高效液相色谱法测定脑脉康中的超声波浓度

高效液相色谱法测定脑脉康中的超声波浓度

0,5-二硝基苯甲酰氯的检测这种片剂通常用于测定内外关节疼痛的功能。由于婆罗西亚植物结构中没有具有紫色表面处理功能，因此主要采用膜色谱法和液相色谱法。高效液相色谱法是实验室中常见的分析性实验室药物，用于分离和测定一般中药成分，但很难直接分析具有较弱紫外吸收能力的化合物。根据该化合物的特点，3.5-二硝基苯磺酸盐可用作此类化合物的衍生物试剂。在叔胺和吡啶的化合物作用下，它可以与钙化后的三、五-二硝基苯丙烯酸酯反应，形成具有强烈紫外吸收的三、五-二硝基苯丙烯酸酯。我们利用这一原则，利用反相hplc法对脑脉康中的婆罗西亚剂量进行了测定和研究。1材料和方法1.1保元酸溶液、5-二硝基苯甲酰氯及dnb-cl高效液相色谱仪配备紫外检测器(日本岛津LC-10Avp),色谱柱:KromasilC18150.0mm×4.6mm,5μm(大连伯瑞公司填充).冰片对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号743-8902),溶于乙腈中制成浓度为1mmol·L-1的溶液;3,5-二硝基苯甲酰氯(DNB-Cl,北京化工厂),溶于乙腈中制成浓度为5mmol·L-1的溶液;4-二甲氨基吡啶(DMAP,Sigma公司),溶于乙腈中制成浓度为40mmol·L-1的溶液.3,5-二硝基苯甲酸冰片酯(自制,mp:148~150℃),乙腈(色谱纯),甲醇(分析纯).脑脉康肠溶胶囊(自制,批号20010319,20010426).1.2方法1.2.1条件1以甲醇:水(88:12)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长225nm,进样体积5μL的色谱图(Fig1).1.2.2在sec中，原材料反应的温度和时间的研究经试验发现反应温度(20~80℃)对衍生反应无明显影响.在室温下,混合2min后衍生反应即可完成.1.2.3dnb-cl与血清摩尔比的确定将冰片和DMAP用量固定,改变衍生化试剂DNB-Cl的用量(Fig2).实验表明当DNB-Cl与冰片的摩尔比(nDNB-Cl/nborneol)为35倍时,衍生物相对色谱峰面积最大,但放置稳定性稍差,而摩尔比为20倍时放置稳定性较好,因此正式实验选择DNB-Cl与冰片的摩尔比为20倍.1.2.4dmap与血清摩尔比对ndap衍生物相对色谱峰稳定性的影响将冰片和DNB-Cl用量固定,改变催化剂DMAP的用量(Fig3).实验表明当DMAP与冰片的摩尔比(nDMAP/nborneol)为20倍时,衍生物相对色谱峰面积最大,而摩尔比为40倍时,适应范围较宽,因此正式实验选择DMAP与冰片的摩尔比为40倍.1.2.5衍生化方法的制备定量吸取冰片对照品溶液100μL置具塞试管中,加入400μLDNB-Cl溶液,再加入100μLDMAP溶液混匀,即得.精密称取脑脉康药粉约42mg于25mL容量瓶中,加适量乙腈,旋涡振荡,加乙腈至刻度,混匀,转入离心管中离心(14000g·min-1)5min,取100μL同对照品溶液衍生化制备方法进行.2结果2.1色谱峰面积与进样量的关系分别精密吸取对照品溶液的衍生化溶液1,2,3,4,5,6,7,8,9和10μL注入色谱仪,以进样体积(X)对色谱峰面积(Y)进行线性回归,得回归方程为:Y=-14.6+82796.4X,R2=0.9996(P<0.01).因此在1~10nmol范围内,冰片衍生物色谱峰面积与进样量成正相关.2.2加标回收率和rsd精密称取已知含量的脑脉康药粉适量,加入一定量的对照品溶液,按“1.2.5”项下处理,测定含量,计算脑脉康中冰片的回收率为99.9%,RSD为1.8%(n=4).2.3含量检测将对照品和供试品衍生化后溶液各5μL分别注入色谱仪,测定峰面积,按外标法计算,测得两批脑脉康中冰片的含量分别为7.9%和7.1%,RSD分别为1.0%和1.5%(n=5).3衍生化试剂的制备冰片是一味常用的中药,有合成和天然之分,主要成分是互为异构体的龙脑和异龙脑.其化学结构无特征紫外吸收,无法直接用实验室常见分析仪器高效液相色谱仪进行含量测定,因此采用衍生化HPLC法是测定这类化合物较好的方法.冰片结构中含羟基,而3,5-二硝基苯甲酰氯是羟基化合物常用的衍生化试剂,在叔胺或吡啶类化合物的催化下可和冰片反应生成3,5-二硝基苯甲酸冰片酯,该新化合物具有较强的紫外吸收,龙脑和异龙脑在此色谱条件下显示为单峰,从而利用柱前衍生化反相HPLC法间接完成了脑脉康中冰片含量的测定研究.实验中曾使用三乙胺作为催化剂,发现即使升高反应温度,三乙胺对衍生反应的催化作用也较弱.使用乙腈作衍生反应和提取溶剂,需注意其含水量的大小,如含水分大,需经脱水处理.冰片的DNB-Cl衍生物3,5-二硝基苯甲酸冰片酯在225nm处有很强的紫外吸收,因此选择225nm为检测波长.在本文的色谱流动相和流速条件下,出峰时间为5min左右,较合适于样品的快速测定.在所选择的DNB