第二代测序技术

第二代测序技术中我们的机会什么是第二代测序技术?第一代测序技术:Sanger法测序.以待测序列的单链DNA作为模板，加入一个引物和dNTP作为底物，并加入一定比例的2’，3’-ddNTP，在DNA聚合酶的作用过程中，正常dNTP的掺入使链延伸，若ddNTP的掺入则使链终止，这样就可以得到一系列长度不同的以四种ddNTP结尾的DNA片段，经电泳后可直接读出碱基序列。第二代测序技术:高通量的测序技术.一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能.

第一代测序技术VS第二代测序技术2000+台1台1.2Mbases/day/instrument2,500Mbases/day/instrument测序流程一览待测DNA文库的构建EmlusionPCR测序待测DNA文库的构建EmlusionPCR连接酶测序待测DNA文库的构建DNA与Flowcell结合BridgePCRdsDNA变性测序Roche454IlluminasolexaABISOLiD测序流程一览待测DNA文库的构建EmlusionPCR测序待测DNA文库的构建EmlusionPCR连接酶测序待测DNA文库的构建DNA与Flowcell结合BridgePCRdsDNA变性测序Roche454IlluminasolexaABISOLiD待测文库的构建核酸抽提DNA片段化加入接头纯化连接产物PCR扩增最终纯化文库质量验证与定量我们的机会核酸抽提DNA片段化加入接头纯化连接产物PCR扩增最终纯化文库质量验证与定量MNgDNA抽提系列Covaris及耗材QIAGENCat.no.28704替代产品:MNcat.no.740609QIAGENcat.no.28104替代产品:MNcat.no.740609

Agilent2100DNA芯片DNA质量控制:2100酶类的应用Covaris仪器及耗材自动聚焦声学（AdaptiveFocusedAcoustics）技术通过等温、非接触的方式对样品进行声学匀浆和声学分解该技术整合了非线性、高强度、会聚性声学冲击波和高级计算机控制系统通过圆盘状传感器将声波能量聚焦在样品上，且能量强度可控，采用非接触并等温的方式进行样品的匀浆或混匀超声破碎仪Covaris–AFAAFA产品优势等温处理不会产生过热现象而破坏样本的生物活性能量可控制可精确的控制样本处理过程，重复性高。自动聚焦的能量无损失，直接作用于管内样品上仪器优势制冷风扇降低噪音处理高通量样本时，实现标准化作用于每个样本的能量均一致10/5/202310应用方向组织破碎，细胞裂解基因表达–DNA剪切，第二代测序蛋白组学–过程可控ADME/Tox（药物代谢和毒理学）–可加速研发过程微生物分离从组织、细胞中分离微生物加速各种反应过程酶促反应–加速反应过程……11AFA产品类型S-series单管处理样本多个型号选配循环水浴，可处理对温度敏感的生物样品E-series自动化处理批量处理适用孔板类型(1,24,48,96,384,etc.)L-series平行处理样本适用1536孔板10/5/2023Covaris的耗材相关产品所需产品T4DNAligaseNEB#M0202L/M(高浓度5x)/S/T(高浓度5x)/VKlenow

具有5´→3´的DNA聚合酶活性NEB#M0212L/M/S/VPCR酶USB系列产品dNTPNEB的dNTP套装及dNTP混合液NEBNext:E6000L/S,E6020L/S

NEBNext™DNASamplePrepReagentSet1/NEBNext™DNASamplePrepReagentSet2EPINextera™TechnologyforNext-GenerationSequencingLibraryPreparationNextera™DNASamplePrepKits(Roche454-Compatible)Nextera™DNASamplePrepKit(Illumina-Compatible)困难:一般客户会按照厂家推荐购买DNA芯片货号名称描述5067-1504AgilentDNA1000Kit适用25to1000bp的DNA，包括25张chip和对应试剂（每片Chip可用于12个DNA样品的检测）5067-1506AgilentDNA7500Kit适用100to7500bp的DNA，包括25张chip和对应试剂（每片Chip可用于12个DNA样品的检测）5067-1508AgilentDNA12000Kit适用100to12000bp的DNA，包括25张chip和对应试剂（每片Chip可用