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文档简介

SDS－PAGE测定蛋白质相对分子质量【目的要求】学习SDS测定蛋白质分子量的原理。掌握垂直板电泳的操作方法。运用SDS测定蛋白质分子量及染色鉴定。【实验原理】电泳带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。PAGE

聚丙烯酰胺凝胶（PAG）是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂四甲基乙二胺(TEMED)和引发剂过硫酸铵(AP)的作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶作为支持介质的电泳称为PAGE。PAGE具有电泳和分子筛的双重作用。CH2=CHC=ONH2丙烯酰胺N,N’-甲叉双丙烯酰胺CH2=CHC=O

NH

CH2

NHC=O

CH2=CH聚丙烯酰胺CH2-CHC=ONH2CH2-CHC=ONHCH2NHC=O

CH2-CHCH2¯

CHC=ONH2CH2-CHC=ONH2CH2-CHCH2-CHCH2-CHC=ONH2CH2-CHCH2-CH()n()n()m()m

PAG机械强度好，有弹性，透明，化学性质稳定，改变

Acr浓度或Acr与Bis的比例可以得到不同孔径的凝胶。

PAGE分为连续系统和不连续系统两大类。连续系统电泳体系中缓冲液pH值与凝胶中的相同.带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。SDS

是在蛋白质样品中加入SDS和含有巯基乙醇的样品处理液，SDS是一种很强的阴离子表面活性剂，它可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。【SDS基本原理】

强还原剂巯基乙醇可以断开二硫键破坏蛋白质的四级结构。使蛋白质分子被解聚成肽链形成单链分子。解聚后的侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS

复合物。蛋白质分子结合SDS阴离子后，所带负电荷的量远远超过了它原有的净电荷，从而消除了不同种蛋白质之间所带净电荷的差异。蛋白质的电泳迁移率主要决定于亚基的相对分子质量。而与其所带电荷的性质无关。有许多蛋白质是由亚基或两条以上肽链组成的，它们在

SDS和巯基乙醇作用下，解离成亚基或单条肽链，因此这一类蛋白质，测定的只是亚基或单条肽链的MW。将已知分子量的标准蛋白质在SDS

中的电泳迁移率对分子量的对数作图，即可得到一条标准曲线。只要测得未知分子量的蛋白质在相同条件下的电泳迁移率，就能根据标准曲线求得其分子量。当蛋白质的分子量在17,000～165,000之间时，

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