100.00100.00

2014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果

(梅毒螺旋体抗原血清学试验-免疫层析法)

试剂简称敏感性(%)特异性(%)

杭州艾博99.15100.00

北京蓝十字99.7492.15Determin99.1598.95广州万孚98.29100.00

厦门英科98.2998.43北京万泰97.7490.58主要内容梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动现场核查发现的不足与问题使用不符合要求的实验室检测方法进行诊断实验室开展项目不全，未掌握各种试验的适应症，不具备诊断条件部分医院无开展TRUST试验的梅毒水平旋转仪，或无开展TPPA的微量振荡器实验室检测方法标注有误或不规范现场核查发现的不足与问题部分实验室缺乏原始记录或登记不规范而无法查找核实报告病例的相关数据试剂来源多，质量难以保障多数医疗机构对仪器未定期校准和记录部分检验人员培训不足，操作台无标准作业指导书实验室检验人员与临床医生、疫情管理人员沟通不够主要建议制定性病实验室检测的作业指导书，放置在操作台加强仪器设备的校准与维护，确保正确的运转对检验人员开展培训,加强对性病检测方法和临床结果解释的培训规范实验室检测方法规范完善检测结果信息登记检测结果登记示例主要内容梅毒实验室检测概述现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动开展现况申请流程梅毒实验室室间质评活动《关于开展梅毒血清学实验室室间质量评价工作的通知》(卫办疾控〔2011〕186号)要求：自2011年始在全省范围内开展梅毒血清学实验室室间质量评价，各地认真组织辖区内县（区）级以上医疗机构参加全省统一组织的每年两次的室间质评,督促室间质评不合格的医疗保健机构实验室进行限期整改梅毒实验室室间质评活动具体参评项目TP（非）、TP（特TPPA）、TP（特ELISA）、TP(ELISA-S/CO值）、TP(特除ELISA、TPPA）。

省临床检验中心（）负责统一发放全省质控标本（上下半年各一次）省皮肤病防治所负责结果的收集、分析、汇总、上报及反馈工作。首次室间质评活动2011年11月首次梅毒血清学室间质评，全省共129家二级以上医疗机构参加梅毒血清学室间质评活动，81家合格，合格率62.79%2011年我省五个国家级性病监测点的11家医疗机构参加全国性病实验室室间质量评价活动，7家合格，合格率63.63%2014年室间质评全省梅毒实验室室间质评,219家二级以上医疗机构参加，191家医疗机构合格,合格率87.21%。国家级性病监测点的十二家医疗机构参加全国性病实验室室间质量评价，参与率为100%，梅毒合格率91.67%、衣原体合格率100%，淋球菌83.33%2014年我省梅毒室间质评参加率市机构数参加数参加率（%）市机构数参加数参加率（%）合肥363391.67六安181372.22芜湖171694.12黄山171270.50亳州111090.90淮南13969.23安庆181688.89滁州161168.75铜陵7685.71蚌埠191368.42宿州151280.00淮北8562.50宣城141178.57马鞍山10660.00池州9777.78阜阳201155.002014年参加率指标：85%85%2014年我省梅毒室间质评合格率市参加机构数合格机构数（两项）合格率（%）市参加机构数合格机构数（两项）合格率（%）芜湖1616100亳州10990.00宣城1111100淮南9888.89滁州1111100池州7685.71马鞍山66100淮北5480.00铜陵66100蚌埠131076.92宿州121191.67安庆1