i第九章 维生素类药物

Theanalysisofvitamins

—Chapter9

维生素类药物的分析

—第九章TheanalysisofvitaminATheanalysisofvitaminETheanalysisofthiamine(B1)TheanalysisofL-ascorbicacid(C)Thestructuresofothervitamins基本要求

掌握维生素A的结构，主要化学性质、鉴别反应及含量测定中的紫外分光光度法了解三氯化锑比色法掌握维生素E的结构、主要化学性质、鉴别反应及含量测定中的气相色谱法了解其他含量测定的方法掌握维生素B1结构、性质、鉴别试验及含量测定方法中的非水滴定法了解其他含量测定方法掌握维生素C结构、性质、鉴别试验及含量测定中的碘量法了解其他含量测定方法了解HPLC在复方维生素测定中的应用

FundamentalrequirementMasteringthestructures,themainchemicalproperties,identificationtestsandtheapplicationofUVspectroscopyinassaysofvitaminA.Understandingthecolorimetricmethodofantimonicchloride.Masteringthestructure,themainchemicalproperties,identificationtestsandtheapplicationofGCinassaysofvitaminE.UnderstandingotherassaysofvitaminE.Masteringthestructure,properties,identificationtestsandthenon-aqueoustitrationofthiamine.Understandingotherassaysofthiamine.Masteringthestructure,properties,identificationtestsandtheiodometrictitrationofL-ascorbicacid.UnderstandingotherassaysofL-ascorbicacid.UnderstandingtheapplicationofHPLCincompoundvitaminsanalysis.TheanalysisofvitaminAStructureandpropertiesStructureThephysicalandchemicalpropertiesIdentificationtestsAssaysUltravioletabsorptionmethod(three-pointgeometriccorrectionmethod)colorimetricmethodofantimonicchloride—Section1StructuresRetinolanditsesters共軛多烯侧链的环己烯CrystalformREmpiricalformulaMolecularweightMeltingpoint－H（Retinol）

－COCH3(Retinylacetate)－COC15H31(RetinylPalmitate)C20H30OC22H32O2C36H60O2

286.44328.48524.84PaleyellowprismsAmorphismorcrystal

62～64℃57～58℃28～29℃1.Ultravioletabsorption维生素A分子中具有共轭多烯醇侧链结构，在325～328nm有强烈最大吸收。2.Easilyoxidation维生素A中有多个不饱和键，性质不稳定，易被氧化，易被紫外光裂解，特别在加热和金属离子存在时，更易氧化变质，生成无生物活性的环氧化物维生素A醛及维生素A酸。3.Colorreactionwithantimonicchloride

维生素A在氯仿中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色4.Solubility维生素A能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶PropertiesIdentificationtests1.Carr-Pricereaction(三氯化锑反应）

维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。

Mechanismofreaction：.↑↓2.Ultravioletabsorptionspectrum

维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶液在波长326nm处有最大吸收峰。当在盐酸催化下加热，则发生去水反应生成脱水维生素A，比维生素A多一个共轭双键，故其最大吸收峰往长波方向移动，同时在350nm～390nm波长之间出现3个最大吸收峰。

维生素A和去水维生素A的紫外吸收光谱1.维生素A2.去水维生素A3.Thin-layerchromatographyBP(1998)鉴别浓缩合成品维生素A（油剂）的各种酯类的方法:

以硅胶G为吸附剂，环己烷-乙醚（80：20）为流动相，以供试品与标准品的环己烷溶液点样，以三氯化锑显色，比较供试品溶液和对照品溶液所显蓝色斑点的位置，即可鉴别。

USP(24)采用的方法:以硅胶为吸附剂，环己烷-乙醚（80：20）为流动相，维生素A的氯仿溶液点样，以磷钼酸为显色剂。

AssaysUltravioletabsorptionmethod

(three-pointgeometriccorrectionmethod)紫外分光光度法（三点校正法）Colorimetricmethodofantimonicchloride三氯化锑比色法UltravioletabsorptionmethodPrinciple

Thismethodisbasedonmeasurementofabsorptionofasolutionofretinolinisopropanolat325nm,whereabsorbanceismaximum.ThemethodisapplicabletopharmaceuticalpreparationsandvitaminAconcentratesinwhichvitaminAcontentisrelativelyhighandamountsofsubstancescausingirrelevantabsorptionarerelativelysmallandcanbecorrectedforbytakingadditionalreadingsat310nmand334nm.Caremustbeexercisedinusingthecorrectionsinceitdoesnotapplyforsomepreparations.Iftocopherolispresent(absorptionmaximum,298nm),acorrectionismadeemployingahydrogenationtechniquetodestroyabsorptionduetoretinol.Solutionswithappreciablecarotenoidsarepurifiedbychromatography,butcarotenoidsaregenerallynotaprobleminsamplestowhichthismethodisapplied.目前各国药典均采用紫外分光光度法（三点校正法）测定维生素A的含量。维生素A在325～328nm波长之间具有最大吸收峰，可用以含量测定，其最大吸收峰的位置随溶剂不同而异。维生素A醋酸酯维生素A醇溶剂λmax,nmE1%1cm

换算因数λmax,nm

E1%1cm

换算因数环己烷327.515301900326.517551900异丙醇3251600183032518201830本法的测定结果较能正确的反映出维生素A的真实生物效价。由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料中混有其他杂质，所以，测得的吸收度不是维生素A所独有。为了消出误差，应用校正公式进行校正。

Method

如供试品中干扰测定的杂质较少，可以直接用溶剂溶解供试品后测定。否则应照皂化法测定含量。

原理：

杂质的吸收在310～340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度变小。Theabsorptionofimpuritiesislinearbetween310nmand340nm.Theabsorbancedecreaseswhilethewavelengthincreases.物质对光的吸收具有加和性。Theabsorptionhasadditivity.

三点波长的选择法Threewavelengths

selection第1点：选择维生素A的最大吸收波长（即λ1）第2点和第3点：在最大吸收波长的两侧各选一点（λ2和λ3）

等波长差法：在λ1的左右各选一点为λ2和λ3，使λ3-λ1＝λ1-λ2。中国药典（2000年版）测定维生素A醋酸酯时，规定λ1＝328nm,λ2＝316nm,λ3＝340nm。

等吸收度法：在λ1的左右各选一点为λ2和λ3，使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。中国药典（2000年版）测定维生素A醇时，规定λ1＝325nm,λ2＝310nm,λ3＝334nm。

Theabsorptionofimpurities对维生素A的测定有影响的杂质：维生素A2和维生素A3(dehydroretinolandanhydroretinol)：维生素A2在345～350nm波长范围内有吸收。维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛和维生素A酸。维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇。维生素A的的异构体。合成时产生的中间体。

这些杂质在310～340nm波长范围内有吸收，因此，在测定维生素A的含量时，必须考虑这些杂质的干扰。三点校正法可以消除这些杂质的影响。

测定法

第一法（适用于维生素A醋酸酯）方法

计算法关于换算因数

A值的选择法

第二法（适用于维生素A醇）

测定方法计算法A值的选用法

Method取维生素A醋酸酯，精密称定，加环己烷制成每1ml中含有9～15单位的溶液。在300、316、328、340、360nm五个波长处分别测定吸收值，确定最大吸收波长（应为328nm）。计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度的比值。

第一法但式中的A值有两种可能，一是直接采用328nm波长下测得的吸收度值，即A328；另一种可能是采用吸收度校正公式计算出的校正值，即A328（校正）。求效价（IU/g）

效价系指每克供试品中所含维生素A的国际单位数（IU/g）。IU/g=E1%1cm×1900,式中1900为维生素A醋酸酯在环己烷溶液中的换算因数。

E1%1cm=

AC·L

求E1%1cm：用A=E1%1cm·C·L公式求得

（式一）Calculation第一法求维生素A醋酸酯胶丸为标示量的百分含量：

标示量%=

A×D×1900×W

W×100×L×标示量

×100%

A为直接测得的A328或校正后的A328

D为供试品的稀释倍数；1900为换算因数；W为胶丸的平均内容物重量；W为称取的内容物重量；L为比色池厚度（cm）；

第一法

Conversionfactor

换算因数的定义为每1个E1%1cm数值所相当的效价。即：

换算因数=

效价（IU/g）

E1%1cm（λmax）

维生素A的含量是用生物效价[国际单位（IU/g）]表示。维生素A的国际单位规定如下：1IU=0.344μg维生素A醋酸酯1IU=0.300μg维生素A醇因此，1g维生素A醋酸酯相当于的国际单位数为：

1×106μg

0.344μg/IU

=2907000IU1g维生素醇相当的国际单位数为：

1×106μg

0.300μg/IU

=3330000IU

第一法

TheselectionofA将五个波长处吸收度比值（即Ai/A328）分别与中国药典（2000年版）规定的吸收度比值相减，即得到五个差值。判断每个差值是否超过规定的±0.02。

波长(nm)测得吸收度

吸收度比值两个比值的差值

药典规定值计算值（规定±0.02）

300A00.555A0/A2

316A10.907A1/A2

328A21.000A2/A2

340A30.811A3/A2

360A40.299A4/A2

第一法如果最大吸收波长在326～329nm之间，并计算得到的五个波长下的差值，均不超过±0.02时，则不用校正公式计算吸收度，而直接用在328nm波长处测得的吸收度A328代入（式一）求出E1%1cm。

如果最大吸收波长在326～329nm之间，但计算得到的波长下的差值，有一个或几个超过±0.02，这时，应按下面的方法判断：

若A328（校正）－A328

A328×100%所得的数值在±3%，则仍不用校正公式计算吸收度，而直接用A328代入公式中求出E1%1cm；

判断法第一法若A328（校正）－A328

A328×100%

所得的数值在－15%～－3%之间，则需用校正公式算吸收度，即用A328（校正）代入公式中求出E1%1cm；若A328（校正）－A328

×100%所得的数值小于－15%或大于＋3%，则不能用本法测定，而采用后面的第2法（皂化法）测定含量。A328第一法

如果最大吸收波长不在326～329nm之间，则不能用本法，而应采用后面的第2法（皂化法）测定含量。用第2法测定

用A328（校正）计算

用A328计算

用第2法计算

第一校正法的公式为：

A328（校正）=3.52（2A328－A316－A340）

第一法±0.02－15%～－3%＋3%

用紫外分光光度法（三点校正法）测定维生素A醋酸酯胶丸含量时：取内容物39.1mg，加环己烷溶解并稀释至100ml，在下列波长下测定吸收度为：300nm：0.390；316nm：0.607；328nm：0.671；340nm：0.550；360nm：0.224。已知胶丸内容物平均重量为0.08736g、胶丸标示量为3000IU/丸。试求：标示量%=？

第一法Exercises

Method精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶液后煮沸回流，得到皂化液。经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为9～15单位的溶液。在300、310、325、334nm四个波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为325nm）。

第二法

公式中的A值，可能是325nm波长下测得的吸收度A325，也可能是用校正公式计算出的吸收度校正值A325（校正）。E1%1cm=

AC·L

求E1%1cm：用A=E1%1cm·C·L公式求得

（式一）求效价（IU/g）

求维生素A醇胶丸的标示量百分含量：

IU/g=E1%1cm×1820标示量%=

A×D×1820×WW×100×L×标示量

×100%

第二法Calculation

TheselectionofA

如果最大吸收波长在323～327nm之间，而且A300/A325的比值小于或等于0.73，按下法判断：1.若A325（校正）－A325

A325×100%所得的数值在±3%，则仍不用校正公式计算吸收度，而直接用A325代入（式一）中求出E1%1cm；

2.若所得的数值超过±3%，则需用校正公式计算吸收度，即用A325（校正）代入式中求E1%1cm。3.如果最大吸收波长不在323～327nm之间或A300/A325的

比值，大于0.73时，表示供试品中杂质含量过高，应采用色谱法将未皂化部分纯化后再进行测定。第二法校正公式：A325（校正）=6.815A325－2.555A310－4.260A334

第二法Explanation

维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导出来的；维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或6/7定位法）推导出来的。在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸峰的两侧上升或下降陡部的波长处进行测定。仪器波长的准确度，会影响测定，故在测定前务必要校正波长。中国药典收载的维生素A胶丸、维生素AD滴剂、维生素AD胶丸等均采用本法测定含量。

第二法Colorimetricmethod

TheassayisbasedonthemeasurementoftheunstablebluecolorresultingfromreactionofvitaminAandantimonychlorideinnon-aqueouschloroform.Withincertainlimits,absorbanceat620nmisafunctionofvitaminAconcentration.Principle

Somecriticalpointsofthemethodare:freedomfrommoisture(withSbCl3reagent);subduedlightconditions;andremovalofcarotenoidsinthefinalextractbeforecolorimetry,orcorrectionforthem.原理：维生素A与三氯化锑的无水氯仿溶液作用，产生不稳定的蓝色，在618～620nm波长处有最大吸收，符合Beer定律。

1.颜色稳定性:产生的蓝色不稳定，要求操作迅速，一般规定加入三氯化锑后应在5～10s内测定。2.无水:反应介质需无水，否则使三氯化锑水解产生SbOCl而使溶液混浊，影响比色。3.温度:温度对呈色影响很大，样品测定时的温度与绘制标准曲线时温度相差应在±1℃以内。4.专属性:本反应并非维生素A专属，在相同条件下，某些有关物质均与三氯化锑显蓝色，干扰测定，使结果偏高。三氯化锑试剂有强的腐蚀性，易损坏皮肤和仪器。

Precaution

TheanalysisofvitaminEThestructureandpropertiesThestructureThephysicalandchemicalpropertiesTheidentificationtestsTestforfreetocopherolAssaysGaschromatographyCeriumetrictitrationHPLC—Section2

Structure

Ithasα,β,γandδfourisomers.Thephysiologicalactionofα-isomeristhestrongestofall.苯并二氢吡喃醇衍生物Properties

Solubility维生素E为微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中,不溶于水.Ultravioletabsorption

本品结构中苯环上有酚羟基，故有紫外吸收，其无水乙醇液在284nm波长下有最大吸收，其吸收系数为41.0～45.0.Oxidation

在无氧或其他氧化剂存在时，在酸性或碱性溶液中，加热可水解生成游离生育酚；在有氧或其他氧化剂存在时，则进一步氧化成醌型化合物。在碱性条件下加热，这种氧化作用更易发生。

IdentificationtestsNitricacidreactionRedoxafterhydrolyzingreaction

UltravioletspectroscopyThin-layerchromatography

Nitricacidreaction

本品约30mg加无水乙醇10ml

溶解

加硝酸2ml

溶液（橙红色）加热15min

75℃

Drugs30mg

non-aqueousethanol10ml

Dissolving

nitricacid2ml

Solution（salmon）Heating15min

75℃

水解后氧化反应

本品约10mg

醇制KOH试液2ml

煮沸5min

放冷

加水4ml

乙醚10ml

振摇静置

溶液分层

（取乙醚液2ml）

加2，2′-联吡啶

乙醇溶液

三氯化铁

乙醇溶液

溶液(血红色)

Redoxafterhydrolyzingreaction

Drugsabout10mgPotassiumhydroxidesolution2ml

Boiling5min

Cooling

Addingwater4ml

ether10ml

Shakingandstanding

ethersolution

Adding2，2′-dipyridine

Ethanolsolution

Ferricchloride

Ethanolsolution

Solution(sanguine)

Preparedbyethanol

Ultravioletspectrum本品的0.01%无水乙醇液在波长284nm处有最大吸收；在波长254nm处有最小吸收，可资鉴别。Thin-layerchromatography

将供试品点于硅胶G薄层板上，以环己烷-乙醚（4：1）为展开剂，展开10～15cm后，取出，于空气中晾干，喷以浓硫酸，在105℃加热5min，α-生育酚、α-生育酚醋酸酯、α-生育醌的Rf值分别为0.5、0.7和0.9。Impurities:freetocopherol

利用游离生育酚的还原性，用硫酸铈滴定液（0.01mol/L）滴定，以二苯胺为指示剂。中国药典维生素E其中所含的游离生育酚不得超过2.15%[BP(1998)规定不得超过1.0%]。Tocopherolistitratedbyceriumsulfate.Theindicatorisdiphenylamine.InChp,vitaminEcontainsnotmorethan2.15percentoffreetocopherol,Assays

GaschromatographyCeriumetrictitrationHigh-performanceliquidchromatographyDeterminationofvitaminAandvitaminEinhumanserumbyRP-HPLC

GaschromatographyConditionsandsystemsuitabilityCarriergas:nitrogen.Stationaryphase:silicone(OV-17).Support:diatomaceousearth,whichiswashedbyacidandthensilanized.Columntemperature:265℃.Detector:flameionizationdetector.Columnefficiencyabove500(vitamineE).Resolution:betweenthepeaksofvitamineEandtheinternalstandardsubstanceismorethan2.校正因子测定

取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml。密塞，振摇使溶解，取1～3μl注入气相色谱仪，计算校正因子。测定方法

取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

Calculation

校正因子（f）=As/ms

Ar/mrAs—内标物质的峰高或峰面积Ar—对照品的峰高或峰面积ms

—加入内标物质的量,mgmr—加入对照品的量,mg

含量（mx）=f×Ax

As′

/ms

Ax—供试品峰高或峰面积As′—内标物质得峰高或峰面积mx—供试品的量，mgms、f—意义同上Ceriumetrictitration(ChP77)由于硫酸铈溶于酸性水而不溶于醇，游离生育酚溶于醇而不溶于水，因此，在滴定中两者有析出的可能，使终点不明显，影响测定结果。本法仅适用于纯度高的维生素E，对于杂质较多的供试品采用本法时，由于终点不明显而使结果不准确。本法必须先将维生素E水解成生育酚后才能测定。

CharacteristicsDiscussion

由于硫酸铈溶于酸性水而不溶于醇，游离生育酚溶于醇而不溶于水，故溶液需有一定量的乙醇，乙醇浓度太高或太低均使硫酸铈和生育酚析出，使终点不明显，影响测定结果。Principle2+CircumfluenceHighperformanceliquid

chromatography(JP13)色谱条件

色谱柱为内径4mm，长15～30cm的不锈钢柱，填充以粒径5～10μm的十八烷基键合硅胶固定相。流动相为甲醇-水（49:1），紫外检测器，波长为292nm。生育酚比醋酸生育酚先出峰，且二峰的分离度应大于2.6。重现性试验：重复试验3次，峰高的相对标准偏差小于0.8％。

Principles

Agaseousmobilephaseflowsunderpressurethroughaheatedtubeeithercoatedwithaliquidstationaryphaseorpackedwithliquidstationaryphasecoatedontoasolidsupport.Theanalyteisloadedontotheheadofthecolumnviaaheatedinjectionportwhereitevaporates.Itthencondensesattheheadofthecolumn,whichisatalowertemperature.Theoventemperatureistheneitherheldconstantorprogrammedtorisegradually.Onceonthecolumnseparationofamixtureoccursaccordingtotherelativelengthsoftimespentbyitscomponentsinthestationaryphase.Monitoringofthecolumneffluentcanbecarriedoutwithavarietyofdetectors.

—GC

Apparatus

Agaschromatographconsistsofacarriergassource,aninjectionport,column,detector,andrecordingdevice.

—GC

Applications

1.Theidentificationofsomeunformulateddrugs,particularlywithregardtodetectionofprocessimpurities.2.Limittestsforsolventresiduesandothervolatileimpuritiesindrugsubstances.3.Sometimesusedforquantificationofdrugsinformulations,particularlyifthedruglacksachromophore.4.Measurementofdrugsandtheirmetabolitesinbiologicalfluids.—GCAdvantages

1.Capableofthesamequantitativeaccuracyandprecisionashigh-pressureliquidchromatography(HPLC),particularlywhenusedinconjunctionwithaninternalstandard.2.HasmuchgreaterseparatingpowerthanHPLCwhenusedwithcapillarycolumns.3.Readilyautomated.4.Canbeusedtodeterminecompoundswhichlackchromophores.5.Themobilephasedoesnotvaryanddoesnotrequiredisposaland,evenifheliumisusedasacarriergas,ischeapcomparedtotheorganicsolventsusedinHPLC.—GC

Limitations

1.Onlythermallystableandvolatilecompoundscanbeanalyzed.2.Thesamplemayrequirederivatisationtoconvertittoavolatileform,thusintroducinganextrastepinanalysisand,potentially,interferants.3.Quantitativesampleintroductionismoredifficultbecauseofthesmallvolumesofsampleinjected.4.Aqueoussolutionsandsaltscannotbeinjectedintotheinstrument.—GCTheanalysisofthiamineThestructureandproperties

structure

propertiesTheidentificationtestsAssays

Non-aqueoustitrationSilicotungsticacidgravimetricmethodUltravioletspectroscopyThiochrome-fluorescence—Section3Structure

由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐。··Properties

Solubility本品在水中易溶，水溶液显酸性反应；在乙醇中微溶，在乙醚中不溶；

Ultravioletabsorption

本品的12.5μg/ml盐酸溶液（9→1000），在246nm波长处测定吸收度，吸收系数为406～436。Oxidation在碱性中，遇氧化剂铁氰化钾可被氧化为具有荧光的硫色素，后者溶于正丁醇中显蓝色荧光。

Reactionwithalkaloidprecipitationreagents分子中含有两个杂环（嘧啶和噻唑环）可与某些生物碱沉淀试剂反应生成组分恒定的沉淀。

IdentificationtestsThiochromereaction

维生素B1在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇显蓝色荧光。

Precipitationreaction维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀[B]·H2HgI4。维生素B1与碘生成红色沉淀[B]·HI·I2。维生素B1与硅钨酸生成白色沉淀[B]2·SiO2(OH)2·12WO3·4H2O。维生素B1与苦酮酸生成扇形白色结晶。

Assays

Non-aqueoustitration

中国药典(2000)用本法测定维生素B1原料的含量。

Principle：维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用。根据消耗高氯酸的量即可计算维生素B1的含量。

Titer：每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于16.86mg的C12H17ClN4OS·HCl。

Silicotungsticacidgravimetricmethod(ChP90)

Principle：

维生素B1在酸性溶液中与硅钨酸作用产生沉淀，根据沉淀的重量和供试品的重量即可计算含量。Titer：

1g沉淀相当于0.1939g维生素B1。

取样量宜在50mg左右，不得少于25mg，否则产生的误差大。干燥温度恒定在80℃，以保证生成的沉淀含4分子结晶水，使换算因数为0.1939。为了得到易过滤的沉淀，在酸性溶液中进行沉淀。酸量不足时，所得沉淀过细，可通过过滤器造成损失；酸量稍过则无妨碍，因为维生素B1在酸性溶液中稳定。硅钨酸用量与维生素B1的量为8：1。若试剂量太少则结果偏低；如硅钨酸不纯，则需增加用量。其他因素如沉淀剂加入的快慢、煮沸时间长短及沉淀的洗涤等，也直接影响测定的结果。

Conditions

Principle

维生素B1分子中具有共轭双键结构，故具紫外吸收，在一定波长下测定吸收度即可定量。

Application

中国药典（2000年版）收载的维生素B1片和维生素B1注射液，均采用本法测定。

Ultravioletspectroscopy

Thiochrome-fluorescence(USP)

原理硫色素反应为维生素B1的专属反应，在一定条件下形成的硫色素与维生素B1浓度成正比，可用于维生素B1及制剂的含量测定。

Principle:

Underbasicconditions,reactionwithferricyanide,thiaminecouldbeoxidizedtoformthiochrome,whichpossessesspecificfluorescence(blue,435nm)afterextractedbyisobutylalcohol.

ExtractionConversiontothiochromeSeparationofthio-chromesolutionPreparationofblankMeasurementofthiochrome

Calculation

Procedure:

FluorescencespectrophotometryCertainmolecules,particularlythosewithachromophoreandarigidstructure,canbeexcitedbyUV/visibleradiat