第三章+药物的杂质检查

第三章药物的杂质检查药物分析Contents一般杂质的检查3药物杂质与限量1杂质检查方法2特殊杂质的检查4第一节药物的杂质与限量一、药物的杂质与纯度1.纯度（Purities）药物的纯净程度2.杂质

(Impurities)

药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。简言之:任何影响药品纯度的物质。3.药物纯度与试剂纯度共同点——均规定所含杂质的种类和限量.不同点①药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑,只有合格品和不合格品.

②试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用.化学试剂——一般分为4个等级〔基准试剂、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯和化学纯〕化学试剂不能代替药品！二、杂质的来源杂质的来源生产过程储藏过程合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽制剂过程试剂、溶剂、还原剂残留异构体、多晶体使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化生产过程中引入杂质例子:双氯非那胺主要用于治疗各型青光眼（开角型、闭角型及继发性青光眼），尤其适用于对乙酰唑胺有耐药性的患者。7例：阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得++乙酰化不完全水杨酸(杂质)+8贮藏过程中引入的杂质例子麻醉乙醚在日光、空气及湿气作用下,易氧化分解为醛及有毒的过氧化物。CH3CH2OCH2CH3

CH3CHO+CH3CH(OH)-O-O-CH(OH)CH3

（二羟乙基过氧化物）药典规定:起封后24小时内使用易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等生产、贮藏过程中都引入的杂质例子:抗甲状腺药卡比马唑自然界分布广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，它们含量的高低与生产工艺水平密切相关。所以也常称为信号杂质。是指在特定的药物生产和贮藏过程中引入的杂质，也称有关物质。这类杂质随药物不同则不同。三、杂质的种类如重金属、砷盐一般无毒，但其含量的多少可反映出药物的纯度情况。四、杂质的限量(LimitTest)药物中所含杂质的最大允许量。通常用百分之几（%）或百万分之几(ppm)

三种检查方法比较法灵敏度法标准对照法限量检查法操作:平行试验

比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定。管2（对照管）管1（样品管）

取限度量被检杂质的对照溶液,与一定量供试品溶液在相同条件下处理,比较反应结果,判断供试液中所含杂质限度是否符合规定。对照法注意单位统一！限量计算公式

若用ppm表示杂质限量则：注意:①单位是否统一②供试品是否有稀释③表示方法%或ppm

在供试品溶液中加入试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应.灵敏度法比较法

取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质的参数,与规定限量比较,判断供试品中杂质限量.示例一茶苯海明中氯化物检查取本品0.30g

置200ml量瓶中，加水50ml、氨试液3ml和10%硝酸铵溶液6ml，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液25ml置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶液(10μg

Cl-/ml)1.5

ml制成的对照液比较，求氯化物的限量。C=10μg/mlV=1.5mlS=?示例二

肾上腺素中酮体的检查取本品0.2g,置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9-2000)溶解并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过0.05，酮体的百分吸收系数为435，求酮体的限量V样品=100mlC酮体=?S样品=0.2g示例三

对乙酰氨基酚中氯化物的检查取对乙酰氨基酚2.0g，加水100mL加热溶解后冷却，滤过，取滤液25mL，依法检查氯化物，发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0mL（每1mL相当于10g的Cl）制成的对照液比较，不得更浓。求氯化物的限量是多少？示例四

谷氨酸钠中重金属的检查取本品1.0g，加水23mL溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5)2mL，依法检查，与标准铅溶液（10gPb/1mL）所呈颜色比较，不得更深，重金属限量为百万分之十，求所取标准铅溶液多少mL？习题一磷酸可待因中吗啡的检查取本品0.10g,加盐酸溶液(9-1000)使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15min，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡试液[取无水吗啡2.0mg，加盐酸溶液(9-1000)使溶解成100ml]5.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量是多少？习题二苯巴比妥钠中重金属的检查取本品2.0g,加水32ml，溶解后缓缓加入1mol/L盐酸溶液8ml，充分振摇，静置数分钟，滤过，取滤液20ml，加酚酞指示液1滴与氨试液恰显粉红色，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量成25ml，依法检查，含重金属不得超过10ppm。试计算应取得标准铅溶液(每1ml相当于10μgPb)的体积。

第二节杂质的检查方法一、杂质的研究规范（一）有机杂质在质量标准中的项目名称

1.以杂质的名称作为项目名称25

中国药典（2010）收载硝苯地平有关物质中杂质Ⅰ、杂质Ⅱ262.以某类杂质的总称作为项目名称杂质结构不明确，如硝酸毛果芸香碱中的“其他生物碱”3.以检测方法作为项目名称杂质结构未知，也没有具体类别；如杂质吸光度、溶液透光率27(二）杂质检查项目的确定由质量研究和稳定性研究中检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。根据其起始原料、生产工艺及稳定性情况确定。

28（三）杂质限度的确定293031二、杂质的常用检查法（二）色谱方法（一）化学方法（三）光谱方法（四）其他方法1.显色反应：杂质与一定试剂反应产生颜色

生产原料杀鳗剂、灭螺剂重氮化-偶合反应芳伯氨基2.沉淀反应：杂质与一定试剂反应产生沉淀

盐酸肼屈嗪中游离肼的检查:生成沉淀治疗高血压、心力衰竭。水杨醛腙3.生成气体或者滴定法生成气体:NH3滴定法:如硫酸亚铁中的高铁盐检查碘的显色36

1.薄层色谱法(TLC)2.高效液相色谱法(HPLC)3.气相色谱法(GC)色谱法是杂质检查的首选方法37

根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同(Rf值的差异),加以分离和检查。1.薄层色谱法(TLC)38我国药典2005年版增加了TLC系统适用性试验。1.检测灵敏度：对照品溶液稀释若干倍，应显示清晰的斑点。2.比移值：供试品主斑点与对照品溶液主斑点。3.分离效能39薄层色谱法应用(1)杂质对照法:取供试品溶液和一定浓度杂质对照品溶液，分别点样于同一薄层板上展开，进行斑点定位。将杂质斑点进行对应比较判断。(2)供试品溶液自身稀释法:将一定浓度供试品溶液进行稀释并作为对照溶液，然后与供试品溶液在同一板上展开比较。(3)杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法。(4)对照药物法:采用与供试品相同药物作为对照，比较斑点、颜色。并进行对比控制。40

根据供试品与杂质的对照品保留时间相同测定各杂质峰面积.2.高效液相色谱法(HPLC)411.外标法（有对照品杂质）2.加校正因子的主成分自身对照法3.不加校正因子的主成分自身对照法（无杂质对照品）4.峰面积归一化法（粗略测量杂质的含量）423.气相色谱法(GC)检查方法:同高效液相色谱法.——用于药物中挥发性杂质的检查,如药物中残留溶剂、农药残留量等.标准溶液加入法（P110）434.毛细管电泳法检查方法:同高效液相色谱法.——用于酶类药物中酶类杂质的检查。441.可见-紫外分光光度法

2.红外分光光度法

3.原子吸收分光光度法45紫外分光光度法——利用药物和待检杂质对光选择吸收性质的差异进行.46

例：肾上腺素中肾上腺酮的检查

规定：A310nm≯0.0547红外分光光度法

主要用于药物中无效或低效晶型的检查。某些多晶型药物由于其晶型结构不同，一些化学键的键长、键角等发生不同程度的变化，从而导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异。48

在程序控制温度的情况下,测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法.1.1热重分析法

1.2差示热分析法

1.3差示扫描量热法1.热分析法1.热重分析法(TGA)供试品TGA热重曲线WW结晶水失重台阶应用热天平在程序控温的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术,可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率。

特点分析样品用量少,适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重测定.灵敏度高,可达1

g以下

测定速度快可用于判断结晶水或吸附水,并推断结晶水含量。2.差热分析法(DTA)在程序控制温度下，测量供试品和惰性参比物(常用石英砂、煅制MgO)之间的温度差与温度(或时间)关系的热分析技术T△T供试品发生吸热反应温度低于参比物质从而产生吸热峰参比物质供试品发生放热反应温度高于参比物质从而产生放热峰DTA用途(1)熔点测定熔程T△T=0(2)

定性和纯度检定——根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别T供试品对照品ΔG1ΔG2ΔG310008006004002000WT1T2T3398838635478134226T(℃)草酸钙(CaC2O4·H2O)的热重曲线在温度T1时CaC2O4·H2OCaC2O4+H2O在温度T2时CaC2O4CaCO3+CO在温度T3时CaCO3CaO+CO2三个失重峰，相应产生两个吸热峰和一个放热峰。3.差示扫描量热法(DSC)

测量保持供试品和惰性参比物的温度相同,系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术.···样品参比加热炉至信号放大器加热器导线炉温控制器用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水分等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化。应用热分析法检查药物纯度的条件样品纯度在98.0%以上杂质不与主成分反应杂质不与主成分形成共晶或固熔体杂质与熔融试样有化学相似性药物在熔融过程中化学性质稳定药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型58《药品检验操作标准》规定1.遵循平行操作原则（1）仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作2.正确的取样及供试品的称量范围≤1g不超过±2%，＞1g不超过±1%3.正确的比色、比浊方法4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份第三节一般杂质的检查方法591.原理

利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应,生成氯化银白色浑浊液,与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较,判定供试品中氯化物是否符合限量规定。一、氯化物检查法供试品稀HNO310mlH2OAgNO31ml标准溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml

暗处放置5min(避免AgCl分解)条件：硝酸酸性条件（稀硝酸10ml）反应试剂：硝酸银试液1.0ml杂质对照：NaCl(10

g/ml)灵敏度范围：50-80

g/50ml可避免弱酸银盐，如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。平行操作原则。3.若供试品有色，需经处理后方可检查。

注意：干扰及排除

（1）外消色法（2）内消色法：倍量法供试品有色处理方法供试品溶液如带颜色，可按中国药典附录所规定的方法处理。即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液与水适量使成50ml，作为供试溶液，将两液在暗处放置5min后比较，即可消除颜色的干扰。此法又称为内消色法。

外消色法：加入一定的有色物，如稀焦糖等，或经处理降低色度，不干扰测定。如高锰酸钾中氯化物的检测，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。65

碘化物、溴化物中氯化物的检查66a溶于水的有机药物——直接检查.c溶于稀乙醇或丙酮的有机药物

——用该溶剂溶解后依法检查.例：三氯叔丁醇CCl3—C(CH3)2—OH

b不溶于水的有机药物——d杂质中卤素原子连接于苯环上

——先进行有机破坏,使分解后再检查.有机药物中氯化物的检查二、硫酸盐检查法2ml40mLd.HCl25%BaCl25mlH2O50mlH2O

样品标准溶液浓度范围

0.1mg~0.5mgSO42-/50ml硫酸钾溶液0.1mg/ml681.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50mL供试溶液中含稀盐酸2mL为宜。

(盐酸酸性条件防止BaCO3，BaPO4沉淀生成，pH约=1)2.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。3.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。4.供试液带色应先处理。测定条件三、铁盐检查法1.硫氰酸铁法

(Ch.P

和USP采用)红色原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子,与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较。供试品显色，立即与同法制成的对照溶液比较加水溶解25ml稀HCl

4ml过硫酸铵50mg加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液3ml加水定容既可氧化供试品Fe2+变成Fe3+,同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。最佳比色浓度a.仪器分析线性范围5~90

gFe3+/50mlb.目视比色浓度范围10~50

gFe3+/50ml2.巯基醋酸法

(BP采用)红色枸橼酸的作用：使枸橼酸与铁离子形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀。巯基醋酸：还原剂本法灵敏度较高，但试剂较贵74

重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属，重金属存在影响药物的稳定性及安全性.

铅易在体内积蓄中毒,以Pb为代表.

四、重金属检查法重金属检查法1.第一法

硫代乙酰胺法黄色至棕黑色混悬液

硫代乙酰胺在弱酸性(pH3.5醋酸盐缓冲液)条件下水解,产生H2S,与微量重金属离子(以Pb2+为代表)生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液,与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较,不得更深。77操作方法样品管对照管78①

标准铅溶液浓度？②

硫代乙酰胺试液？③

溶液的pH？④

供试品溶液有颜色时的处理？⑤

干扰物的排除方法？讨论：79①

标准铅溶液浓度适宜目视比色的浓度范围

Pb2+标准溶液10

g/ml

1~2ml80②

硫代乙酰胺试液H2S试液：恶臭和毒性；不稳定；易被空气氧化而析出硫；浓度难以控制.

改用硫代乙酰胺为显色剂，硫代乙酰胺在实验条件下水解产生H2S,与重金属离子反应.81pH在3.0-3.5时,呈色较完全.酸度增大,呈色变浅甚至不呈色.

溶液的pH对于金属离子与硫化氢呈色影响较大.③

溶液的pH82④

供试品溶液有颜色时的处理a.外消色法

b.内消色法稀焦糖溶液调节指示剂调节

——与氯化物检查时的处理方法类似83

⑤

干扰物的排除方法干扰：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,产生混浊影响检查。a.供试品中微量高价Fe3+存在如：葡萄糖酸亚铁中重金属的检查.排除：加入抗坏血酸或盐酸羟胺使

Fe3+还原为Fe2+。84b.药物本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽剂消除干扰——加掩蔽剂KCN,使锑、锌形成稳定的配合物后,用第三法检查.如：葡萄酸锑钠中重金属的检查1.原理

供试品先炽灼破坏后,使有机结合的重金属游离,再按第一法检查.2.第二法炽灼后的硫代乙酰胺法86

2.操作

缓缓炽灼放冷H2SO40.5-1.0ml供试品炭化

加热

HNO3500-600℃H2SO4

除尽放冷完全灰化

蒸干HCl2ml水15ml

中性按第一法检查蒸干氨试液a.HNO3处理后，必须蒸干除尽NO.b.炽灼温度严格控制：500-600℃注意：做空白试验3.第三法

硫化钠法原理：在碱性介质中,以Na2S为显色剂,使Pb2+与S2-作用生成PbS的混悬液,与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较,不得更深。88

适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查。

如：磺胺类与巴比妥类药物。注意：Na2S对玻璃有腐蚀性,久置产生絮状物,应临用新配。4.第四法微孔滤膜法

当重金属含量低(2-5

g)时,在比色管中难于目视观察,采用本法。原理：同第一法使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上(铅斑)提高检查的灵敏度。902.白田道夫法1.古蔡氏法

3.Ag-DDC法4.次磷酸法五、砷盐检查法(一)古蔡氏法(Gutzeit)

黄色棕色黑色溴化汞试纸1.原理进而促进AsH3