班谦 2亲子鉴定

亲子

鉴定概述亲权鉴定（identificationindisputedpaternity）：是指应用医学、遗传学、人类学及其他自然科学的理论和技术，主要通过人类遗传标记的检测与分析，对被检者之间是否存在生物学亲缘关系所作的科学判定。适用对象：亲子鉴定同胞间隔代直系间旁系个体（叔侄、姨甥等）间第十二章亲子鉴定历史：滴骨法早在三国时期就有实例记载，是指将活人的血滴在死人的骨头上，观察是否渗入，如能渗入则表示有父母子女兄弟等血统关系。合血法大约出现在明代，是指双方都是活人时，将两人刺出的血滴在器皿内，看是否凝为一体，如凝为一体就说明存在亲子兄弟关系。影视剧中的“滴血认亲”《甄嬛传》中，甄嬛被告发与太医温实初有奸情。滴血认亲的水碗里被掺了明矾，滴血后温实初与皇子血液相融，甄嬛提出水有问题。《寻秦记》中，大殿滴血认亲一幕，穿越到古代的项少龙也是利用“加料”的小动作，证明了假嬴政与秦王的亲子关系。《九品芝麻官》结尾，恶霸常威不肯招供强奸戚秦氏的事实，包大人掉包让其与自己儿子滴血认亲，两滴血相融，骗得常威招供。ABO血型血清型、酶型、HLA等DNA指纹图PCR技术VNTRSTRSNP现代医学鉴定技术：一、亲子鉴定的应用1.涉及民事纠纷的亲子鉴定（1）解决家庭纠纷：通常是丈夫怀疑孩子不是自己亲生的；（2）确认责任关系：非婚生子女抚育责任及财产继承；（2）解决医疗纠纷：怀疑医院换错婴儿或试管婴儿配子错配。2.涉及刑事诉讼的亲子鉴定（1）强奸致孕案对儿童（或胎儿）亲生父亲的确定；（2）无名尸体、失踪人员及身源不明者身源的认定；（3）杀婴、拐骗儿童等案件中孩子身源的认定。3.涉及行政事务的亲子鉴定（1）移民涉外公证；（2）失散亲人亲缘关系的认定；（3）计划外生育责任人的确认及其无合法出生证明子女户籍的注册。第十二章亲子鉴定以上各类亲子鉴定例中，尤以母子关系确定，要求判断争议父亲和子女间是否存在亲子关系的最为常见，这类亲子鉴定又称为父权鉴定（paternitytesting）。二、亲子鉴定的依据亲子鉴定的依据非遗传特征受单一基因座等位基因控制受多基因座共同控制，同时还受环境、营养状态、疾病等非遗传因素影响遗传特征广义的血型是指由遗传决定的人类血液的个体差异，包括红细胞血型、白细胞血型、血小板型、血清蛋白型和酶型等。个体间遗传差异的本质是编码基因产物的DNA分子结构在不同个体或等位基因之间存在差异，称为DNA多态性。应用于法医学鉴定的遗传标记大致可作如下分类：遗传标记基因产物水平遗传标记DNA水平遗传标记细胞表面的遗传标记平遗传标记（红细胞血型、白细胞血型、血小板型等）蛋白质的遗传标记（血清型、红细胞酶型、血清酶型、唾液型等）DNA序列多态性DNA长度多态性三、亲子鉴定的原理

亲子鉴定主要是通过检测个体的遗传标记，并根据遗传规律分析个体间遗传标记检验结果是否符合遗传规律，从而判定被检者之间是有具有生物学的亲缘关系。（一）孟德尔遗传规律位于常染色体上的决

定某种性状的基因或DNA遗传标记，按照

孟德尔遗传定律遗传。在一个具体家庭中，决定某一性状的基因在亲代和子代之间传递的规律是：孩子的一对等位基因必定是一个来自父亲，一个来自母亲；孩子不可能带有双亲均没有的等位基因；除非父母双方均有同一基因，否则子女不会是纯合子；父母之一若是纯合子，则子女必得其一。第十二章亲子鉴定图12-1孟德尔遗传规律示意图根据上述遗传规律，在排除遗传变异和分型错误的前提下，鉴定亲子关系的基本原理可以归纳为以下两点：1．在肯定某个基因必需来自生父，而假设父亲并不具有这个基因的情况下，可以排除其亲子关系；2．在肯定某个基因必需来自生父，而假设父具有这个基因的情况下，不能排除其亲子关系。血型组合生父基因可以排除父权不能排除父权母亲孩子aa×aaabbaa、abaa×abbaabb、abab×aaabbaa、abbb×bbbaabb、abbb×ababbaa、abab×bbbaabb、abab×aba、b—aa、bb、ab表12-1根据遗传标记判定父权（二）非孟德尔遗传规律1.男性伴性遗传Y染色体非重组部分以单倍型的方式由男性亲代稳定地直接传给男性子代中，即男性伴性遗传。在母亲不能参加的父子间的单亲鉴定、隔代、同胞间亲缘关系的鉴定及性犯罪案件中的个人识别中都具有非常重要的作用。2.核外遗传线粒体DNA（mitochondrial，mtDNA）是人类唯一的核外基因组DNA，它主要通过卵细胞将遗传信息传给子代，同一母系后代的mtDNA在排除变异的前提下是一致的。在父亲不能参加鉴定的母子间的单亲鉴定，以及母系同胞间或隔代或旁系个体间的亲缘关系鉴定中具有重要意义。亲子鉴定常用的遗传标记一、基因产物水平的遗传标记1.表现为简单的遗传性状，其遗传方式经家系调查已明确；2.具有遗传多态性，基因频率分布较均匀，父权排除率高；3.在相应地区、民族中的群体遗传数据已建立；4.血型个体发生早，不易受年龄、疾病及其他因素影响；5.检验方法操作简单，重复性好，结果明确可靠。（一）红细胞血型红细胞血型是指由遗传决定的红细胞表面抗原的差异。1.ABO血型ABO血型是最早被发现的人类血型系统，在输血、器官移植、人类遗传学及法医学研究中具有重要意义。用已知标准抗血清测定红细胞上的抗原（正试验），或用已知标准红细胞测定血清中的抗体（反试验），可以确定ABO血型的四种普通型：即A型、B型、AB型和O型。表12-2ABO血型抗原、抗体组成已知抗体标准红细胞分型抗-A抗-BA型B型被检红细胞＋－被检血清－＋A型－＋＋－B型＋＋－－AB型－－＋＋O型表12-3ABO血型的分型ABO基因座位于人类第9号染色体（9q34），主要有A、B和O三个等位基因，A和B为共显性，A、B对O为显性，O为隐性。ABO血型抗原决定簇是多糖，它们并不是基因的直接产物，而是由基因表达产生的不同糖基转移酶，以H物质作为基础物质催化生成的不同糖链。ABO血型抗原不仅以醇溶性糖脂类的形式存在于红细胞及其他组织细胞上，也可以水溶性糖蛋白的形式存在于部分人的血清、精液、唾液等体液与分泌液中。因此，也可以通过对上述样品的检测判定ABO血型。2.MN血型M抗原与N抗原是Landsteiner等（1927年）用人红细胞免疫家兔制备特异性抗血清时发现的，是第二个被发现的人类血型系统。以糖蛋白的形式存在于红细胞膜表面上，用已知抗-M、抗-N抗体检测未知的红细胞抗原，根据凝集反应分为M型、N型和MN型3种表型。MN基因座位于第4号染色体（4q28-31)上，M、N两个等位基因符合常染色体共显性遗传。3.Rh血型Rh血型是最为复杂的人类血型之一，5种常见抗原D、C、c、E、e构成18种表型。其中RhD抗原具有很强的免疫原性，在输血、新生儿溶血和母儿妊娠不合中具有重要的意义，因此临床上则根据RhD抗原的有无分为RhD（+）和RhD（-）两种型。RhCE基因座的四种等位基因RhCE、RhCe、Rhce、Rhce属常染色体共显性遗传。Rh血型抗原为膜内镶嵌蛋白，相应的Rh抗体多为不完全抗体。因此，常用抗人球蛋白试验（Coombs’test）鉴定Rh血型。（二）血清蛋白型血清蛋白型（Thepolymorphismofserumprotein）又称血清型（Serumtypes），是指由遗传决定的人血清中存在的同一种蛋白质的个体差异，表现为氨基酸排列顺序的差别，进而导致蛋白质的二级结构和立体构象的不同。亲子鉴定常用的血清型系统有：结合珠蛋白（HP）型、维生素D结合蛋白（Gc）型、α1-抗胰蛋白酶（Pi）型、转铁蛋白（Tf）型、间-α-胰蛋白酶抑制剂（ITIH1）型和补体成分等。（三）红细胞酶型红细胞酶型亦即红细胞的同工酶多态性，是指由遗传基因决定的、具有相同催化活性的酶分子一级结构在同一种属不同个体间的遗传差异。亲子鉴定常用的红细胞酶型有：红细胞酸性磷酸酶（EAP）型、酯酶D（ESD）型、葡糖磷酸变位酶1（PGM1）型、乙二醛酶I（GLOI）型和谷丙转氨酶（GPT）型等。（四）白细胞血型人类白细胞膜上存在着三类不同的抗原：红细胞血型抗原（ABH、Lea和Leb等）、白细胞本身特有抗原（CD4和CD8等）及代表个人特异性且与其他组织共有的同种抗原——人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）又称为移植抗原（transplantationantigen）或组织相容性抗原（histocompatibilityantigen）。HLA系统是迄今发现的最复杂的人类遗传标记。HLA基因定位于第6号染色体短臂（6p21.31），形成一组紧密连锁的基因群，称为主要组织相容性复合体。HLA-Ⅰ类抗原是一种膜糖蛋白，主要包括HLA-A、B和C基因的产物，由一条重链和一条轻链构成。该类抗原分布广泛，存在于所有有核细胞，并以可溶性方式存在于自身血清或初乳中。HLA-Ⅱ类抗原主要包括DR、DQ、DP等基因座的产物，由α和β两条糖蛋白链构成。该类抗原的组织分布比HLA-Ⅰ类抗原少得多，主要表达在如B细胞、巨噬细胞和其它抗原递呈细胞的表面。HLA的遗传特征：①共显性遗传

②单倍型遗传

③连锁不平衡HLA抗原分型主要应用微量淋巴细胞毒试验和混合淋巴细胞培养两种方法。二、DNA水平的遗传标记（一）DNA的结构与功能由4种脱氧核糖核酸（简称核苷酸）通过磷酸二酯键聚合而成的多核苷酸链。绝大部分（98%）DNA存在于细胞核内的染色质中。以碱基配对的原则（A与T，G与C）通过氢键彼此相连。极少部分DNA存在于核外线粒体中。生物体的遗传信息表现为DNA分子中核苷酸的排列顺序，并以密码子的形式编码在DNA分子上。（二）DNA多态性的分子学基础DNA多态性是指DNA区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上形式，其本质是生物体在进化过程中DNA的核苷酸排列顺序改变的结果。DNA多态性可分为长度多态性和序列多态性。1、长度多态性（lengthpolymorphism）DNA长度多态性是指在两条同源染色体上，同源DNA片段的核苷酸排列数量存在的个体差异。DNA长度多态性是由于片段插入、缺失或重复序列数目变异所致。⑴散在重复序列：单拷贝DNA序列以其单体形式散在地分布于整个基因组中称为散在重复序列。⑵串联重复序列：具有特定的重复单位，各重复单位头尾相连形成的重复序列称为串联重复序列，又称为卫星DNA。

⑶倒位重复序列

重复单位是互补序列，并在同一条DNA链上呈反向排列的重复序列称为倒位重复序列。小卫星DNA（MinisatelliteDNA）：是由许多长度为6～70bp的串联重复单位组成的DNA序列，又称为可变数目串联重复序列（VariableNumberofTandemRepeats，VNTRs）。这类重复可能源于减数分裂期间的同源染色体或染色体内部的不对等交换。同一小卫星的各个重复单位内含有一个约10～15bp长的保守序列，即核心序列；不同的小卫星DNA之间其核心序列有极高的同源性。小卫星DNA重复单位的重复数目遵循孟德尔遗传规律遗传。图12-2DNA指纹图的应用微卫星DNA（MicrosatelliteDNA）：是一类更简单的寡核苷酸串联重复序列，重复单位为2～7bp，重复次数在10～60次左右，又被称为短串联重复序列（ShortTandemRepeats,STR）。微卫星DNA的产生主要是DNA复制过程中滑动，或DNA复制和修复时滑动链与互补链碱基错配，导致一个或几个重复单位的缺失或插入。STR实质上属于VNTR，同样具有极高的多态性，亦按孟德尔定律遗传。图12-3短串联重复序列结构示意图2.序列多态性（sequencepolymorphism）DNA序列多态性指在两条同源染色体上，同源DNA序列长度相等，但个别核苷酸存在的个体差异。单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，称为单核苷酸多态性（singlenucleotidepoly-morphism，SNP）。这种变异是由碱基的替代、插入或缺失所致。（三）DNA多态性的检测技术1.DNA指纹技术DNA指纹（DNAfingerprint）是指将人类基因组DNA用特定的限制性内切酶消化后，经电泳分离、萨森印迹转移，然后用已知序列小卫星DNA探针根据碱基互补原则与未知基因组DNA杂交，所显示出的由一系列不等距离、相互间隔的多条电泳谱带组成的高度多态性图谱。图谱中的每一条谱带代表一个特定长度的DNA片段，不同个体之间的差异在图谱中主要表现为谱带位置、数目和密度强弱的差异。DNA指纹的实质是基因组DNA的限制性片段长度多态性，它的个体特异性取决于所用限制酶的识别序列特异性和探针的特异性。图12-4DNA指纹图基本实验流程（1）DNA指纹的基本操作过程限制性核酸内切酶（restrictionendonucleaese,RE）：又简称限制酶或内切酶，是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定部位以内切方式水解DNA链的核酸水解酶。这种由于DNA限制酶识别的序列核苷酸结构发生改变，导致酶切位点的产生、消失或移位，酶切所产生的限制性片段数目和长度改变所呈现的DNA多态现象称为限制性片段长度多态性（restrictionfragmentpolymorphisms,RFLP）。分子杂交是特异性探针与待测DNA

多态片段在复性条件下形成稳定异

源DNA双链的过程。DNA指纹的探针有两类：多位点探针（multi-locusprobe，MLP）和单位点探针（single-locusprobe，SLP），前者指在低强度杂交条件下可同时检测基因组DNA中多个VNTR位点的探针，多位点探针检测得到的DNA图谱称为DNA指纹，后者指在高强度杂交条件下，只检测出基因组DNA中单个VNTR多态片段的探针，单位点探针检测得到的DNA图谱称为DNA纹印。（2）DNA指纹的基本特征1）体细胞稳定性2）个体高度特异性3）按孟德尔遗传规律遗传2.聚合酶链式反应聚合酶链式反应（polymerasechainreactionPCR）技术是近年来发展起来的一种快速的体外扩增特异DNA片段的技术，是依赖于靶DNA序列侧翼上所结合的两个寡核苷酸引物在体外由DNA聚合酶催化合成特异性DNA片段的方法。具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等优点。在耐热DNA聚合酶作用下，以一对特异性序列DNA短片段作为引物，利用加热和冷却交替的循环程序，有选择性地放大基