苍耳子的薄层层析研究

苍耳子的薄层层析研究

苍耳子是科植物的苍耳。它是干燥和成熟的金色雪莲。其主要成分包括脂肪油、挥发油、苍耳子苷、树脂、碱、铜和蛋白质。苍耳子的薄层层析鉴别,多数以芦丁为对照品,以硅胶G为吸附剂,以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂,而系统的薄层层析鉴别方法,则未见报道。我们在承担2005年版《中国药典》苍耳子药材的鉴别起草任务中,对10余批不同产地的苍耳子,进行了系统的薄层层析鉴别。1实验部分1.1药品、检验苍耳子均鉴定为苍耳子XanthiumsibricumPatr.的干燥成熟带总苞的果实。样品来源于成都市售样品及江西样品。按性状特征分为新货(黄绿色、外形饱满)和3种陈货(黄棕色、外形饱满;黄棕色、外形瘦小;黄棕色、外形瘦小、带密生的钩状刺)。芦丁(中国药品生物制品检定所,批号:100080-200306);硅胶G、硅胶GF254(青岛海洋化工厂);预制板均为含0.3%CMC-Na的手工制板;其余试剂为分析纯。1.2包装侵权1.2.1对正丁醇-冰醋酸-水的脱除效果取苍耳子5批样品中粉各2g,加甲醇25ml,加热回流20min,放冷,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液。另取芦丁对照品,加甲醇制成1mg·ml-1的溶液,作为对照品溶液。分别取供试品和对照品溶液各5μl,点于同一硅胶GF254薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)的上层液为展开剂,展距10cm,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏后,分别置日光及紫外光灯(254nm)下检视。苍耳子与芦丁对照品均有相同颜色的斑点。吸附剂换用硅胶G后,在日光及紫外灯(365nm)下,斑点图谱也相似。无论用硅胶G还是用硅胶GF254为吸附剂,在紫外光灯下,苍耳子与芦丁相应位置上的斑点均稍有差异(图1A、B)。1.2.2苍耳子药材的荧光检出限分别取“1.2.1”项下的供试品和对照品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6∶2∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏后,日光下检视。苍耳子药材上检出3个相对应的橙黄色斑点,在与芦丁相应的位置上,无相同颜色的斑点(图1C)。分别取“1.2.1”项下供试品和对照品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(3∶10∶2∶2∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸气中熏后,日光下检视。苍耳子药材检出3个明显的橙黄色斑点,在与芦丁相应的位置上,无相同颜色的斑点(图1D)。取“1.2.1”项下的供试品和对照品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(16∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸气中薰后,日光下检视。苍耳子药材可检出3个明显的橙黄色斑点,在与芦丁相应的位置上,无相同颜色的斑点(图1E)。取“1.2.1”项下的供试品和对照品溶液各5μl,点于同一以1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6∶2∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏后,分别置日光及紫外光灯(365nm、254nm)下检视。日光下,苍耳子药材检出3个明显的橙黄色斑点(图1F)。紫外光灯下,苍耳子均检出两个黄绿色和两个蓝色荧光主斑点(图1G、H)。取“1.2.1”项下的供试品和对照品溶液各5μl,点于同一以1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶2.5∶1∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏后,日光下检视。苍耳子药材可检出3个明显的橙黄色的斑点,斑点间距较图F、G、H分得开一些(图1I)。1.2.3样品溶液的制备分别取苍耳子5批样品的中粉2g,加10%氢氧化钠溶液50ml,加热回流30min,放冷,滤过,滤液用乙酸乙酯提取(50ml×2),合并乙酸乙酯液,用水洗至中性,合并乙酸乙酯液并浓缩至约2ml,作为供试品溶液。分别吸取供试品溶液各10μl,点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(16∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸气中熏后,日光下检视。苍耳子药材检出1个相同的橙黄色斑点(图1J)。1.2.4环己烷-乙酸乙酯物系对苍耳子药材荧光中心的影响分别取苍耳子5批样品的中粉5g,加乙醚50ml,加热回流1h,放冷,滤过,滤液低温挥至约2ml,作为供试品溶液。分别吸取供试品溶液各10μl,点于同一硅胶G薄层板上,分别以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.2)和正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。前者可检出苍耳子药材3个明显的紫红色和1个蓝色荧光斑点。后者可检出苍耳子药材2个明显的紫红色和1个蓝色荧光斑点(图1K、L)。2苍耳子的鉴别“1.2.1”项下的方法为苍耳子常用的薄层层析法,能检出苍耳子、芦丁对应斑点,但展距稍高,并且紫外光灯下苍耳子与芦丁相应位置上的斑点有一定的差异。“1.2.2”项下的层析图谱中,苍耳子的图谱中均无芦丁对照品斑点,而苍耳子相应位置上有相同颜色的斑点,说明苍耳子中无芦丁成分。我们至今未查到苍耳子含芦丁成分的报道。“1.2.1”项方法中检出的应为与芦丁相似成分的斑点。所以,许多文章中以芦丁作为鉴别苍耳子的对照品不妥。“1.2.3”项下方法经碱液回流提取并萃取后,去除了苍耳子中大量的其他成分,检出1个明显清楚的橙黄色斑点,适用