食品微生物检验基础-普通光学显微镜的使用技术

食品微生物与检验普通光学显微镜的使用任务描述任务完成条件任务验收标准操作步骤与标准要求师生互动12345目录正确取放显微镜用低、高倍镜观察细菌的形态用油镜观察细菌的形态一、任务描述每位学生独立完成以下操作：1.金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的染色标本片；2.显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。二、任务完成条件了解普通光学显微镜的构造和工作原理；掌握普通光学显微镜的使用方法；掌握显微镜的保养方法。三、任务验收标准显微镜显微镜的结构机械部分光学部分镜座、镜柱、镜臂、镜筒倾斜关节、转换器载物台目镜、物镜遮光器反射镜目镜镜臂物镜镜柱镜座反光镜遮光器载物台镜筒粗调焦螺旋细调焦螺旋镜头转换器通光孔压片夹光学显微镜构造示意图目镜与物镜的比较放大倍数透镜放大倍数镜头长度透镜大小10x12.5x长短大小放大倍数镜口率镜筒长度盖玻片厚度放大倍数镜头长度透镜大小10x40x长短大小目镜与物镜的比较目镜与物镜的比较镜头透镜大小镜头长短视野亮度物像大小细胞数目镜低倍大长亮小多高倍小短暗大少物镜低倍大短亮小多高倍小长暗大少目镜与物镜的比较普通生物显微镜显微图象系统生物显微镜(含摄影系统)数码生物显微镜其他几种显微镜介绍检测显微镜SFC-86双筒解剖显微镜其他几种显微镜介绍倒置显微镜光路图倒置显微镜偏振光显微镜其他几种显微镜介绍

显微镜是微生物检验中最常用的精密光学仪器。显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。食品微生物检验中最常用的是普通光学显微镜。四、操作步骤与标准要求

用光学显微镜观察微生物形态时，一般遵循先低倍镜观察，后高倍镜观察，再油镜观察。

四、操作步骤与标准要求（一）显微镜的使用方法1.取镜和安放

4.高倍镜观察

2.对光3.低倍镜观察5.油镜观察四、操作步骤与标准要求(1)打开显微镜箱,一手握镜臂,一手托镜座,将显微镜取出。(2)把显微镜放在实验台上自己身体的前方稍偏左，镜座距实验台边沿约10cm，右侧放记录本或绘图纸。(3)让镜筒向前,镜臂向自己,然后安放好目镜和物镜。Part11.取镜和安放显微镜的拿取四、操作步骤与标准要求转动转换器,使低倍镜对准通光孔。转动载物台下的遮光器,选一较大的光圈对准光孔。左眼注视目镜(右眼也要睁开),转动反光镜,使光线通过通光孔反射到镜筒内,通过目镜,可看到白亮的视野。当光线强时,让平面镜对着光源,光线弱的时候,用凹面镜对着光源。自带光源的显微镜，可通过电流旋钮来调节光照强弱。光圈反光镜视野Part12.对光四、操作步骤与标准要求（1）把所要观察的玻片标本放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。（2）眼睛从侧边看着物镜头和标本之间，转动粗调焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止。（3）左眼看目镜内，同时反向缓缓转动粗调焦螺旋，使镜筒上升，直到看到物象为止，再稍稍转动细调焦螺旋，使看到的物象更加清晰。（4）看不到物像的重复第（2）、（3）两个步骤。Part13.低倍镜观察使用显微镜的正确姿势四、操作步骤与标准要求（1）移动装片，在低倍镜下使需要放大的部分移动到视野中央。（2）转动转换器，移走低倍物镜，换上高倍物镜。缓缓调节细准焦螺旋，使物象清晰。（3）调节光圈，使视野亮度适宜。换上高倍物镜后禁止向下转动粗准焦螺旋，且光线需要增强。Part14.高倍镜观察四、操作步骤与标准要求（1）将高倍镜观察到的目标移动至视野中央；（2）将高倍镜镜头挪开，于载玻片上滴一滴香柏油；（3）将载物台下降或镜筒提升约2cm，再将油镜镜头移动至视野，让油镜镜头浸入香柏油（至油晕不再扩大为止）；（4）用微调焦螺旋调至清晰。注意：油镜的操作需要较强的关线，故需将光线调至最强。

（油镜镜筒上通常刻有H.I.OIL或油等标志）Part15.油镜操作四、操作步骤与标准要求油镜用后的处理：第一遍：用擦镜纸拭去镜头上的油；第二遍：用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去头上残留的油迹；第三遍：再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。四、操作步骤与标准要求(1)

显微镜应放在通风干燥的地方，避免阳光直射或曝晒，避免受潮，避免与酸、碱和易挥发的、具腐蚀性的化学试剂等放在一起。(2)显微镜应防止震动。搬动时，要左手握持镜臂，右手托镜座，让显微镜直立于胸前，防止目镜从镜筒脱落。镜检时不能随意移动显微镜。(3)用过油镜的，应先用擦镜纸将镜头上的油擦去，再用擦镜纸蘸着二甲苯擦拭2-3次，最后再用擦镜纸将二甲苯擦去。注意二甲苯用量不能太多。(4)镜头须保持清洁，用软而没有短绒毛的擦镜纸，不能用手、布或其他物品擦拭。普通显微镜的维护与保养

(5)显微镜用后，需将物镜转成“八”字形，勿使物镜镜头与集光器相对放置，同时将物镜下降或将载物台提升以缩短物镜和载物台之间的距离，避免因镜筒脱落或操作不小心，损坏物镜和集光器。

(6)镜检时可通过调整凳子高度以便舒适观察，勿将显微镜倾斜。

(7)观察时，应两眼同时睁开，既能同时绘图，又能减少疲劳。

(8)实验中，显微镜发生故障，应立即向指导老师汇报，不得随意更换显微镜。更不得交换显微镜之间的镜头。

(9)不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。

普通显微镜的维护与保养五、师生互动根据大家对微生物标本片的观察，指出下面分别是什么菌，放大倍数为多少？五、师生互动食品微生物与检验普通光学显微镜的结构及工作原理光学显微镜的原理光学显微镜的结构目录Contents12341、光学显微镜的结构目镜镜臂物镜镜柱镜座反光镜遮光器载物台镜筒粗调焦螺旋细调焦螺旋镜头转换器通光孔压片夹341、光学显微镜的结构机械部分光学部分镜座、镜柱、镜臂、镜筒压片夹、转换器载物台目镜、物镜遮光器反射镜

镜筒

b

镜座a镜座是显微镜的基本支架，是用来安装光学放大系统部件的基础。由底座和镜臂两部分组成，在它上面连接有载物台和镜筒。镜筒上接接目镜，下接物镜转换器，形成接目镜与接物镜(装在物镜转换器下)间的暗室。1、光学显微镜的结构（1）显微镜的机械部分

载物台

d物镜转换器c物镜转换器上可安装3~4个接物镜。转动物镜转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，从而与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。载物台中央有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。1、光学显微镜的结构（1）显微镜的机械部分细调焦螺旋f粗调焦螺旋e粗调焦螺旋是移动镜筒，调节接物镜和标本间距离的机件。粗调焦螺旋每转一圈镜筒或载物台移动2mm左右。用粗调焦螺旋只可以粗放的调节焦距，要得到最清晰的物象，需要用微调焦螺旋做进一步调节。微调焦螺旋每转一圈镜筒或载物台移动0.1mm(100μm)。新式显微镜的粗调焦螺旋和微调焦螺旋是共轴的。

1、光学显微镜的结构（1）显微镜的机械部分b聚光器：聚光器在载物台下面，由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上，以得到最强的照明，使物像获得明亮清晰的效果。a反光镜：在镜座上装有反光镜，可以将投射在它上面的自然光反射到聚光器透镜的中央，照明标本。新式显微镜镜座上装有光源，并有电流调节螺旋，可通过调节电流大小调节光照强度。（2）显微镜的光学系统1、光学显微镜的结构物镜：安装在镜筒前端转换器上，利用光线使被检物体第一次造像。物镜的性能取决于物镜的数值孔径(NA)，每个物镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值孔径越大，物镜的性能越好。

c（2）显微镜的光学系统1、光学显微镜的结构放大倍数数值孔径镜筒长度盖玻片厚度干燥系物镜：以空气为介质，如常用的40×以下的物镜，数值孔径均小于1。

油浸系物镜：常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90×~100×，数值孔值大于1。按透镜与被检物之间介质不同1、光学显微镜的结构（2）显微镜的光学系统低倍物镜:指1×~6×，NA值为0.04~0.15。1、光学显微镜的结构（2）显微镜的光学系统高倍物镜:指25×~63×，NA值为0.35~0.95。中倍物镜:指6×~25×，NA值为0.15~0.40。油浸物镜:指90×~100×，NA值为1.25~1.40。目镜：作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像映入观察者的眼中。目镜的结构较物镜简单，普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成，上端的一块透镜称“接目镜”，下端的透镜称“场镜”。上下透镜之间或在两个透镜的下方装有由金属制的环状光阑或叫“视场光阑”，物镜放大后的中间像就落在视场光阑平面处，所以其上可安置目镜测微尺。d（2）显微镜的光学系统1、光学显微镜的结构BA显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积。物镜的放大倍数越大，分辨率越高；而目镜只能起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜放大倍数为10倍。显微镜的放大效能（分辨率）是由所