植物乳杆菌培养基的优化

植物乳杆菌培育基的优化李达发酵剂是影响发酵产品质量的关键因素,它的制备需要有良好的增菌培育基,使植物乳杆菌得以大量增殖,从而使其在经过喷雾枯燥、冷冻、冻干等处理后有足够的活菌数存活。因此优化植物乳杆菌增菌培育基是一项格外重要的根底争论工作。植物乳杆菌是泡菜、发酵谷物、发酵肉制品等重要发酵剂的组成菌之一。植物乳杆菌K25分别于西藏灵菇中,在对其进展争论时觉察,MRS培育基培育该菌时,菌落总数仅能到达6.7×107cfu·mL-1左右。菌液中活菌数的增加,可以通过培育基的优化设计来实现,因此需要对培育基进展优化,优化,从而获得活菌数较高的菌液,为研制高活力的冷冻枯燥发酵剂及其产品的开发奠定根底。材料与方法试验菌种L.plantarumK25,分别于西藏灵菇。材料与设备;K2HPO4KH2PO4Na2HPO4NaH2PO4和各种糖类均为分析纯。722型分光光度计、立式压力蒸汽灭菌器、超净工作台、分析天平DNG-9240型恒温鼓风枯燥箱。培育基及培育条件MRS培育基,10g10g5g、KH2PO42g、柠2g2g20gTween801mLMgSO4·7H2O0.58gMnSO4·4H2O0.25g,1L,pH6.2~6.4,12115min。MRS培育基为根底,依据试验设计添加不同生长因子,0.5%150mL液体培育基中,3724h方法不同碳源、氮源、磷源的选择MRS液体培育基的根底上,2%(w/v);,2.5%(w/v)作为的不同氮源;分别0.2%(w/v)K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4作为不同磷源,其他组分均一样。在培育基中接入活化后植物乳杆菌,3724h,10倍后,在600nmOD值,MRS培育基为比照,比较其对植物乳杆菌生长的影响状况。培育基的优化承受正交试验设计优化碳源、氮源、磷源的用量,1A因素为蔗糖,B因素为酵母膏,CKH2PO4,OD值。1正交试验因素水平水平LevelFactorABC112.00.1222.50.2333.00.3OD值测定722型分光光度计,10倍后,以一样条件下的未接菌的培育基做参比,在600nm下测定菌液吸光度。菌落计数MRS固体培育基为计数培育基,实行适当的稀释倍数,涂布于平板上,3736~48h后计数。结果与分析碳源对植物乳杆菌生长的影响不同碳源乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖对植物乳杆菌的生长的影响结果见表2。2不同碳源对植物乳杆菌生长的影响种类比照乳糖蔗糖葡萄糖果糖吸光度〔OD〕0.210.180.240.220.202可以看出,植物乳杆菌在蔗糖为碳源的培育基中生长,OD0.24明显高于比照,这可能由于植物乳杆菌K25分别于西藏灵菇中,而灵菇中含有大量的葡萄糖和蔗糖,其中蔗糖能更好的被植物乳杆菌利用,并促进其生长。而在乳糖和果糖为碳源时OD值分别是0.180.20,低于其它碳源,不适于植物乳杆菌的生长,因此确定蔗糖是最正确碳源。氮源对植物乳杆菌生长的影响,牛肉膏,MRS培育基为比照,对植物乳杆菌的3。MRS培育基中氮源为蛋白胨、牛肉膏、酵母膏,3可以看出,植物乳杆菌的生长在以酵母膏为单一氮源时,OD值略高于比照,明显高于植物乳杆菌在其它氮源中的生长可能是由于植物乳杆菌K25分别于西藏灵菇中,所利用的氮源与酵母膏中所含有的氨基酸同源或是氨基酸组成相像;植物乳杆菌在以胰蛋白胨和大豆蛋白胨为氮源时生长效果较差,OD值仅为0.328和0.338;牛肉膏是MRS培育基中的氮源,单独添加时不利于植物乳杆菌的生长,不能很好的促进菌种生长,OD值最低。3不同氮源对植物乳杆菌生长的影响种类比照胰蛋白胨大豆蛋白胨酵母膏牛肉膏吸光度〔OD〕0.390.3280.3380.470.316磷源对植物乳杆菌生长的影响K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4,4可以看出,K2HPO4为磷源时OD0.256,K2HPO4pH,不利于植物乳杆菌的生长;而以KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4为磷源时OD值相差不多,都在0.3左右;原根本培育基中磷源即为KH2PO4,作为生长因子能够很好的促进植物乳杆菌的生长,OD0.38,KH2PO4。4不同氮源对植物乳杆菌生长的影响种类比照磷酸氢二钾K2HPO4磷酸二氢钾KH2PO4磷酸氢二钠Na2HPO4磷酸二氢钠NaH2PO4吸光度〔OD〕0.390.2560.310.280.382.4植物乳杆菌培育基的优化依据单因素试验的结果,设计正交试验,因素A、B、C分别为蔗糖、酵母膏、KH2PO4,以吸光值〔OD600nm〕为评价指标,测定结果和相应的极差分析见表5.5可以看出,各因素对植物乳杆菌的生长影响次序依次是:蔗糖>KH2PO4>酵母膏。蔗糖的添加量是影响指标值的最主要因素,酵母膏添加量对指标值影响最小。5正交试验因素水平试验号Trialnumber因素FactorOD600nmABC11.02.00.10.34721.02.50.20.58631.03.00.30.13542.02.00.20.74452.02.50.30.75562.03.00.10.83673.02.00.10.74383.02.50.30.68793.03.00.20.735K10.3560.6080.623K20.7780.6760.688K30.7190.5960.544R0.4220.1070.144当蔗糖添加量为1%时,不利于植物乳杆菌的生长,随着蔗糖添加量的增加,指标值明显增大,3%时,指标值下降,说明过多的碳源并不利于植物乳杆菌的生长,蔗糖