NDM-1分子生物学检测方法课件

产NDM-1泛耐药肠杆菌科

细菌感染诊疗指南

实验室检测方法解读徐英春北京协和医院

产NDM-1泛耐药肠杆菌科

细菌感染诊疗指南

产KPC酶的肠杆菌科细菌特征

阿米卡星 R氨苄西林 R氨苄西林-舒巴坦 R氨曲南 R头孢唑林 R头孢匹肟 R头孢西丁 R头孢他啶 R头孢曲松 R氯霉素 R

环丙沙星 R厄他培南 R或I庆大霉素 R亚胺培南 R或I左氧氟沙星 R美罗培南R或I哌拉西林-他唑巴坦R四环素 R妥布霉素 R复方磺胺RMIC(µg/ml)MIC(µg/ml)39产KPC酶的肠杆菌科细菌特征

阿米卡星 R环丙沙星KPC

产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点所有的b-内酰胺类耐药青霉素类广谱头孢菌素单环B内酰胺类碳青霉烯类质粒介导的耐药基因有的菌株同时ESBL（+）,氟喹诺酮类耐药、氨基糖苷类耐药35KPC

产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点所有的b-内酰胺

产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点黏菌素/多粘菌素敏感MIC≤2µg/mlS替加环素可能敏感（MIC≤2µg/mlS;4µg/mlI;≥8µg/mlR）52

产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点黏菌素/多粘菌素敏感NDM-1的检测方法NDM-1，即新德里金属β-内酰胺酶-1型，是由细菌质粒上携带的blaNDM-1基因编码的。目前，国际上已有十余篇关于NDM-1的研究性文章或相关部门报告发表。

由blaNDM-1编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对碳青霉烯类耐药性可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可靠的鉴定出来[1][1]USCDC.MMWRMorbMortalWklyRep.2010Jun25;59(24):750.[2]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.NDM-1的检测方法NDM-1，即新德里金属β-内酰胺酶-CLSIM100-S20及CLSIM100-S20-U中碳青霉烯类的折点抗菌药物纸片扩散法(mm)

稀释法(mg/L)M100-S20M100-S20-UM100-S20M100-S20-USRSR

SRSR多利培南-≥23≤19-≤1≥4厄他培南≥19≤15≥23≤19≤2≥8≤0.25≥1亚胺培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4美罗培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4CLSIM100-S20及CLSIM100-S20-U中（一）表型筛查试验纸片扩散法：美罗培南（10ug）或亚胺培南（10ug）：抑菌圈直径≤22mm肉汤稀释法或Etest法美罗培南或亚胺培南:MIC≥2ug/ml亚胺培南适合于大肠埃希菌，克雷伯菌属，沙门菌属，肠杆菌属变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属对亚胺培南敏感性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起，因此对这些菌株尚未建立用亚胺培南MIC法进行筛选和确认碳青霉烯酶，并且亚胺培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛查效果都不好[1]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.[2]KumarasamyKKetal.LancetInfectDis.2010Sep;10(9):597-602.（一）表型筛查试验纸片扩散法：[1]YongDet（二）表型确证试验纸片扩散法：Etest法：双纸片协同法：改良霍奇试验(modifiedHodgetest)自动化鉴定与药敏仪器[1]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.[2]KumarasamyKKetal.LancetInfectDis.2010Sep;10(9):597-602.（二）表型确证试验纸片扩散法：[1]YongDet（二）表型确证试验纸片扩散法：亚胺培南(10ug)/亚胺培南(10ug)+EDTA(500mM10ul)复合纸片结果判读：复合纸片比单药纸片抑菌环直径增大≥5mm图：复合纸片法判定金属β-内酰胺酶示意图

(左纸片：亚胺培南/EDTA,右纸片：亚胺培南)

[1]YongDetal.JClinMicrobiol.2002Oct;40(10):3798-801.（二）表型确证试验纸片扩散法：亚胺培南(10ug)/亚胺培南（二）表型确证试验Etest法：Etest®MBL(IP/IPI、MP/MPI)结果判读：单药与复合制剂的MIC比值≥8图：EtestMBL(IP/IPI)

[1]/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_CLN_PRD_G_PRD_CLN_60（二）表型确证试验Etest法：Etest®MBL(IP图：EtestMBL试验示意图

(亚胺培南/亚胺培南+抑制剂[EDTA])

[1]LeeKetal.JClinMicrobiol.2005Feb;43(2):942-4.图：EtestMBL试验示意图[1]LeeKet（二）表型确证试验双纸片协同法：

亚胺培南(10ug)、EDTA(0.5Mx10μl约0.5mg/片)，间距10mm(0.5McF）图：亚胺培南-EDTA双纸片协同试验示意图(图中菌种为铜绿假单胞菌)[1]LeeKetal.JClinMicrobiol.JClinMicrobiol.2003Oct;41(10):4623-9.（二）表型确证试验双纸片协同法：亚胺培南(10ug)、EDE.coli

ATCC25922厄他培南抑制E.coli

ATCC25922有丰富菌的E.coliATCC25922生长

#1pos制备0.5McF的E.coliATCC25922菌悬液.1:10稀释用棉签均匀涂布MHA平皿、约5分钟，中心贴厄他培南或美罗培南纸片用1ul接种环挑取2-3个菌落，从纸片边缘向外划线过夜培养（16-20h）.出现向内生长的菌株薇碳青霉烯酶阳性（如图1，2）.（二）表型确证试验

#2

pos

#3negCLSIM1