渔药及其使用技术-药敏试验

项目二渔药及其使用技术任务十药敏试验supermansuperbacteria（超级细菌）一、耐药性耐药性：病原体与药物多次接触后，对药物的敏感性下降甚至消失，致使药物对该病原体的疗效降低或无效。（视频1截1分43秒至2分40秒，声音保留）耐药机制细菌是如何产生耐药性的呢？1.细菌对抗菌药物的外排泵出作用（视频1截5分10秒至6分01秒，声音保留）2.抗菌药作用靶位结构改变（视频1截3分28秒至4分17秒，声音保留）3.产生灭活抗菌药物的酶（视频1截4分35秒20至5分01秒，声音保留）（视频1截6分05秒至9分09秒，声音保留）合理选用有效的抗菌药，轮换用药。项目二渔药及其使用技术任务十药敏试验二、药敏试验最常用的药敏试验纸片扩散法细菌对抗菌药物的敏感试验，简称药敏试验。药敏试验是指在体外测定药物抑制或杀死细菌的能力。纸片扩散法的操作步骤1.制备牛肉膏蛋白胨培养基2.病原菌的分离培养3.制备菌悬液4.制备药敏片5.药物敏感试验6.筛选敏感药物制备牛肉膏蛋白胨培养基称量：营养琼脂33g，水1000ml。牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlPH7.4——7.6琼脂15g溶解：在烧杯或电磁炉锅中加入各成分，加热溶解。分装：将配制的培养基分装于三角瓶，用封口膜包扎。灭菌：将培养基以121℃，灭菌20min。倒平板：分装平板病原菌的分离培养用75%酒精棉消毒病鱼体表，无菌采集肝、脾、肾脏或体表溃烂等部位，在平板上进行划线接种。做好标记后将平板倒置放入37℃培养箱中培养。从培养18-24小时的平板上挑取5-8个菌落于1ml灭菌生理盐水中制成菌悬液。校正浓度至0.5麦氏标准制备药敏片用打孔机将定性滤纸打成直径6mm的圆片，每100片放入一小瓶中，高压灭菌后60℃烘干。将治疗浓度的待测抗菌药物溶液1ml加入100片纸片中，浸泡1-2小时。烘干后，将药敏片装入无菌瓶中，低温保存备用。药敏试验用已灭菌的棉拭子蘸取已制备的菌悬液均匀涂布于平板表面。划动三次，每次划动时，平皿转60度，最后绕平皿一周，在室温中干燥数分钟。用无菌镊子将药敏片贴于含菌平板上，每个平板贴4-6片，纸片要贴均匀，各纸片中心相距不小于24mm，纸片距平板边缘不小于15mm,各纸片间距相等。将平板倒置在37℃培养箱中培养16-18小时后观察结果。筛选敏感药物抑菌圈直径（毫米）敏感度20以上极敏15——20高敏10——14中敏10以下低敏0不敏根据药敏纸片周围抑菌圈直径的大小，判定细菌对药物的敏感程度。在治疗过程中，发现以前用过的药，现在疗效弱或无疗效。项目二渔药及其使用技术任务十药敏试验supermansuperbacteria（超级细菌）一、耐药性耐药性：病原体与药物多次接触后，对药物的敏感性下降甚至消失，致使药物对该病原体的疗效降低或无效。（视频1截1分44秒至2分35秒，声音保留）耐药机制细菌是如何产生耐药性的呢？1.细菌对抗菌药物的外排泵出作用（视频1截5分12秒至5分47秒，声音保留）2.抗菌药作用靶位结构改变（视频1截3分28秒至4分17秒，声音保留）3.产生灭活抗菌药物的酶（视频1截4分36秒至4分58秒，声音保留）合理选用有效的抗菌药，轮换用药。二、药敏试验最常用的药敏试验纸片扩散法细菌对抗菌药物的敏感试验，简称药敏试验。药敏试验是指在体外测定药物抑制或杀死细菌的能力。纸片扩散法的操作步骤1.制备牛肉膏蛋白胨培养基2.病原菌的分离培养3.制备菌悬液4.制备药敏片5.药物敏感试验6.筛选敏感药物制备牛肉膏蛋白胨培养基称量：营养琼脂33g，水1000ml。牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlPH7.4——7.6琼脂15g溶解：在烧杯或电磁炉锅中加入各成分，加热溶解。分装：将配制的培养基分装于三角瓶，用封口膜包扎。灭菌：将培养基以121℃，灭菌20min。倒平板：分装平板病原菌的分离培养用75%酒精棉消毒病鱼体表，无菌采集肝、脾、肾脏或体表溃烂等部位，在平板上进行划线接种。做好标记后将平板倒置放入37℃培养箱中培养。从培养18-24小时的平板上挑取5-8个菌落于1ml灭菌生理盐水中制成菌悬液。校正浓度至0.5麦氏标准制备药敏片用打孔机将定性滤纸打成直径6mm的圆片，每100片放入一小瓶中，高压灭菌后60℃烘干。将治疗浓度的待测抗菌药物溶液1ml加入100片纸片中，浸泡1-2小时。烘干后，将药敏片装入无菌瓶中，低温保存备用。药敏试验用已灭菌的棉拭子蘸取已制备的菌悬液均匀涂布于平板表面。划动三次，每次划动时，平皿转60度，最后绕平皿一周，在室温中干燥数分钟。用无菌镊子将药敏片贴于含菌平板上，每个平板贴4-6片，纸片要贴均匀，各纸片中心相距不小于24mm，纸片距平板边缘不小于15mm,各纸片间距相等。将平板倒置在37℃培养箱中培养16-18小时后观察结果。筛选敏感药物