虎眼万年青愈伤组织诱导及再生芽分化的研究

虎眼万年青愈伤组织诱导及再生芽分化的研究

虎眼万年青是百合科多年生科虎眼万年青科多年生科多年生科。它的花是黄色和橙色的，每个花是黑色的“虎眼”，它们是前面的，花序和伞房花序，花期优雅，花期长。叶子是基生的，厚而硬，多年生，良好的叶子。近年来，它是进口的一种球形花卉新品种。茎的自然切割和繁殖非常小。利用这种组织培养方法，可以更好地满足商业栽培中幼苗的需求。在国外已经开始研究这一点，但中国没有关于添加或减少这种疾病的文章。无糖培养是一种近年来提出的一种新兴的集体培养新方法。这种方法使用一个大的培养容器来代替传统的小培养瓶，通过调整co浓度、光照强度、温度、相对湿度、气流速度等环境因素，使用不添加培养基质，为植物的自养生长创造合适的生长环境条件，促进苗的品质改善。本研究中,对培养基激素浓度对虎眼万年青离体快速繁殖的影响进行了探索,并对增殖再生的不定芽进行无糖生根培养,在此基础上建立适于组培种苗工厂化生产的技术体系.1材料和方法1.1试验品种供试品种为从国外引进的商业品种,虎眼万年青Ornithogalumdubium(英文名为YellowChink).1.2叶片的处理取虎眼万年青新萌发的叶片为外植体,用自来水冲洗干净后,用75%酒精浸泡1～2min,再用0.1%HgCl2溶液消毒15～20min,无菌水冲洗4～5次,将叶片切成1cm2大小.1.3培养基和培养将小叶块平放到附加不同激素的MS培养基上.培养基中蔗糖30g/L,琼脂6mL/L,pH5.8.每个处理接种20～30个切块.在培养室内培养,培养温度(25±2)℃,光照12h/d,光照强度2000～3000lx.1.4无糖培养基的筛选将达到生根标准的再生芽直接从基部切下,移栽于消毒的蛭石上,置于无糖培养系统中培养,对培养基质中的NAA浓度进行筛选试验.基质附加MS大量元素,室内温度(20±2)℃,培养箱内CO2体积分数为0.10%～0.12%,光照条件及湿度依照无糖培养规程适时调整.与常规组培生根培养进行对照.2结果与分析2.1ba与ba的浓度对愈伤组织诱导频率的影响虎眼万年青的叶切块在不同激素配比的诱导培养基中较易产生愈伤组织及不定芽,切块边缘产生愈伤组织的机率高,而切块表面易产生不定芽.在供试的9个处理中均有愈伤组织及不定芽的产生,总体诱导率均在80%以上.表1为不同激素浓度的愈伤组织和不定芽的诱导情况.由表1可知,BA浓度高时诱导愈伤组织的效果好,NAA与BA的浓度比例相当时,有利于不定芽的产生.从总体上来看,处理3的愈伤组织诱导频率最高,其次为处理6;处理2的不定芽诱导频率最高;NAA浓度较高时(0.5mg/L)或BA浓度较低时有少量根的再生.在培养基中BA为1.0mg/L,NAA为0.1mg/L时,叶片切块诱导长出愈伤组织的同时,不定芽的诱导频率最高,在建立虎眼万年青快繁体系时,该组合适宜作为诱导培养基.在进行继代增殖培养时,可选择培养基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L,它对不定芽的生长和增殖效果较好.在虎眼万年青叶片的诱导培养中,叶片的取材部位对诱导结果有一定的影响.靠近叶基部较厚的叶片切块较易产生愈伤组织及分化不定芽,叶尖部位的切块只能诱导出少量愈伤组织,无不定芽的产生.所以,应选择生长健壮的叶片作外植体,而且应将叶片靠近顶部1/3的部位切去.2.2naa的生根将增殖培养20d后,长至3cm左右的再生芽及时从基部切下,转入无糖培养系统中进行生根培养,其生根情况见表2.在附加不同浓度NAA的基质中,生根情况有差异.较高浓度的NAA对生根无明显的促进作用,而且生根数较少,培养18d后,出苗时根系较长,不利于移栽成活;0.1mg/L的NAA生根综合情况最好,根数量较多,而且基部膨大;NAA浓度为0时也有69%的生根率,但生根较慢,根数量最少.在常规的组培生根培养中,以MS+NAA0.5mg/L为培养基时,生根率可达83%,但根数较少,基部鳞茎基本无膨大现象的发生.无糖生根培养的种苗质量明显优于常规组培生根培养的种苗.3无糖培养的工程特点.用虎眼万年青新萌发的叶片切块作外植体在适宜的诱导培养基上培养,可以对其进行快速繁殖.叶片的取材和消毒都十分方便,而且在取材过程中不损耗母株,适于引进品种的规模化繁殖与快速生产.在虎眼万年青的继代增殖培养中,随着继代次数的增加,植株体内会有一定的激素累积,须根据再生芽的生长状况适时对培养基中激素浓度进行调整,逐步降低激素的用量,以保证种苗不发生变异,或仅仅发生很小的变异,不断获得健壮的继代苗.在无糖培养的基质不加糖,可明显减少常规组培技术中污染