水质 细菌总数测定作业指导书

文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第1页共5页11含义及执行标准含义1mL3724小时后，所生长细菌菌落的总数。方法原理单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培育基或一套物理、正存在的活细菌的总数。水环境质量标准表1-1 细菌总数地下水质量分类指标〔GB/T14848-93〕类别类别Ⅰ类Ⅱ类Ⅲ类Ⅳ类Ⅴ类标准值〔个/mL〕≤100≤100≤100≤1000＞1000表1-2 细菌总数生活饮用水卫生标准〔GB5749-2023〕类别类别饮 用 水农村小型集中式供水和分散式供水标准值〔个/mL〕≤100≤500分析方法 方法名称、方法来源和适用范围方法名称：平板计数法(第四版)国家环保总局2023年第五篇其次章四方法适用范围：此法主要作为判定饮用水、水源水、地表水等污染程度的标志。仪器高压蒸汽灭菌器电热枯燥箱恒温培育箱冰箱解剖镜。采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿〔直径9c、刻度吸管等器皿12℃20mi〕高压文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第2页共5页22蒸汽灭菌后于电热枯燥箱中烘干。培育基养分琼脂培育基：市售养分琼脂培育基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121℃高15min，经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。分析步骤选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30～300之间。大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL，所得的菌落总数可适于计数。水样的稀释方法20～25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。1mL9mL灭菌水的试管中，混匀1：1001：1000、1：10000稀释液〔稀释倍数按水样污浊程度而定。留意：吸取不同浓度的稀释液时，必需更换吸管。操作方法1mL2～3个适宜浓度的稀释水样1mL15mL45℃左右的养分琼脂培育基，并马上旋摇平皿，使水样与培育基充分混匀。每个水样应倾注两个平皿。②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面对上，置于37℃恒温箱内培育24h，进展菌落计数。菌落计数培育之后，马上进展平皿菌落计数。假设计数必需暂缓进展，平皿需存放于5～10℃24h。但是不行以使这种做法成为常规的操作方式。作平皿菌落计数时，可用解剖镜检查，以防遗漏，在登记各平皿的菌落数后，应求出皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘以2代表全皿菌落数，培育基或其他材料染有杂菌，以致平皿无法计数，则应报告“试验事故对那些看来相像，距离相近但是却不相触的菌落，只要它们之间的距离不小于最小菌落的直径，便应一一予以计数。那些严密接触而外观〔例如形态或颜色〕相异的菌落，也应当一一予以计数。计算细菌总数是以每个平皿菌落的总数或平均〔例如同一稀释度两个重复平皿的平均数〕乘以稀释倍数而得来的。各种不同状况的计算方法如下：文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第3页共5页33①首先选择平均菌落在30～300之间者进展计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告〔见表3例1。30～300之间，则应当按二者之比值来打算。假设其比值小于22〔见表3例23③假设全部的稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数报告〔见表3例。④假设全部稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数报告〔见表3例5。⑤假设全部稀释度的平均菌落数均不在30～30030030的平均菌落数乘稀释倍数报告〔见表3例6。例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释菌落总数报告方式备注例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释菌落总数报告方式备注2702.7×102310003.1×104的原则取舍10-110-210-3度菌落数之比〔个/ml〕〔个/ml〕1136516420—16400160001.6×104两位以后22760295461.637750380003.8×104的数字采32890271602.227100270002.7×104取四舍六4无法计数1650513—5130005100005.1×105入五单双527115 — 2706无法计数30512 — 30500质量把握要求比照把握承受无菌水作全过程比照把握，当有明显杂菌污染时，说明测定过程某环节无菌性失10min准确度15个阳性水样平行双样结果为X

1，则准确度推断值＝3.27R。

1i 2i 1i 2i〔R

R)

logX

logX 〕i i 1i 2i当分析所得Ri1logX1

logX2

3.27R表示周密度已失控；否则平行双样的差距可以承受。最正确计数量文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导书第4页共5页4430～300菌落数在这一范围的平皿计数。数据处理数据审核分析结果填写原始记录表与样品送检单，应经科室内部校对、审核后，方可上交。数据填报100100承受二位有效数字报告，有效数字后面的数值以四舍五入方法计算，为缩短数字后面的零数可用10的指数形式表示〔如报告1000或1.14。在报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。样品采集采样瓶应经高压或干热灭菌处理前方可使用；500mL采样瓶中参与0.3mL10%硫代硫酸钠溶液；样品含铜锌等重金属较高时采样瓶灭菌前应加螯合剂，即于500mL采样瓶中参与21.0mL15%乙二胺四乙酸二钠〔EDTA-Na〕溶液；2同一地点同时采多瓶水样时，细菌学检验水样先采；采样时，采样瓶不得用水样荡洗；2106小时。期间核查人员素养首先要参与省上岗证理论考试，理论考试合格前方能上岗。同时站内进展操作技能考核、培训，考核合格前方能持证上岗，承但本项分析。按国家和省环境监测中心的要求，必要进展五年换证的理论考试、操作技能考核。仪器设备臭氧杀菌效果、高压锅压力表指示、恒温培育箱温控状况每年由站质管中心组织持证人员检验、校正，玻璃量具每三年由站质管中心组织持证人员校正。分析环境条件把握仪器设备保持试验室环境干净，定期检查，避开恒温培育箱温控失控，做好仪器设备使用和保养记录。无菌室定期承受消毒剂清洁无菌室，定期检查臭氧杀菌效果，保证无菌室微生物试验条件的满足。文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质细菌总数测定作业指导