布鲁菌病的危害与防控

布鲁菌病的危害与防控

感染柳绿菌病是由柳绿菌（alicela）感染身体，并引起感染和转化的人类疾病。该病的分布比较广泛,世界范围性威胁人类健康和影响畜牧业发展,该病是世界动物卫生组织(OIE)规定必须强制报告的疫病。1布鲁菌的分离和传播布鲁菌是一种革兰氏阴性、细胞内寄生菌,能引起人和多种动物的急性和慢性感染,被感染的人和动物表现流产及不孕不育等症状。根据致病性的不同和宿主特异性,将布鲁菌分为6个种,分别是马耳他布鲁菌、流产布鲁菌、猪布鲁菌、绵羊布鲁菌、犬布鲁菌和沙林鼠布鲁菌。布鲁菌感染的宿主极广,家畜中主要是牛、羊、猪最易感,传染源是病畜和阳性带菌畜。布鲁菌病主要由病畜及其流产胎儿、乳和乳制品、肉和肉制品、皮毛等病源进行传播。动物布鲁菌病主要由羊布鲁菌、牛布鲁菌和猪布鲁菌感染羊、牛和猪等动物,呈急性或慢性经过。另外,病畜和阳性带菌畜是人布鲁菌的主要传染来源。世界动物卫生组织(OIE)将布鲁菌列为B类重要传染病,我国也将布鲁菌病列为乙类传染病。2布鲁菌病的检疫为确诊动物布鲁菌病,首先要尽可能分离病原,鉴定生物型,但该方法操作复杂,所用时间长,而且阳性检出率低。因此,布鲁菌病最常用的检疫技术是血清学诊断。目前,我国常用的血清学诊断方法有琥红平板凝集试验、试管凝集试验、补体结合试验和全乳环状试验。随着分子生物学的发展,近年来又发展起来一些新的诊断方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA)和PCR检测方法。2.1细菌的分离2.1.1氧合并剂对37温箱及信箱的影响采集病牛的全血、牛奶、流产胎衣各2份,分别接种于胰蛋白胨培养基培养。1份在37℃温箱中需氧培养,另1份在37℃含5%~10%CO2烛缸中培养,分别在第2天、第3天、第4天、第5天进行观察,以后每隔3~4d观察1次,共3周。如发现有可疑菌落,即作初步鉴定,当确认为布鲁菌,再作进一步鉴定。2.1.2不同的胰蛋白培养基将流产胎衣磨碎制成10%乳剂,每只豚鼠股内侧皮下注射2mL,接种豚鼠4只,饲养31d处死,取豚鼠全血、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结、肝、脾、肺等各2份,分别接种于特制的胰蛋白胨培养基,分离布鲁菌。方法同上。同时,可以分离血清,进行血清学检查。2.2血液清学2.2.1鲁菌病流行病学初筛因检测速度较快,琥红平板凝集试验常用于布鲁菌的田间筛选,成为一种畜间布鲁菌病检疫和人间布鲁菌病流行病学快速初筛的检测方法。该方法是将0.03mL血清加在0.03mL琥红抗原里,混匀后,在阴、阳性血清对照成立的条件下,对被检血清进行判定。待检血清在4min中内无凝集现象,呈均匀粉红色者,判为阴性(-),出现肉眼可见凝集现象者,判为阳性(+)。2.2.2主管静处理方法2.2.3全乳现状内涵的判定采乳样时,应将母畜的乳房用温水洗净、擦干,然后将乳汁挤入洁净的器皿中,采集新鲜的乳样。方法是将1mL乳样置于灭菌凝集试管内,将1滴充分振荡混合均匀的全乳环状抗原加入乳样中,充分混匀后,于37~38℃水浴60min。然后取出试管,立即进行判定:强阳性(+++),乳脂层呈红色环,乳柱呈白色;阳性(++),乳脂层的环带呈红色,但不显著,乳柱略带颜色;弱阳性(+),乳脂层的环带颜色较浅,但比乳柱颜色略深;阴性(-),乳柱上层无任何变化,乳柱颜色均匀。2.2.4试验方法及标准补体结合试验准确性高,容易判定,对抗原纯化要求不严格,因而普遍用于传染病的诊断。但该试验的不足之处是操作繁琐,对操作人员的要求比较严格,对所用试剂的准备和量化要求较严。试验方法及判定标准参照《布氏杆菌补体结合试验操作规程》SN/T1089-2002标准进行。该试验所需试剂有绵羊红细胞悬液、阴性对照血清、阳性对照血清、溶血素、抗原、补体等。判断标准是0~40%溶血判为阳性反应;50%~90%溶血判为可疑反应;100%溶血判为阴性反应。牛、羊和猪补体结合反应判定标准均相同。2.2.5elisa法ELISA试验操作简单,目前已应用于国际贸易牛的布鲁菌的检测。这种方法不但可用于血清学诊断,还可用于乳汁检查。应用ELISA方法检测畜间布鲁菌的报道相当多,表明这是一种公认的诊断方法。但ELISA诊断试剂盒的价格较为昂贵,很难在基层实验室里规模化使用。2.3动物间布鲁菌的pcr扩增检测方法3布鲁菌病防控项目《国家中长期动物疫病防治规划(2011-2020)》将布鲁菌病的防控纳入重点开展项目。布鲁菌病的防控工作要坚持“预防为主”的方针,采取以监测、检疫、扑杀为主的综合性防控措施。3.1防同时注射口腔灌服猪型布鲁菌S2菌苗由中国兽药监察所于1964年从猪体选育自然弱毒株研制而成,是一株减弱的布鲁菌活菌苗。该疫苗已广泛应用于控制猪、牛、绵羊、山羊的布鲁菌病,对绵羊、山羊的保护力较强,其优点是适于灌服免疫,亦可作肌肉注射。基层一般采用口腔灌服免疫,使用疫苗的时候,用蒸馏水稀释到所需要的剂量,然后用注射器经口腔灌服,这种方法既方便又简单。羊的免疫期一般为3年,牛为2年,猪一般为1年。猪型布鲁菌S2菌苗对人具有一定的残余毒力,因此,动物防疫人员在工作过程中应注意自身防护,穿配防护服、手套、口罩和帽子。1969年,哈尔滨兽医研究所将马耳他布鲁菌生物1型HZ强毒株经鸡体187次传代减毒,育成羊布鲁菌5号菌苗(M5)。羊布鲁菌5号菌苗用于预防绵羊、山羊、鹿和牛的布鲁菌病。对牛、羊的免疫期可达3年以上,而且除皮下接种外,还可采用肌肉注射、点眼、滴鼻、口服、气雾免疫接种,其效果基本一致。其缺点是可引起怀孕动物流产。M5菌苗在豚鼠连续传代后菌株毒力可回升。牛布鲁菌19号苗是由Buck从牛奶中分离得到的,该菌原来毒力很强,在室温保存多年后,其毒力自行减弱,成为一株毒力相对稳定的弱毒菌株,20世纪40年代后,逐渐在各国推广使用。1982年,M-111疫苗由中国兽药监察所研制,专供绵羊与山羊免疫,该疫苗可注射,也可灌服免疫,免疫后不产生常规血清学反应,在临床诊断上可与自然感染相区别。M-111疫苗的免疫期一般为1年。3.2其他预防和处理3.2.1羊、牛、牛的免疫抗体一类和二类地区内各种家畜均属被净化(检疫)对象。通常羊于4月龄、牛于8月龄以上检疫为宜,一般在每年秋季集中灌服免疫一次,灌服疫苗后的动物也应在免疫后1~2个月进行免疫抗体检测。每年夏季,对所有易感动物进行检疫。3.2.2消毒处理保鲜对于检出的阳性牲畜,一律要扑杀,扑杀后进行无害化处理,并对原来的饲养场所进行喷洒消毒处理。患病家畜的流产胎儿、胎衣等应在指定地点深埋或焚烧,不能随意丢弃,以免污染环境引起布鲁菌二次传播;来自疫区的皮毛在收购地点进行消毒处理后,方可运出;奶和奶制品应加热煮沸后食用。3.2.3布鲁菌病感染检测在我国,羊的饲养主要集中在北方地区,可实施自繁自养的繁育体系。每年对所养的牲畜进行检疫,检测布鲁菌病感染情况。如需引进新牲畜时,先应该先检疫,确定无布鲁菌病和其他传染病后再引进。4布鲁菌病的血清学检测布鲁菌病属于人畜共患病,因此,布鲁菌病的防控在公共卫生方面有着重要意义,也越来越受到人们的关注。目前,我国检疫、诊断布鲁菌病主要采用的血清学方法有琥红平板凝集、试管凝集和补体结合试验。但血清学方法敏感性和特异性不高,容易出现假阳性和假阴性,此外,血清学方法不能区分免疫抗体和感染抗体,这些弊端对布鲁菌病的研究有一定影响。而应用新的分子生物学方法,研究区分免疫抗体和感染抗体的检测方法,可加快对布鲁菌病的研究。在布鲁菌病流行的一类地区和二类地区,应及时采取先检疫后免疫的防控措施,大力发展自繁自养的繁育体系,为畜牧业的发展提供可靠保障。采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等病料,制成抹片,用柯兹罗夫斯基染色法染色或者沙黄—美蓝鉴别染色法染色,镜检,布鲁菌为红色球杆状小杆菌,而其他菌为蓝色。该方法虽然可以直接检出病原菌,但病原菌的检出率较低。血清学检测方法一直以来是诊断布鲁菌病的最常用方法,该方法可以检测乳汁中或者血清中的布鲁菌所产生的抗体。最常用的血清学方法包括平板凝集法、试管凝集法、全乳环状试验和补体结合试验。随着实验技术的发展,近年来出现的ELISA方法也为布鲁菌病的诊断提供了方便。试管凝集法是我国布鲁菌病诊断的法定正式试验,因其敏感性较高,所以可用于布鲁菌病的早期诊断,试验方法及判定标准参照国家标准GB/T18646-2002进行。结果判断参照比浊管,按各试管上层液体清亮度判读。牛、马、鹿和骆驼按照1∶100比例稀释的血清,猪、山羊、绵羊和狗按照1∶50比例稀释的血清,出现“++”以上凝集现象的,判定为阳性。牛、马、鹿、骆驼按照1∶50比例稀释的血清,猪、山羊、绵羊、狗按照1∶25稀释的血清,出现“++”以上凝集现象时,该血清判定为可疑血清。可疑反应家畜在1个月后重检,如果仍为可疑,则判为阳性。近年来,随着分子生物学技术的发展,PCR扩增等分子生物学技术被用于畜间布鲁菌病的检测,国外学者在该领域做了较多的工作。1994年,Bricker和Halling针对牛、羊、猪、绵羊布鲁菌设计特异性引物,应用PCR技术扩增不同种的布鲁菌保守重复基因IS711,来区别布鲁菌的种。国内采用PCR技术检测牛布鲁菌的报道较少,2005年,中国农业科学院兰州兽医研究所的邱昌庆等,首次报道了以牛乳作为检样的奶牛布鲁菌病病原套式PCR检测技术。应用PCR技术检测畜间布鲁菌虽然准确、快速,但要求操作人员具备一定的专业技术,与