微生物的实验室培养-(正式)

法国微生物学家、化学家，近代微生物学的奠基人。

在他的一生中，曾对同分异构现象、发酵、细菌培养和疫苗等研究取得重大成就，从而奠定了工业微生物学和医学微生物学的基础，并开创了微生物生理学，被后人誉为“微生物学之父”。巴斯德巴斯德在微生物学上的贡献有机物发酵和腐败由微生物引起解决葡萄酒和啤酒变酸问题——创立巴氏消毒法主张传染病是由微生物引起的，并可通过接触、唾液及粪便传播1885年，巴斯德第一次治好了被疯狗咬伤的9岁男孩——奠定了免疫学基础著名的巴斯德研究院微生物方法学和医学微生物学奠基人

——科赫德国细菌学、现代微生物学奠基人之一。因发现结核菌和结核菌素而获1905年诺贝尔生理学或医学奖。到目前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物.无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞课题1微生物的实验室培养专题2微生物的培养与应用牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g分析营养构成？思考：微生物“吃”什么？一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源微生物生长不可缺少的微量有机物（如：维生素、氨基酸、碱基等

。）生长因子：a、牛肉膏主要提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素;b、蛋白胨主要提供碳源、氮源和维生素。2.特殊营养：3.pH、氧气的需求：4.种类：液体培养基固体培养基据物理性质分常用于工业生产用于微生物的分离、鉴定、计数加琼脂半固体培养基加琼脂用于观察运动、鉴定液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长半固体培养基：(是否运动)

无动力有动力(弥散)固体培养基：菌落天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基据用途分常用于工业生产常用于分类、鉴定培养、分离出特定微生物鉴别不同种类的微生物选择培养基:例如：

a、加入青霉素的培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌

b、加入高浓度食盐的培养基:

分离金黄色葡萄球菌

c、不加氮源的无氮培养基:

分离固氮菌

d、不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物在培养基中加入或减少某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基:例如：

在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微生物。练习下列有关培养基的叙述正确的是（）A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B.培养基只有两类：固体培养基和液体培养基C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌A要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）A.固体培养基B.液体培养基C.加入青霉素的培养基D.加入高浓度食盐的培养基A练习下列叙述错误的是（）A.培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素B.培养霉菌时需将培养基中的pH调至碱性C.培养细菌时需将pH调至中性或微碱性D.培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件B练习5.配制原则⑴目的明确：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当⑶适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂（细菌偏碱，真菌偏酸）（CO2碳源）生产科研耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min二.无菌技术：防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手思考2.无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程二.无菌技术：防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作超净工作台单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：三.菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落。倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基二.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）平板划线的操作方法问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。6支试管，分别加入