双向电泳试验试剂及溶液

双向电泳试验试剂及溶液所有含尿素溶液加热不能超过℃去离子水或 水配制所有溶液。分析纯试剂，保质期内使用。推荐使用进口试剂。双向电泳的样品裂解溶液含有尿素（尿素，10m）l，2两性载体 或缓冲液载体两性电解质，40最终浓度尿素000两性载体（现用现加）或缓冲液2v)200口（现用现加） 0去离子水至0需要水约0支分装，储存于2℃条件下。u现用现加。尿素水化储备溶液（尿素，2 h0两性载体或缓冲液，0002溴酚蓝10)最终浓度尿素 00202溴酚蓝储备溶液000220口去离子水至0需要水约分装为 0溶液储存于20℃条件下。使用前加入T每0水化储备溶液中加入2； , 。).2使用前加入与 胶条的范围相同 ，终浓度0 。

平衡缓冲液(单尿素,75mMTris-H甘油，8.8%D9S.3,0%.溴酚蓝,00ml)最终浓度尿素 0.03单.,参见溶液部分.0甘油8%.%).5 ml8.88.8%.0溴酚蓝储备溶液0.00%00，去离子水至00这是储备溶液。在使用之前，按照先量加入%T00)或i碘乙酰胺( 0),0分别用于第一次和第二次平衡。 用量0胶条。分装0支，储存于℃0条件下。X) 电泳缓冲液0碱，.甘氨酸，%D.0最终浓度碱121.1)00.甘氨酸.01.92M144.188.8%0.0去离子水至.0不要调节该溶液的值。室温储存。0% ,.单体储液(30丙%烯酰胺,0.8%N,N’-甲叉双丙烯酰胺,500ml)最终浓度心丙烯酰胺 .080%0N,N’甲叉双丙烯酰胺.0.8%去离子水至00用0.5滤膜过滤溶液，℃避光储存。*分离胶缓冲液碱，8,800最终浓度碱1.1) 1.5M.去离子水0调至8.8去离子水至00用0.5滤膜过滤溶液，℃存储。G溴酚蓝储备溶液最终浓度 用量溴酚蓝TOC\o"1-5"\h\z碱 .去离子水 一 至10溶%液SDS最终浓度 用量去离子水 一 至用44滤膜过滤溶液，室温存储。过1硫0酸%铵溶液过硫酸铵, 5最终浓度 用量管支，每支加入过硫酸铵 去离子水（现用现加） 一 至新鲜的过硫酸铵在加入水时发出“劈啪”声，若没有声音，请更换过硫酸铵。琼脂糖密封液碱甘氨酸琼脂糖密封液碱甘氨酸琼脂糖 溴酚蓝最终浓度 用量电泳缓冲液（见溶液） 琼脂糖或澳酚蓝储备溶液 从去离子水 至 .将所有成分加入到 的烧瓶中。轻轻地摇晃，使成分混匀。加热直至琼脂糖完全溶解。不要让溶液爆沸。以 为单位分装至带有螺旋帽的管内，室温保存。水饱和正丁醇询正丁醇水 1m摇匀后静置分层，使用上层。

表32灌制垂直SDS股的配方10%T,2.6%C12.5%T+2一6%C15%TrL6%C单体贮存液33.3nil41.7ml50ml4X分离胶缓冲液25ml25ml25ml10%SDS1ml1ml1ml去离子水40.2nil31gmi23.5mlTEMED+33H1333133P1过硫酸铁*『10%)500n1500ii1500P1最终体积100ml100mllOOtnl”和过硫酸钱在灌胶前再加根据凝胶大小和灌制数量酌情增减最终体积。以下银染与考染两种染色方法任选其一快速银染操作流程一、银染试剂每块凝胶需要固定液、敏化液、银染液、显色液、终止液各 0漂洗液0去离子水。1固.定液：乙醇：冰醋酸：水=：51：42漂.洗液：30乙%醇敏化液： 硫代硫酸钠（ - ）223 2银染液： 溶于M甲醛中，用去离子水定容至 ，避光保存。（先配好不含甲醛的储备液，临用前按比例加入甲醛， M 银染液）显色液：敏化液1甲醛 去离子水，定容至0每次使用时新鲜配置（先配好不含甲醛的储备液，临用前按比例加入甲醛， 1银染液）6终敏止液：5%醋酸水溶液二、银染操作步骤：1敏固定：凝胶取下后，用去离子水清洗胶面，然后加入固定液振荡至少m如果需要，胶可在固定液中保存过夜不振荡）2敏漂洗；弃去固定液后，凝胶用漂洗液清洗一次。弃去漂洗液，加入新鲜漂洗液，振荡；3敏水化：凝胶用去离子水清洗一次，弃去去离子水，再次加入去离子水水化15-；30min敏化：用敏化液浸泡凝胶 ；去除背景。水洗：凝胶用去离子水洗遍，每次 s银染：用银染液覆盖凝胶，轻微振荡 。7敏水洗：重复第5步。显色：加入新鲜配置的显色液，显色 0注意观察染色状况，显色时间视蛋白量而定。洗胶：迅速用去离子水漂洗凝胶 s终.止：迅速加入终止液，终止显色反应。水.洗一次，扫胶考马斯亮蓝染色操作流程（ 热考染）一、0.2%储液配制1片R350用80ml双蒸水搅拌溶解5-10mim；加入120ml甲醇，搅拌至染料溶解；过滤溶液，4℃可储存3周。二、0.1%