浅论感特灵胶囊中黄芩苷的HPLC测定

浅论感特灵胶囊中黄芩苷的HPLC测定【摘要】目的建立HPLC法测定感特灵胶囊中黄芩苷含量的方法。方法采用外标一点法,DiamonsilODS1C18色谱柱,甲醇-水-磷酸(50∶50∶)为流动相,流速为mL/min,检测波长280nm。结果黄芩苷在6～8?g范围内呈良好线性,回归方程为Y=95952X+8,r2=7,平均加样回收率为%,RSD=%(n=6)。结论该方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,为感特灵胶囊中黄芩苷的定量分析提供了科学有效的方法。

【关键词】感特灵胶囊;黄芩苷;高效液相色谱法;含量测定

Abstract：ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofBaicalininGantelingJiaonangbyHPLC.MethodsUsingDiamonsilODS1C18Column,methanol-water-phosphoricacid(50∶50∶)asthemobilephase,detectionwavelengthas280nmandflowratewasmL/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearattherangeof6～8?gforBaicalinandlinearequationwasY=95952X+8,r2=7.Theaveragerecoverywas%andRSDwas%(n=6).ConclusionThismethodwassimple,accurate,proper,andthereduplicationoftheresultwasgood,whichprovidescientificquantitativeanalysismethodforthedeterminationofBaicalininGantelingJiaonang.

Keywords：GantelingJiaonang;Baicalin;HPLC;contentdetermination

感特灵胶囊收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第十三册中,功能清热解毒、清肺止咳,用于感冒初期引起的咳嗽、流清涕、头痛目眩等。处方由黄芩、柴胡、贝母、细辛、大青叶、板蓝根、牛黄以及对乙酰氨基酚、马来酸氯苯钠敏、咖啡因组成[1]。原标准中只对对乙酰氨基酚进行含量控制,而对处方中的主药黄芩没有含量控制,不能全面控制药品的质量。为了更好地控制感特灵胶囊的质量,提高感特灵胶囊的质量标准,我们采用HPLC法对黄芩的主要成分黄芩苷进行了含量测定,并进行了方法学研究。结果表明,方法简便快速,稳定可靠,专属性强。

1仪器与试药

高效液相谱仪：SPD-10A日本岛津;紫外分光仪：上海康化生化仪器制造厂;超声波清洗器：SK3200H上海科导超声仪器有限公司。

黄芩苷对照品(批号110715-200514,供含量测定用),由中国药品生物制品检定所提供;感特灵胶囊(批号200906001、200906002、200906003),河南百年康鑫药业有限公司提供。其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(50∶50∶)为流动相;流速mL/min;检测波长为280nm,柱温25℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500[2-3]。

溶液的制备

对照品溶液的制备取黄芩苷对照品10mg,精密称定,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL,置10mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL含黄芩苷50?g)。

供试品溶液的制备取装量差异项下的本品,研细,取约g,精密称定,置100mL量瓶中,加50%甲醇适量,超声处理(功率135W,频率59kHz)30min,放冷,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液经?m微孔滤膜滤过,即得。

阴性样品溶液的制备取缺黄芩的阴性样品,按供试品溶液制备法制备阴性样品溶液,即得。

专属性考察

分别取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液,按上述色谱条件测定,结果在黄芩苷相应位置无峰出现。色谱图见图1。

线性关系的考察

精密量取黄芩苷对照品溶液(?g/mL),分别精密吸取、5、10、15、20?L注入液相色谱仪,测定峰面积。以黄芩苷对照品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为：Y=95952X+8,r2=7。结果表明,黄芩苷对照品在6～8?g范围内线性关系良好。

精密度试验

取同一对照品溶液,重复进样6次,每次进样10?L,测定黄芩苷峰面积,测定结果RSD=%,表明本法精密度良好。

重复性试验

取同一批号(批号200906001)供试品,按供试品溶液制备方法制备6份供试液。按照含量测定方法,测定每份样品中黄芩苷的含量,结果RSD=%(n=6),表明重现性良好。

稳定性试验

取同一批号(批号200906001)供试品,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8h测定峰面积,RSD=%(n=5)。表明制备的供试品溶液在8h内稳定。

加样回收率试验

采用加样回收法。精密称取已知含量的同一批号的样品(批号200906001,含量为mg/g)g,置100mL量瓶中,共6份。分别精密加入黄芩苷对照品溶液(8mg/mL)各5mL,蒸干,按供试品溶液的制备方法制备,并照上述色谱条件测定,分别进样10?L,测定黄芩苷峰面积并计算黄芩苷含量(结果见表1),平均回收率为%,RSD=%。表1加样回收率试验结果(n=6)

样品测定

按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,分别对3批中试产品进行测定,结果见表2。表2样品测定结果

3讨论

根据3批样品测定结果,每粒含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计均不少于mg。考虑到药材因产地、加工、运输、贮藏等因素的影响,药材中黄芩苷含量也会有较大的差别,因此,暂规定为：本品每粒含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于mg。

本试验中,取黄芩苷对照品溶液,在200～400nm波长范围进行扫描,结果在280nm波长处有最大吸收,故采用280nm作为检测波长。

参照文献[2-3],用50%甲醇、采用超声处理方法制备供试品溶液,并对超声时间进行了考察,分别超声处理10、20、30、50min进行测定,测得样品中对应的黄芩苷含量分别为、、、mg/粒,试验结果表明,超声处理30min时,基本能够提取完全。

【参考文献】