高效液相色谱法测定酮康唑乳膏中酮康唑的含量

高效液相色谱法测定酮康唑乳膏中酮康唑的含量

酮康唑乳膏是一种乳腺癌药物。这种有效的异丙酮醇是一种抗真菌药物。它被用于治疗体虱、银屑病、湿疹和神经皮炎。中国药典(1)采用萃取-紫外分光光度法进行含量测定,由于该法操作繁琐,影响因素多,专属性不强,因而有一些采用HPLC法测定酮康唑乳膏含量的报道。笔者对这些方法进行了初步筛选,发现其耐用性均不理想,对色谱柱选择性较高,而采用本文建立的高效液相色谱方法测定酮康唑乳膏中酮康唑的含量,耐用性良好并且快速、简便、准确。为中国药典(1)酮康唑乳膏含量测定方法的改进提供了一定的参考依据。一、仪器和试剂盒1.仪器岛津LC-10AT-SPD10A色谱系统2.试剂及其仪器酮康唑标准品(中国药品生物制品检定所);四丁基硫酸氢铵:色谱纯中国医药(集团)上海化学试剂公司;无水乙醇:分析纯北京化工厂;乙腈:色谱纯Merck;水为去离子水。酮康唑乳膏(批号:20030701;20030702;20030703;规格:10g∶0.2g)及空白辅料:北京清华紫光制药厂。二、试验方法和结果1.对照品溶液的制备分析柱为ThermoC18(5μm,150×4.6mm),流动相为0.34%四丁基硫酸氢铵溶液-乙腈(75∶25),流速0.9ml/min,检测波长223nm。进样分析对照品溶液,记录色谱图(见图1)。酮康唑色谱峰的保留时间为7.699min,理论塔板数以酮康唑峰计算为8419。2.空白辅料含量测定取酮康唑乳膏样品(批号20030701)与空白辅料样品,按照样品处理方法配制样品溶液与空白基质溶液,精密量取10μl注入液相色谱仪。色谱图见图1。结果表明辅料不干扰测定。3.标准曲线的绘制精密称取酮康唑对照品约40mg至100mL容量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释成0.4mg/mL的对照储备液,精密量取2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0mL分别置50mL量瓶中,用无水乙醇定容。精密量取10μL注入液相色谱仪,得到浓度C(μg/mL)与峰面积A的线性方程。结果表明,酮康唑在18μg/mL～72μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为:C=-0.5003+2.167A×10-5,r=0.99994.标准曲线与定量限取酮康唑对照品适量,配制成浓度为0.4mg/mL的溶液,逐步稀释后,精密量取10μl注入液相色谱仪,测得定量限为40ng/mL(S/N=10)。5.加标回收率试验根据处方比例精确配制含酮康唑为标示量80%、100%、120%的模拟样品9份,按样品测定项下方法操作,得平均回收率,结果为100.3%(n=9),RSD=1.62%。6.精密度6.1进样检测取样品(批号20030701),依样品处理方法制得供试品溶液,精密量取10μL,重复进样6次,记录峰面积,平均值为2033,RSD为0.16%(n=6)。另在第1、2、3d各进样1次,记录峰面积,RSD为1.56%(n=3)。6.2a色谱系统配置用样品含量(批号为20030701)测定值的RSD表示。结果为:采用岛津LC-10AT-SPD10A色谱系统配ThermoC18(5μm,150×4.6mm)色谱柱测定,酮康唑的含量为101.5%,RSD为1.37%(n=6);用Agillent1100色谱系统配SHISEIDOC18(5μm,250×4.6mm)色谱柱测定,酮康唑的含量为102.0%,RSD为1.48%(n=6)。7.hplc测定取3个批号的样品,精密称取适量(约相当于酮康唑40mg)置100mL量瓶中,加入无水乙醇约60mL,置80℃水浴中加热数分钟,振摇,使酮康唑溶解,放冷至室温,无水乙醇定容至刻度,摇匀,置冰浴2h以上,取出后迅速滤过,放至室温,精密量取续滤液5mL至50mL量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,精密量取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,3批样品中的含量见表1。8.siseidocd8m,20m采用了5个品牌的色谱柱进行试验,分别为:ThermoC18(5μm,150×4.6mm);SHISEIDOC18(5μm,250×4.6mm);PhenomenexC18(4μm,150×4.6mm);InertsilC18(5μm,150×4.6mm);AlltechC18(5μm,150×4.6mm),结果峰形良好,理论塔板数均在5000以上。三、讨论1.样品处理本文参考了相关文献(2,3,5)采用了无水乙醇80℃水浴溶解,然后冰浴2h过滤能有效的去除乳膏基质,减少基质对色谱柱的损害和影响。2.流动相组成的色谱柱笔者初期用4个品牌的色谱柱筛选了4种流动相组成:分别为甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾(pH7.40)(75∶25)(3)、甲醇-水(74∶26)(4)、甲醇-0.02mol/L磷酸氢二钠(70∶30,含0.2%三乙胺,稀磷酸调节pH至6.9±0.1)(5)、80%甲醇(含0.05%三乙胺)(6),耐用性均不太理想,以第一种流动相组成为例,在4个品牌的色谱柱中,仅在InertsilC18(5μm,150×4.6mm)条件下,峰形较好,达到检测要求,其他色谱柱条件下出现了前延峰与肩峰,无法正常检测。后参考美国药典(7)酮康唑口服混悬剂项下的含量测定用色谱条件,取得满意的试验结果,耐用性良好