营养型新月组培快繁技术研究

营养型新月组培快繁技术研究

玫瑰是蔷薇科的一种多年生草本植物。17世纪传入欧洲。它现在在世界各地销售。它是世界上培育的多年生木本花之一。在国外,月季花卉工厂化育苗技术已趋成熟,在某些国家和地区已成为获得巨额外汇的支柱产业。我国月季的组织培养技术产业化研究起步较晚,与国外相比差距较大。该试验通过对月季组织培养,研究茎段外植体的选择及不同种类、质量浓度的植物激素配比对茎段快繁的影响,以期找出月季快繁的最适培养基配方,为完善组培快繁技术、大规模工厂化生产名优月季品种奠定基础。1试验材料和方法1.1试验材料月季的带芽枝条作为试验材料。1.2芽孢芽孢分及其诱导分增殖培养a.外植体的消毒取带有饱满、未萌发侧芽的茎段作为外植体,先经流水冲洗l0min后,用洗衣粉水浸泡l0min,再在流水下冲洗净,接着在无菌条件下,用75%乙醇浸泡30s后,用无菌水冲洗3~4次,然后置于0.1%升汞溶液中处理7~10min,最后用无菌水冲洗4~6次,放到无菌滤纸上吸干水分,切成每段长1.0~l.5cm,接种于芽诱导培养基上。b.不定芽的诱导和分化根据枝条生长部位,分基部、中段和梢部3个部分,分别接种于分化培养基上,基本培养基为MS+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L(pH值5.8),每瓶接种5个带芽茎段,每个配方接种5瓶。培养条件为:培养温度(24±1)℃,光照强度1500lx,光照时数14h/d,30d后统计再生情况。c.不定芽的增殖在增殖过程中是由芽丛分成单芽来实现快速繁殖的。将萌芽切下转入继代培养基,进行增殖培养,培养条件同上。d.无菌嫩茎的生根培养取2~3cm长的月季无菌嫩茎,按照无菌要求接种在生根培养基上,分别置于13、17、21、25、29℃等5种不同温度的光照培养箱内培养,光照时间为14h/d,光照强度为2000lx。每一处理为20瓶培养物。e.驯化及移栽当根长1~2cm时移栽,先将瓶口纸打开,倒入少量水适应2~3d后,将带根的小植株从瓶中取出,洗净根部培养基,移栽到装有培养土的营养钵中,保持较高温度。2试验结果与分析2.1业务激素对3种外生菌在培养基上的生长的影响将月季的茎段接种在MS附加不同激素的诱导分化培养基上,5d后侧芽开始膨大,15d左右分化芽逐渐形成幼苗,幼苗继代在相应的培养基上,形成丛生不定芽。表1为月季中部枝条在不同激素的培养基上的生长状况。由表1可以看出,在细胞分裂素BA和KT中,以BA的效果最好,BA的质量浓度在0.5~1.0mg/kg比较合适。在MS+BA1.0mg/kg的培养基上,不定芽的分化率较高,达72%。生长素以NAA优于IBA。2.2d结构模型将分化的不定芽在相应的培养基中进行继代培养,继代周期为20d,结果见表2。由表2可知,在MS+BA1.0mg/kg+NAA0.5mg/kg培养基中继代培养,可保证较高的增殖率和良好的生长状态。2.3第713d,下充液芽萌发从诱导启动的时间看,在枝条中部的带芽茎段,通常在接种后的第5d左右芽就萌发,而基部和梢部的茎段,芽的萌发要在第11~13d才开始,中部茎段芽的诱导率(48%)也要高于基部和梢部的茎段(36%)。2.4不同培养基的诱导生根性能月季组培苗生根常用的激素有IBA和NAA,采用1/2MS作基本培养基。将生长良好、高2~3cm的健壮的月季嫩芽,接种到1/2MS+IBA和1/2MS+NAA两种生根培养基上,每一配方接种30个嫩芽。5~7d开始长出新根,经20d培养后长成完整植株,各种培养基对生根的影响差异明显(见表3)。由表3可以看出,NAA和IBA对月季的诱导生根都有较好的效果,在1/2MS培养基附加NAA或IBA0.1~1.5mg/kg均可诱导不定根的产生,生根63.3%~93.3%。比较诱导率和根的生长特点,发现月季芽诱导生根需要一定质量浓度的生长素,质量浓度过低,生根的诱导率低,但质量浓度过高,往往在根与芽之间形成较多的愈伤组织,不利于植株的生长。从该研究的结果可看出,0.50mg/kg的生长素质量浓度诱导生根的效果最佳。比较NAA与IBA诱导生根的效果,发现NAA要优于IBA。在含0.5mg/kgIBA的培养基中,诱导率为76.7%;在含0.5mg/kgNAA的培养基中,诱导率为93.3%。2.5温度对嫩茎生根的影响无菌嫩茎接种到生根培养基上以后,逐步形成带有根系的植株。接种后20d观察嫩茎生根情况(统计1cm以上的新根数目)。结果发现,在不同的温度下其生长情况有很大的差异。在21℃时嫩茎生根数目最多,而且嫩茎生根的百分率也最高,然而在温度低于或高于21℃时,嫩茎生根数目均较21℃时减少,同时嫩茎生根的百分率降低,呈现出一个明显的生根数量变化趋势。由此说明生根阶段对温度的变化非常敏感,且在21℃时生根效果最好。3苗木移栽工艺月季组织培养过程中,合适的激素配比的选择除了要考虑增值系数外,还应考虑不定芽的质量。增值系数过大,往往会导致芽生长细弱、节间拉长等现象,出现不易生根或移栽成活率下降等问题。根苗移栽时间的选择很重要,过早或过晚都不利再生苗的成活。移栽前进行短期的开瓶炼苗,可增加幼苗对外界环境的适应能力,提高了成活率。4不同浓度g和b.生长素组g的浓度对芽胞分裂的影响a.在月季初代培养中以细胞分裂素BA1.0mg/kg时加生长素NAA0.1mg/kg是比较适