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文档简介

微生物学教研室郭棵棵实验五芽胞染色（验证性试验）录像：肠杆菌科

上次课结果观察操作：（1）肠道致病菌的分离鉴定（二）

——

接种克氏双糖铁培养基（2）枯草芽胞杆菌的芽胞染色材料：（1）克氏双糖铁培养基1支/人（2）枯草芽胞杆菌

（3）染液（石碳酸复红，美兰等）实验内容[教学目标]

了解：肠道杆菌的分离鉴定枯草芽胞杆菌芽胞的形成条件及生物学意义

掌握：

1.肠道致病菌糖发酵的结果鉴别

2.鉴别培养基上菌落的特点

3.掌握枯草芽胞杆菌芽胞染色的方法化脓性球菌分离鉴定上次课结果观察脓汁甘露醇发酵实验触酶实验血浆凝固酶实验血清肉汤沉淀生长葡萄状排列（大小、溶血、色素）（分类、形态、排列）革兰染色链状排列血平板菌落观察1、肠道菌分离鉴定的操作步骤（续）粪便接种三线法S.S平板37℃培养24h选可疑菌落接种克氏双糖铁培养基肠道菌分离鉴定（二）操作一2、S.S平板（复习）组成及作用:

胆盐、煌绿、枸橼酸钠等：能抑制杂菌生长

乳糖：可被非致病性肠道菌分解产酸，但致病性肠道菌不能分解之。

中性红指示剂：酸红碱黄

硫代硫酸钠、枸橼酸铁：鉴别硫化氢产生形成粉红色菌落者为非致病性肠道菌形成无色或浅黄色菌落者疑为致病性肠道菌

结果判断:S.S平板培养结果葡萄糖、乳糖：可被细菌分解产酸产气

蛋白胨：细菌分解可产生H2S

硫酸亚铁：与H2S结合形成FeS黑色沉淀

酚红指示剂:

pH范围6.8-8.4(酸黄碱红)3、克氏双糖铁培养基

组成及作用

仅分解葡萄糖时，产生的酸少，随着培养时间延长，在有氧条件下，会被细菌分解产生的碱性物质中和，而使斜面维持原有的红色；而底层则因酸性物质的存在使酚红指示剂由红色变为黄色。

克氏双糖铁培养基培养基中乳糖与葡萄糖的比例为10∶1。

对乳糖、葡萄糖的发酵能力

克氏双糖培养基中乳糖含量大，细菌分解后产酸多，故发酵乳糖不仅能使培养基底层变成黄色，斜面也会由红变黄。因此，通常以克氏双糖铁培养基的斜面部分代表乳糖，底层部分代表葡萄糖。当细菌分解糖类产气时，培养基中还会有气泡或裂隙出现。克氏双糖培养基糖发酵结果判断早期18-24hBAC

培养基中含有的硫酸亚铁，可用于检查细菌能否分解蛋白胨中含硫氨基酸生成H2

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